利用miRNA导入的新型hiPSC制作法制造技术

本发明专利技术明确多能干细胞诱导的新型的化合物；明确新型的抗恶性肿瘤物质。本发明专利技术提供一种多能干细胞诱导剂，其含有：包含序列号41的碱基序列、或相对于该碱基序列1-3个碱基缺失、被置换或者加成后的碱基序列的单链或双链的多核苷酸，并且将细胞向多能干细胞诱导。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】利用mi RNA导入的新型h i PSC制作法
本专利技术涉及新型的小RNA (small RNA)、多能干细胞诱导剂、恶性肿瘤治疗药或多能干细胞等。
技术介绍
iPS细胞的制作技术，是在近年来的医疗行业特别受瞩目的领域。作为代表的iPS细胞的制作技术，可以列举:专利文献I中记载的方法。该文献中记载了:通过将4个基因(0ct3/4、Klf4、Sox2、c-Myc)导入细胞，制作iPS细胞。从开发该技术开始，与iPS细胞相关的研究成果的报告数快速增加。例如，专利文献2中记载了:通过将3个基因(0ct3/4、Klf4、Sox2)和I个miRNA (hsa-miR-372等)导入细胞，制作iPS细胞。非专利文献I中记载了:在导入上述4个或3个基因的情况下，如果缺损使iPS化的细胞的p53基因，则iPS细胞的制作效率上升。非专利文献2中记载了:通过导入pre-miRNA的团簇(miR_302a miR-302d),由癌细胞制作iPS细胞。另一方面，制药会社近年来特别投入资金的领域是癌领域。癌的机理复杂且不明确的方面多，与其他疾病相比，有效的治疗药少。因此，期待开发该领域的新型的治疗药。本申请专利技术人在非专利文献3中报道了可以采用hTERTmRNA作为癌的生物标记。另外，非专利文献4中报道了:hTERT mRNA的表达与RGM249mRNA相关，通过针对RGM249mRNA的shRNA或siRNA，hTERTmRNA的表达量减少。 现有技术文献 专利文献专利文献I国际公开 第2007/069666号 专利文献2国际公开第2009/075119号 非专利文献非专利文献I‘Suppression of induced pluripotent stem cell generationby the p53_p21pathway.’ Hong et al., Nature.2009Aug27;460(7259):1132-5.Epub2009Aug9.非专利文献2‘Mir-302reprograms human skin cancer cells into a pluripotentES-cell-like state.’ Lin et al.，RNA.20080ct;14(10):2115-24.Epub2008Aug28.非专利文献3‘A novel biomarker TERT mRNA is applicable for early detectionof hepatoma.’ Miura et al.，BMC Gastroenterol.2010Mayl8;10:46.非专利文献 4iA noncoding RNA gene on chromosomeIOp 15.3may functionupstream of hTERT.’ Miura et al.，BMC Mol Biol.2009Feb2;10:5.
技术实现思路
专利技术所要解决的课题然而，上述文献记载的现有技术在以下方面具有改善的余地。在上述文献中，iPS细胞的制作方法慢慢地不断明确，但为了更有效地开发更高品质的iPS细胞，需要明确新的制作方法，并且不断积累关于iPS细胞的信息。关于各文献，专利文献I中，使用作为癌原基因的c-Myc，因此，暗藏iPS细胞发生癌化的风险。专利文献2中，没有使用c-Myc，但将3个基因和I个miRNA导入细胞的步骤复杂，不能说是高效的制作方法。非专利文献I中，没有使用c-Myc，但缺损作为癌抑制基因的p53基因，因此，担负细胞的癌化和不稳定化等风险。非专利文献2提到:使用miR-302的团簇，但miR-302是以肿瘤抑制因子即PTEN (染色体10上缺失的磷酸酶与张力蛋白同源物；phosphatase and tensin homo log deleted on chromosome 10)作为目标的 miRNA(Poliseno et al., Sci Signal.2010Aprl3; 3 (117):ra29)。因此,担负细胞的癌化的风险。另一方面，上述文献中，恶性肿瘤的机理慢慢明确，但仅仅这样的程度还不能说充分，为了制定新型的医药品或治疗战略方案，需要明确新的抗恶性肿瘤物质，并且不断积累关于恶性肿瘤的信息。非专利文献3以 及4中记载了:hTERT mRNA与癌形成有关；和通过针对RGM249mRNA的shRNA或siRNA，hTERT mRNA减少，但对癌具有治疗效果的物质还不明确。本专利技术是鉴于上述情况而完成的，其目的在于，提供诱导多能干细胞的新型的化合物。或者，其目的在于，提供未分化细胞标记表达调节剂。另外的目的在于，提供多能干细胞的P53表达促进剂。另外，其他目的在于，提供新型的恶性肿瘤治疗药。另外，其他目的在于，提供新型的多能干细胞。 用于解决课题的方法根据本专利技术，提供一种多能干细胞诱导剂，其含有包含序列号41的碱基序列的单链或双链的多核苷酸，并且将细胞向多能干细胞诱导。该多能干细胞诱导剂，含有在下述实施例中证实将细胞向多能干细胞诱导的单链或双链的多核苷酸。因此，如果使用该多能干细胞诱导剂，则能够将细胞向多能干细胞诱导。另外，根据本专利技术，提供一种多能干细胞诱导剂，其含有包含序列号41的碱基序列的小RNA，并且将细胞向多能干细胞诱导。该多能干细胞诱导剂，含有在下述实施例中证实将细胞向多能干细胞诱导的小RNA。因此，如果使用该多能干细胞诱导剂，则能够将细胞向多能干细胞诱导。另外，根据本专利技术，提供一种多能干细胞诱导剂，其含有:包含相对于将包含序列号43的碱基序列的多核苷酸，并且将细胞向多能干细胞诱导。该多能干细胞诱导剂，含有在下述实施例中证实将细胞向多能干细胞诱导的多核苷酸。因此，如果使用该多能干细胞诱导剂，则能够将细胞向多能干细胞诱导。另外，根据本专利技术，提供一种未分化细胞标记表达调节剂，其含有包含序列号41的碱基序列的单链或双链的多核苷酸，并且调节未分化细胞标记的表达。该未分化细胞标记表达调节剂，含有在下述实施例中证实促进或抑制细胞内的未分化细胞标记的单链或双链的多核苷酸。因此，如果使用该未分化细胞标记表达调节剂，则能够调节细胞内的未分化细胞标记的表达量。另外，根据本专利技术，提供一种多能干细胞的p53表达促进剂，其含有包含序列号41的碱基序列的单链或双链的多核苷酸，并且促进多能干细胞中的P53的表达量。该P53表达促进剂，含有在下述实施例中证实促进多能干细胞中的p53的表达量的单链或双链的多核苷酸。因此，如果使用该P53表达促进剂，则能够促进多能干细胞中的P53的表达量。另外，根据本专利技术，提供一种多能干细胞的生产方法，其中，包括:将包含序列号41的碱基序列的单链或双链的多核苷酸导入细胞的步骤。该生产方法，在下述实施例中证实能够利用于制作多能干细胞。因此，如果使用该生产方法，则能够生产多能干细胞。另外，根据本专利技术，提供一种恶性肿瘤的治疗药，其含有包含序列号41的碱基序列的单链或双链的多核苷酸。该恶性肿瘤的治疗药，含有在下述实施例中证实抑制恶性肿瘤的单链或双链的多核苷酸。因此，如果使用该恶性肿瘤的治疗药，则能够进行恶性肿瘤的治疗。另外，根据本专利技术，提供一种载体，其含有包含与序列号41的碱基序列的多核苷酸。如果利用本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.07.12 JP 2010-158192;2010.07.12 JP 2010-158191.一种多能干细胞诱导剂，其特征在于，含有: 包含序列号41的碱基序列、或相对于该碱基序列I 3个碱基缺失、被置换或者加成后的碱基序列的单链或双链的多核苷酸， 并且将细胞向多能干细胞诱导。2.根据权利要求1所述的多能干细胞诱导剂，其特征在于:所述单链或双链的多核苷酸具有miRNA作用。3.根据权利要求1所述的多能干细胞诱导剂，其特征在于:所述单链或双链的多核苷酸为小RNA。4.根据权利要求1所述的多能干细胞诱导剂，其特征在于:所述单链或双链的多核苷酸为单链或双链的RNA链。5.根据权利要求1所述的多能干细胞诱导剂，其特征在于:所述单链或双链的多核苷酸由15以上的核苷酸构成。6.根据权利要求5所述的多能干细胞诱导剂，其特征在于:所述单链或双链的多核苷酸由100以下的核苷酸构成。7.根据权利要求1所述的多能干细胞诱导剂，其特征在于:所述单链的多核苷酸为shRNA或pre-miRNA，所述双链的多核苷酸为siRNA或miRNA。8.根据权利要求7所述的多能干细胞诱导剂,其特征在于:所述shRNA或pre-miRNA由35 100核苷酸构成，所述siRNA或miRNA的引导链由15 40核苷酸构成。9.根据权利要求7所述的多能干细胞诱导剂，其特征在于:所述shRNA、所述pre-miRNA、所述siRNA以及所述miRNA包含由I 5核苷酸构成的突出端。10.根据权利要求1所述的多能干细胞诱导剂，其特征在于: 所述单链或双链的多核苷酸还包含:序列号42的碱基序列、或相对于该碱基序列I 5个碱基缺失、被置换或者加成后的碱基序列。11.根据权利要求1所述的多能干细胞诱导剂，其特征在于: 所述单链或双链的多核苷酸还包含:由序列号41的碱基序列构成的多核苷酸的互补链。12.根据权利要求1所述的多能干细胞诱导剂，其特征在于:所述单链或双链的多核苷酸为单链的多核苷酸，并且为pre-miRNA。13.根据权利要求12所述的多能干细胞诱导剂，其特征在于:所述单链的多核苷酸包含:序列号43的碱基序列、或相对于该碱基序列I 4个碱基缺失、被置换或者加成后的碱基序列。14.一种多能干细胞诱导剂，其含有: 包含序列号41的碱基序列、或相对于该碱基序列I 3个碱基缺失、被置换或者加成后的喊基序列的小RNA, 并且将细胞向多能干细胞诱导。15.一种多能干细胞诱导剂，其特征在于，含有选自由如下碱基序列组成的组中的一种以上的碱基序列的多核苷酸: a)序列号43的碱基序列； b)相对于序列号43的碱基序列，具有80%以上相同性的碱基序列；c)序列号43的碱基序列中，一个或多个碱基缺失、被置换或者加成后的碱基序列； d)针对与序列号43的碱基序列互补的碱基序列构成的核...

【专利技术属性】
技术研发人员：三浦典正，
申请(专利权)人：国立大学法人鸟取大学，
类型：
国别省市：