描述了小鼠模型及其用于检测、治疗、表征和诊断多种疾病的用途。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】通过靶向的miR-29表达建立的慢性淋巴细胞白血病小鼠模型相关申请的交叉参考这是根据37 CFR 1.371提交的于xxx, xx, xxxx提交的国际申请PCT/US20xx/xxxxxx的国家阶段申请，其要求2010年6月24日提交的美国临时申请系列号61/358，383的优先权，其全部公开内容明确地通过引用方式并入本文。关于联邦政府支持的研究的声明本专利技术是在国立卫生研究所的基金号P01-CA81534的政府支持下做出的。政府享有本专利技术的某些权利。序列表本申请包含通过EFS-Web以ASCII格式提交的序列表，其通过引用方式全文并入本文。所述ASCII版本，创建于2011年6月17日，被命名为604_52020_Seq_List_0SU-10162.txt，大小为 I, 399 字节。本专利技术的
和工业实用性本专利技术涉及小鼠模型及其用于检测、治疗、表征和诊断多种疾病的用途。背景慢性淋巴细胞白血病(CLL)是最常见的人类白血病，占所有病例的约30%，在美国每年观测到10，000例新病例。在特征上，CLL是老年人的疾病，在40岁以上的年龄，发病率每10岁线性递增。已经知道该疾病的特征在于CD5+B细胞的克隆扩增。微小RNA(HIicroRNA)是一类内源性非编码RNA，占所有真核基因的1%_3%，大小为19-25nt，其在转录或翻译水平调节基因表达。大约一半的人类微小RNA位于参与癌症中的变异的脆性位点和基因组区域，微小RNA的表达谱的改变发生于多数癌症中，这提示了单个的微小RNA可能作为肿瘤阻抑子或癌基因发挥作用。13ql4删除是最常见的CLL异常，在大约一半的病例中通过细胞遗传分析可检测出来。对于13ql4.3处的删除的分析引起人们发现了 2个物理上相连的微小RNA:miR-15a和miR-16-l，它们是这些删除的靶点。因此，miR-15a和miR-16-l表达在大多数CLL病例中降低，进一步研究表明miR-15a/miR-16-l负性地调节Bcl2的表达。这些发现表明:微小RNA在CLL中具有重要作用，miR-15/16的下调和随后的Bcl2的上调促成CLL发病。因为miR-15/16被鉴定为惰性(indolent)CLL的肿瘤阻抑子，已经透彻地研究了 CLL中的微小RNA表达谱，报告了标志物谱，描述了 13种区分侵袭性CLL和惰性CLL的微小RNA。相对于惰性CLL，miRNA-29表达在侵袭性CLL中下调，相信miR-29可能通过靶向数个癌基因、包括TCL1、MCLl和⑶K6而作为肿瘤阻抑子发挥作用。另一方面，一份报告显示miR-29表达在转移性乳腺癌中上调，最近的一项研究报告了 miR-29过表达可在小鼠中引起急性骨髓性白血病(AML)。为了阐明miR-29在B-细胞白血病中的作用，我们制备了在B细胞中过表达miR-29的转基因小鼠，现在报告该小鼠模型的表型。使用能够阐明miR-29在B细胞白血病中的作用的有效模型将是有用的。概述在一个方面，本文提供了转基因动物，其基因组包含核酸构建体，所述核酸构建体包含可操作地连接于编码miR-29的核酸序列的、能够指导在B细胞中表达的至少一种转录调节序列。在另一个方面，本文提供了产生具有淋巴组织增生病症的动物的方法。在另一个方面，本文提供了测定一种治疗方式影响淋巴组织增生病症的能力的方法。在另一个方面，本文提供了转基因小鼠，其基因组包含编码人B-CLL的核酸序列，其中所述序列可操作地连接于Vh启动子和IgH-Εμ增强子，其中所述转基因小鼠相对于对照小鼠产生扩增的CD5+B细胞群体。在另一个方面，本文提供了转基因小鼠，其基因组包含编码人miR-29的核酸序列，其中所述序列可操作地连接于Vh启动子和IgH-Εμ增强子，其中所述转基因小鼠产生显示出人B-CLL的特征的淋巴细胞白血病。在另一个方面，本文提供了在B细胞中过表达miR-29的转基因小鼠和此种小鼠的用途。在另一个方面，本文提供了转基因小鼠，其中小鼠miR_29a/b簇的表达由VH启动子-1gH-E μ增强子以及人源化海肾绿色荧光蛋白(hrGFP)和猿猴病毒40 (SV40)多聚(A)位点控制。在另一个方面，本文提供了测定用于治疗慢性淋巴细胞白血病的治疗剂的功效的方法，包括测定miR-29a是否上调，其中miR-29的上调指示相对于侵袭性B-CLL和正常CD19+B细胞是惰性人B-CLL。在另一个方面，本文提供了转基因小鼠，其基因组包含核酸构建体，所述核酸构建体包含能够指导在小鼠的B细胞中表达的至少一种转录调节序列，其中所述转录调节序列可操作地连接于编码miR-29基因产物的核酸，所述miR-29基因产物包含与miR-29具有至少90%序列同一性的核苷酸序列，其中所述小鼠显示出B细胞恶性肿瘤。在另一个方面，本文提供了测定试剂是否影响B细胞恶性肿瘤的方法。在另一个方面，本文提供了测定试剂在治疗B细胞恶性肿瘤中的治疗功效的方法。在阅读了下列附图和详细描述之后，本专利技术的其他系统、方法、特征和优点对于本领域技术人员将是明显的或将变得明显。所有此种另外的系统、方法、特征和优点都意在包括在本说明书内，在本申请的范围内，并受到随附的权利要求的保护。附图说明专利或申请文件可包含一幅或多幅彩色附图和/或一幅或多幅照片。本专利或专利申请公开物的具有彩色附图和/或照片的版本将根据请求和在缴纳了必要费用之后由专利局提供。图1A-1F =CLL中的miR-29表达和Ep-miR-29转基因创始小鼠的产生。 图1A:侵袭性和惰性CLL中的miR_29a表达；图1B:侵袭性和惰性CLL中的miR-29b 表达。图1C:Ep-miR-29 构建体图1D-图1E:Ep-miR-29创始者的脾淋巴细胞中的miR-29a (图1D)和miR_29b (图1E)的表达。图1F:Ep-miR-29创始者的脾淋巴细胞中的GFP的表达。图2A-2H:Ε μ -miR-29 小鼠产生 CLL。图2A-2C:从脾(图2A)、外周血(图2B)和骨髓(图2C)分离的miR-29转基因淋巴细胞(Tg)和对照淋巴细胞的流式细胞术分析。图2D-2F:miR-29转基因小鼠和WT对照中的CD5+B细胞群体的分析。图2G:显示出深度CLL的代表性E μ -miR-29转基因小鼠和相同年龄的WT对照的肉眼病理。图2H:通过Southern印迹分析IgH基因构型:分离自5个代表性病例的脾淋巴细胞DNA显示出至少50%的⑶5+⑶19’ B细胞。星号标示出了克隆重排。图3A-3L:Εμ-miR-29小鼠的组织病理学分析。箭头标示出了破碎细胞(smudgecell)。黑色箭头标示出了非典型性淋巴样细胞。绿色箭头标示出了正常淋巴样滤泡。图4A-4L:来自Εμ -miR-29转基因小鼠的白血病细胞的细胞周期分析。图4A-4D =BrdU 掺入 WT B220++B 细胞的 DNA 中。图4E-4J =BrdU 掺入转基因 B220+CD5+ 和 B220+CD5-B 细胞 DNA 中。图4K =WT和转基因动物的血清中的Ig水平。图4L:注射SRBC 7天之后WT和转基因动物的血清中的抗-SRBC特异性抗体的水平。图5A-5C:miR-29转基因表达加速E 本文档来自技高网...
【技术保护点】
转基因动物，其基因组包含核酸构建体，所述核酸构建体包含可操作地连接于编码miR‑29的核酸序列的、能够指导在B细胞中表达的至少一种转录调节序列。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：C·M·克罗斯，Y·佩卡斯基，
申请(专利权)人：俄亥俄州立大学，
类型：发明
国别省市：美国;US
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