The invention discloses a method for detection of Haemophilus parasuis LAMP method, the method including material preparation, LAMP primer design and synthesis, bacterial pretreatment, LAMP reaction system was established and detected by LAMP method, LAMP detection method is specific, sensitive detection of fluorescence detection and visual detection, which primers including outer primers and inner primers. Confirm the specificity of detection and sensitivity detection, LAMP detection method provided by the invention only needs to establish the system of sample can be real-time detection reaction and quantitative detection of copy number of Haemophilus parasuis, rapid and accurate detection results, bring convenience for simple and rapid detection of Haemophilus parasuis.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及微生物检测
，具体说是涉及一种快速、实时定量检测副猪嗜血杆菌的LAMP方法。
技术介绍
副猪嗜血杆菌(HPS)是一种不运动性、小型、NAD依赖、多形态的革兰氏阴性杆菌，是猪上呼吸道的一种常在菌。卫生状况良好和较为健康的猪群，当遭遇应激因素易暴发该菌引起的病，常引起猪的多发性浆膜炎、关节炎以及脑膜炎，影响2周龄到4月龄的青年猪，主要在断奶前后和保育阶段，5周龄I周龄的猪发病率达40%，严重时死亡率达50%。目前国内对副猪嗜血杆菌的诊断主要有传统的病原分离、血清学以及基于PCR的检测方法。病原学方法是对细菌的分离和鉴定，副猪嗜血杆菌对营养要求较高，且菌株比较脆弱，从病科中分离率较低。副猪嗜血杆菌各血清型之间存在交叉反应，血清学诊断结果不一致且不准确。常规PCR检测方法是选择副猪嗜血杆菌的16S rRNA的基因序列在保守区域内设计引物，16S rRNA可以作为种属的划分依据但却不能区分巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌，且在检验中容易误检造成假阳性。 本专利技术以副猪嗜血杆菌的infB基因作为检测目标，16SrRNA中的基因序列设计合成引物。infB是副猪嗜血...
【技术保护点】
一种检测副猪嗜血杆菌的LAMP方法，其特征是：该检测方法包括材料的准备、LAMP引物的设计与合成、细菌的前处理、LAMP反应体系建立以及采用LAMP检测方法，所述的LAMP检测方法是采用特异性检测、敏感性检测和荧光可视化检测的方法，反应温度为63℃、反应在20?35min间出现扩增，引物包括外引物和内引物，所述的外引物是F3和B3；所述的内引物是FIP和BIP；其中引物的序列分别为：F3??CGAAAGCAACGGATATCGTB3??CACCACCGAATTTCTCAGAAFIP?CTGCTTTCGCGTGTTGGATTGCTCTTGTAGTAGCAGCTGACGBIP?...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：陈泽祥，李军，彭昊，杨威，许力干，谢宇舟，禤雄标，胡帅，马春霞，谢永平，潘艳，
申请(专利权)人：广西壮族自治区兽医研究所，
类型：发明
国别省市：
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