用于在免疫测定中减少白细胞干扰的磁珠制造技术

提供了用于在分析物免疫测定中减少来自白细胞的干扰的方法和设备。在一个实施方案中，提供了方法，所述方法包括下列步骤：利用针对白细胞进行了调理作用的磁性消耗珠子修正生物样品，将样品中的白细胞与磁性消耗珠子结合，以及通过磁性保留珠子而不与免疫传感器接触。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及在用于利用免疫测定法测定分析物在血液样品中的存在或浓度的装置和方法中减少或消除来自血沉棕黄层(buffy coat)组分、特别是白细胞的干扰。具体地，本专利技术涉及通过用受调理作用的磁性消耗珠子(sacrificial bead)和类似地受调理作用的磁性组件修正(amend)血液样品来减少或消除白细胞免疫传感器干扰。
技术介绍
为了诊断、筛选、疾病分期、法医分析、妊娠测试和药物测试等等，会对生物样品进行目标分析物的许多实验室免疫测定测试。虽然少数定量测试例如妊娠测试已被简化成用于患者在家中使用的简单试剂盒，但大部分定量测试仍然需要经训练的专业技术人员在实验室环境中使用复杂仪器进行。实验室测试增加了分析成本并且延迟了患者收到结果的时间。在许多情况下，该延迟可能对患者的病况或预后(例如表明心肌梗塞和心力衰竭的标志物的分析)是有害的。在此类和类似危急情况下，有利地是在及时现场护理(point-of-care)时准确、便宜地并且以最短延迟进行此类分析。许多类型的免疫测定装置和方法已进行了描述。例如，用于成功地测量血液样品中的分析物的一次性传感设备由Lauks在美国专利5，096，669中公开。用于成功地测量特征例如凝血时间的其它设备由Davis等人在美国专利N0.5，628，961和5，447，440中公开。这些设备使用读数装置和适合读数装置的筒(cartridge)以测量作为时间函数的血液样品中分析物的浓度和粘度的改变。将美国专利Nos.5，096，669,5, 628，961和5，447，440的整个内容和公开内容通过引用并入本文。属于Miller等人的美国专利申请公布2006/0160164( “‘164申请”)描述了利用免疫参考电极的免疫测定设备；属于Miller等人的美国专利7，682，833描述了利用改进的样品封闭(sample closure)的免疫测定设备；属于Emerson Campbell等人的美国专利申请公布2004/0018577描述了多重杂交免疫测定；属于Davis等人的美国专利7，419，821描述了用于分析物测量和免疫测定的装置和方法，所述每一个专利或公布是共同拥有的并且通过引用整体并入本文。非竞争性两位点免疫测定法(也称为夹心免疫测定法)通常用于测定生物测试样品中的分析物浓度，用于例如由Abbott Point of Care Inc.开发为1-Stat ,免疫测定系统的及时现场分析物检测系统。在典型的两位点酶联免疫吸附测定(ELISA)中，将一种抗体结合至固体载体上以形成固定或捕获抗体，并且将第二种抗体缀合至或结合至信号产生性试剂例如酶以形成信号或标记抗体。在与包含待测量的分析物的样品反应后，分析物被“夹”在固定抗体与信号抗体之间。在清洗掉样品和任何非特异性结合的试剂后，测量保留在固体载体上的信号抗体的量，该量应当与样品中的分析物的量成比例。电化学检测也已被用于免疫测定，在所述电化学检测中分析物的结合直接或间接引起与电极相邻的电活性物质的活性改变。关于电化学免疫测定的综述，参见Laurell等人，Methods in Enzymology,第 73 卷，〃Electroimmunoassay〃，Academic Press, NewYork, 339，340, 346-348(1981)。在电化学免疫传感器中，分析物与其同源抗体的结合产生了电极上的电活性物质的活性改变，所述电极保持于适当的电化学电势下以引起电活性物质的氧化或还原。存在许多用于满足这些条件的配置或设置。例如，可将电活性物质直接附着至分析物，或可将抗体共价地连接至从无电活性底物产生电活性物质或破坏电活性底物的酶。关于电化学免疫传感器的综述，参见 M.J.Green(1987)Philos.Trans.R.Soc.Lond.B.Biol.Sc1.316:135-142。差分安培测量(differential amperometrie measurement)的概念在电化学领域是公知的。参见，例如，属于Cozzette等人的共同拥有的美国专利5，112，455，将其通过引用整体并入本文。差分安培传感器组合的形式公开于属于Cozzette等人的共同拥有的美国专利5，063,081( “‘081专利”)，也将其通过引用整体并入本文。‘081专利还公开了选择性渗透层用于电化学传感器的用途以及成膜乳胶用于固定生物活性分子的用途。聚(乙烯醇)(PVA)在传感器制造中的用途描述于属于Davis等人的美国专利6，030，827，将通过弓I用整体并入本文。属于Vikholm等人的美国专利申请公布2003/0059954 (将其通过弓I用整体并入本文)教导了直接附着至具有生物排斥或生物分子排斥涂层例如PVA的表面的抗体(在表面上的抗体之间的空隙中)。属于Johansson的美国专利5，656，504教导了具有固定在其上的抗体的固相例如PVA，将其通过引用整体并入本文，属于Davis等人的美国专利6，030, 827和6，379，883教导了用于形成PVA层的方法，所述专利通过引用整体并入本文。在本领域内公知的是，免疫测定易遭受各种形式的干扰。例如共同拥有的在审的美国申请12/411,325( “‘325申请”)阐述了通过将IgM包括在IgG试剂混合物中来减小嗜异性抗体的干扰。将‘325申请通过引用整体并入本文。随着免疫测定技术不断地被改造以适合进入及时现场护理测试市场，将全血用作测试介质相对于血浆和血清已得到增加，血浆和血清通常用于中心实验室测试。当分析全血时，红细胞和血沉棕黄层成分存在于测定介质中。本领域技术人员认识到血沉棕黄层是当将血液离心时在红细胞上面形成的一层白细胞和血小板。已发现在某些测定中，可针对白细胞有效地对不同的测定组分例如珠子和电极表面进行调理作用。例如，对于电极表面，为了基于过氧化物离子的电化学检测而观察人嗜中性粒细胞的呼吸爆发，Hill等人(FEBS191，257-263，1985)利用人IgG对微伏安电极(microvoItammetric electrode)进行调理作用。上文中提及的美国专利申请公布2006/0160164( ‘164申请)论述了电化学免疫传感器，全血与血浆之间的偏差；并且提供了，标志物例如肌钙蛋白等的免疫测定通常被测量和报告为血浆或血清值。‘164申请教导当将这些免疫传感器用于分析全血时，需要使用用于消除偏差的校正因子或方法。‘164申请还教导该偏差的某些方面可被消除，包括与血沉棕黄层的组分相关的全血电化学免疫测定中的偏差，以及还有与样品之间的血细胞比容(hematocrit)差异相关的偏差。如‘164申请中所提供的，在具有涂覆了分析物抗体例如肌钙蛋白抗体的珠子的免疫传感器上发生白细胞(或白血细胞(white cell))干扰，以及对照实验已显示该正偏差不存在于血浆样品和其中已除去血沉棕黄层的血液样品中。因此，白细胞似乎能够粘附至免疫传感器并且促进酶标记的抗体的非特异性结合，所述抗体甚至在洗涤步骤后仍然保持结合。在‘164申请中，显示了该偏差可通过在珠子制备过程中将少量抗体添加至人血清白蛋白而部分消除。因此，当样品与修饰的珠子接触时，来自样品的白蛋白快速包被珠子，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.06.14 US 12/815,1321.在分析物免疫测定中减少来自白细胞的干扰的方法，包括: 在足以使生物样品中的至少一部分白细胞结合至磁性消耗珠子的条件下，将包含白细胞的生物样品与针对所述白细胞进行了调理作用的磁性消耗珠子接触；和通过磁性使所述磁性消耗珠子保留而基本上不与免疫传感器接触。2.权利要求1的方法，其中所述免疫测定为夹心测定。3.权利要求1的方法，其中所述免疫测定为竞争性测定。4.权利要求1的方法，其中所述生物样品为血液样品。5.权利要求1的方法，其中所述生物样品为全血样品。6.权利要求1的方法，其中利用抗凝剂修正所述生物样品。7.权利要求1的方法，其中所述磁性消耗珠子包含利用苯乙烯-丙烯酸共聚物涂覆的磁铁矿(Fe3O4)核心。8.权利要求1的方法，其中所述磁性消耗珠子包括利用非人IgG或其片段涂覆的磁性珠子。9.权利要求1的方法,其中所述磁性消耗珠子具有0.01 μ m至20 μ m的平均粒度。10.权利要求1的方法，其中所述磁性消耗珠子具有0.1 μ m至5 μ m的平均粒度。11.权利要求1的方法,其中所述磁性消耗珠子具有3μ m至5 μ m的平均粒度。12.权利要求1的方法，其`中所述磁性消耗珠子存在于一种或多种可溶解的干试剂涂层中。13.权利要求1的方法，其中利用永久磁铁来实现保留。14.权利要求1的方法，其中利用电磁铁来实现保留。15.权利要求1的方法，其中至少50wt.%的磁性消耗珠子被保留而不与免疫传感器接触。16.权利要求1的方法，其中至少75wt.%磁性消耗珠子被保留而不与免疫传感器接触。17.用于在血液样品中进行分析物夹心免疫测定的方法，包括: 将包含白细胞的血液样品导入测试筒的保持室，其中用针对白细胞进行了调理作用的磁性消耗珠子涂覆保持室的一部分； 在足以使生物样品中的至少一部分白细胞结合至磁性消耗珠子的条件下将血液样品与磁性消耗珠子接触； 使血液样品移动进入导管，其中定位于导管的至少一部分的磁场吸引磁性消耗珠子并且将其保留在导管壁的至少一部分上，从而基本阻止了磁性消耗珠子与免疫传感器接触；将血液样品与免疫传感器接触以形成包含固定的捕获抗体、样品分析物和信号抗体的夹心； 任选地从免疫传感器洗涤血液样品；和 基于由信号抗体提供的信号检测分析物的存在。18.权利要求17的方法，其还包括: 从免疫传感器洗涤血液样品；和 将免疫传感器与能够与所述信号抗体反应的试剂接触以在免疫传感器上产生与样品分析物在血液样品中的存在相关的信号。19.权利要求17的方法，其中所述血液样品为全血样品。20.权利要求17的方法，其中利用抗凝剂修正所述血液样品。21.权利要求17的方法，其中所述磁性消耗珠子包含利用苯乙烯-丙烯酸共聚物涂覆的磁铁矿(Fe3O4)核心。22.权利要求17的方法，其中所述磁性消耗珠子包括利用非人IgG或其片段涂覆的磁性珠子。23.权利要求17的方法，其中所述磁性消耗珠子具有0.01 μ m至20 μ m的平均粒度。24.权利要求17的方法，其中所述磁性消耗珠子具有0.1 μ m至5 μ m的平均粒度。25.权利要求17的方法，其中所述磁性消耗珠子具有3μ m至5 μ m的平均粒度。26.权利要求17的方法，其中所述磁性消耗珠子存在于一种或多种可溶解的干试剂涂层中。27.权利要求17 的方法，其中利用永久磁铁来产生磁场。28.权利要求17的方法，其中利用电磁铁来产生磁场。29.权利要求17的方法，其中所述磁场由埋植在测试筒中的磁铁产生。30.权利要求17的方法，其中至少50wt.%的磁性消耗珠子被保留而不与免疫传感器接触。31.权利要求17的方法，其中至少75wt.%的磁性消耗珠子被保留而不与免疫传感器接触。32.权利要求17的方法，其中所述样品分析物选自肌钙蛋白1、肌钙蛋白T、BNP、肌酸激酶MB、原降钙素、proBNP、NTproBNP、肌红蛋白、PSA、D- 二聚体、CRP、HCG、NGAL、髓过氧化物酶和TSH。33.权利要求17的方法，其中将固定的捕获抗体附着至传感器，所述传感器选自安培计电极、电位测定电极、电导测定电极、光波导、表面等离子体共振传感器、声波传感器和压电式传感器。34.权利要求17的方法，其中将所述固定的捕获抗体附着至测定珠子，并且所述测定珠子连接至安培计电极。35.在血液样品中进行分析物竞争性免疫测定的方法，包括: 将包含白细胞的血液样品导入测试筒的保持室，其中用针对白细胞进行了调理作用的磁性消耗珠子涂覆保持室的一部分； 利用标记的分析物修正血液样品； 在足以使生物样品中的至少一部分白细胞结合至磁性消耗珠子的条件下将血液样品与磁性消耗珠子接触； 施加定位至导管的至少一部分上的磁场以吸引磁性消耗珠子并...

【专利技术属性】
技术研发人员：J·L·E·坎贝尔，G·戴维斯，
申请(专利权)人：雅培医护站股份有限公司，
类型：
国别省市：