本发明专利技术公开了一株短小芽孢杆菌及其在防治小麦禾谷孢囊线虫病中的应用。本发明专利技术提供的菌株属于短小芽孢杆菌（Bacillus pumilus），命名为B202，保藏号为CGMCCNo.5838。本发明专利技术还保护短小芽孢杆菌B202在制备小麦禾谷孢囊线虫生防制剂中的应用。本发明专利技术还保护一种小麦禾谷孢囊线虫生防制剂，其活性成分为如下（a）或（b）或（c）或（d）中的至少一种：（a）短小芽孢杆菌B202的发酵体系；（b）短小芽孢杆菌B202；（c）短小芽孢杆菌B202的芽孢；（d）短小芽孢杆菌B202的发酵体系的上清液。本发明专利技术提供法人短小芽孢杆菌B202对小麦禾谷孢囊线虫病具有稳定防治效果，为小麦禾谷孢囊线虫生防制剂的研发奠定了基础。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一株短小芽孢杆菌及其在防治小麦禾谷孢囊线虫病中的应用。
技术介绍
禾谷抱囊线虫又名燕麦抱囊线虫(Heterodera avenae Wollen-weber 1924,Cereal Cyst Nematodes,简称CCN),为世界性禾谷类作物的病原线虫,现已对我国11个省市(自治区、直辖市)的小麦造成危害，而且逐年加重，成为小麦生产上的主要病害。目前对小麦禾谷孢囊线虫病的防治主要是化学防治和抗病品种的利用。具有较好防效的化学杀线剂，如铁灭克(Temik)、呋喃丹(Furadan)等，属于高毒农药，存在毒性大、成本高、污染环境、危害人类健康等问题，在生产上不能得到推广应用。选育抗禾谷孢囊线虫新品种是防治根线虫病最为有效的方法，但是已鉴定的抗禾谷孢囊线虫基因普遍存在于小麦近源属(如大麦属、燕麦属、山羊草属等)中，来源于六倍体小麦的抗禾谷孢囊线虫基因十分有限，使得抗病育种进展缓慢。禾谷孢囊线虫种内存在严重致病型分化现象，抗性基因对不同致病型的禾谷孢囊线虫具有不同抗性，导致品种抗性分布不稳定，很容易造成抗性品种抗性的丢失。目前我国种植的小麦品种中还没有发现对禾谷孢囊线虫完全免疫的品种。源于对环境友好、绿色无公害、有利于人类健康，生物防治在植物病害防治研究中一直处于热点。虽然国内外在植物寄生线虫生防细菌的种类、筛选、防治效果和土壤添加剂等方面也有了一些研究，但生产上还没有应用效果稳定的生防制剂。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一株短小芽孢杆菌及其在防治小麦禾谷孢囊线虫病中的应用。 本专利技术提供的菌株属于短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus),命名为B202,已于2012年03月02日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为:北京市朝阳区北辰西路I号院3号)，保藏号为CGMCC N0.5838。短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus) B202 CGMCC N0.5838 简称短小芽孢杆菌 B202。本专利技术还保护短小芽孢杆菌B202在制备小麦禾谷孢囊线虫生防制剂中的应用。本专利技术还保护一种小麦禾谷孢囊线虫生防制剂，其活性成分为如下(a)、(b)、(C)和(d)中的至少一种:(a)短小芽孢杆菌B202的发酵培养物(包括发酵上清和菌体);(b)短小芽孢杆菌B202 ; (c)短小芽孢杆菌B202的芽孢；(d)短小芽孢杆菌B202的发酵上清。本专利技术还保护一种防治植物发生小麦禾谷孢囊线虫病的方法，包括在播种前将待测植物种子进行如下处理的步骤:用短小芽孢杆菌B202的芽孢悬浮液对待测植物的种子进行浸种处理。所述待测植物具体可为小麦(小麦品种“温麦19”)。所述短小芽孢杆菌B202的芽孢悬浮液的具体制备方法如下:将短小芽孢杆菌B202的芽孢悬浮于无菌水，得到芽孢浓度为8X IO8个/ml的芽孢悬浮液。所述浸种的时间具体可为I小时。本专利技术还保护另一种防治植物发生小麦禾谷孢囊线虫病的方法，包括将待测种子进行如下处理的步骤:(I)将待测植物种子用短小芽孢杆菌B202的菌体浸种；(2)将完成步骤(I)的种子催芽，得到幼苗；(3)将步骤(2)得到的幼苗用短小芽孢杆菌B202的发酵上清灌根。所述待测植物具体可为小麦(小麦品种“温麦19”)。所述短小芽孢杆菌B202的发酵培养物具体按照如下方法制备:将短小芽孢杆菌B202接种到NA改良培养基中，振荡培养得到0D6(l(lmi=4.0的发酵培养物。所述短小芽孢杆菌B202的发酵上清具体按照如下方法制备:将所述发酵培养物4000rpm离心30min,收集上清液。NA改良培养基(pH7.0)由溶剂和溶质组成；所述溶剂为水；所述溶质及其浓度如下:3g/L牛肉膏、5g/L蛋白胨、3g/L葡萄糖。·采用芽孢杆菌(Bacillus spp.)进行生物防治具有如下优势:适应性广；作用机制多样，不易产生抗药性；发酵周期短，生产成本低；形成芽孢、易储运；环境友好，对人畜安全。本专利技术提供了一株短小芽孢杆菌B202，通过室内杀线活性、温室盆栽和田间试验筛选证明其对小麦禾谷孢囊线虫病具有稳定防治效果，为小麦禾谷孢囊线虫生防制剂的研发奠定了基础。附图说明图1为B202菌株的形态(10倍放大的照片)。图2为B202菌株的形态(40倍放大的照片)。图3为B202菌株的形态(100倍放大的照片)。具体实施例方式以下的实施例便于更好地理解本专利技术，但并不限定本专利技术。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。小麦禾谷抱囊线虫(Heteroderaavenae):Yuan, H.X., Sun, J.ff., Yang, ff.X.，Xing, X，P.，Wang, Z.Y.，Riley, L.T.，and Li，H.L.New pathotypes of Heteroderaavenae (cereal cyst nematode)from winter wheat in Zhengzhou, Henan, China..Australasian Plant Pathology 2010，39:107-111。小麦品种“温麦19”(小麦禾谷孢囊线虫病感病品种):由河南省农业科学院植保所提供；袁虹霞，年高磊，邢小萍，付博，张鹏，李洪连.鲁豫皖交界地区四个小麦禾谷孢囊线虫群体致病型鉴定.植物保护学报，2011, 38(5):408-412。实施例1、短小芽孢杆菌B202菌株的获得和鉴定一、短小芽孢杆菌B202菌株的获得从中国中部平原小麦主产区河南省、河北省和陕西省地区小麦禾谷孢囊线虫发病严重的地块挖取重病小麦和健康小麦，保留根部土壤。小心去掉小麦植株根部土壤，随机剪取新生主根和毛细根，置于50ml含玻璃珠的无菌水中，充分摇动。将根取出，获得土壤悬液。取出的根系先用无菌水冲洗，然后用1%次氯酸钠消毒8分钟，再用无菌水漂洗4次，冲净残余次氯酸钠，将2克根和IOml无菌水并适当加少量石英砂于无菌研钵中研磨，获得根系悬液。将各个悬液摇匀，取Iml加入装有9ml无菌水的试管中，混合均匀后梯度稀释至1(Γ6浓度，将10'10'Kr6浓度的稀释液在80°C的水浴中保持30min以杀死大部分的非芽孢细菌，取100 μ I涂布牛肉膏平板，每个稀释度涂平板3个，30°C保存培养。培养3天后，挑取不同的单菌落，进行转管并在4°C下保存备用。共获得293株芽孢杆菌，其中根内生芽孢杆菌74株，根际土壤芽孢杆菌219株，根际土壤的芽孢杆菌数量明显多于根内生芽孢杆菌数量。将其中I个纯培养的菌株命名为B202菌株。二、B202菌株的形态特征和分子鉴定结果B202菌株的 形态见图1 (10倍放大的照片)、图2 (40倍放大的照片)和图3(100倍放大的照片)。B202菌株的菌株形态为呈短杆状，菌体大小0.54X2.3um，具内生芽孢。在牛肉膏蛋白胨培养基平板上37 °C培养48小时后，菌落突起，菌落呈圆形，表面光滑，边缘光滑细腻，菌落不透明，颜色为乳白色，直径1.3mm 2.1mm。革兰氏染色阳性。提取B202菌株的总DNA，对16S rDNA进行扩增，本文档来自技高网...
【技术保护点】
短小芽孢杆菌（Bacillus pumilus）B202，其保藏编号为CGMCC No.5838。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王琦，李洪涛，李燕，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：北京;11
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