一种植物内生菌的分离方法技术

本发明专利技术公开了一种植物内生菌的分离方法，包括采样、表面灭菌、组织研磨、分离及纯培养步骤，具体是选择健康植株进行采样、分类保藏，在乙醇溶液中浸泡，再在次氯酸钠溶液中浸泡，用无菌水冲洗，称取0.3~0.5g，加入无菌水，研磨。研磨后的浆液梯度稀释，涂布后平板培养，每处理重复3~5次，根据菌落的形状、大小、干湿、颜色、质地、表面、边缘及透明度8个表型特征挑取单菌落，进行纯化培养，将经纯培养的单菌落移入试管斜面保存。本发明专利技术有效避免了人为扩大或丢失植物内生菌的多样性分离结果，为研究植物内生菌的菌落组成特征，丰富内生菌基因资源具有十分重要的作用。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种植物内生菌的分离方法，其特征在于包括采样、表面灭菌、组织研磨、分离及纯培养步骤，具体包括：A、采样：选择生长性状良好、无病害症状的健康植株进行采样，将得到的植物材料按不同植物及组织类别分类保藏；B、表面灭菌：将采集的植物材料在65~75%的乙醇溶液中浸泡30~90s后，再在有效氯含量0.5~1.5%的次氯酸钠溶液中浸泡40~320s，用无菌水冲洗3~5次；C、组织研磨：称取0.3~0.5g经预处理后的植物材料，与灭菌研磨珠一并置于离心管中，加入500~700μl无菌水，研磨120~240s，频率为20~40r/s；D、分离及纯培养：研磨后的浆液梯度稀释10~104倍，各取200μl稀释液涂布后在25~32℃下平板培养24~48h，每样品重复3~5次，根据菌落表型特征的不同挑取具有代表性的单菌落，进行平板划线培养，将经纯培养的单菌落移入试管斜面保存。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：夏振远，陈泽斌，吴玉萍，雷丽萍，汪安云，晋艳，
申请(专利权)人：云南省烟草农业科学研究院，
类型：发明
国别省市：