本发明专利技术提供一种可在后代中稳定地保持且能够产生人抗体的非人动物、该非人动物的制作方法，以及利用该非人动物制造人抗体的方法，其特征在于，所述非人动物含有小鼠人工染色体，所述小鼠人工染色体包含人抗体重链基因或基因座、人抗体κ轻链基因或基因座和/或人抗体λ轻链基因或基因座，且至少2个对应于人抗体基因或基因座的内源性抗体基因或基因座被敲除。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】产生人抗体的非人动物和使用该非人动物的人抗体制作方法
本专利技术涉及包含人抗体基因的小鼠人工染色体(MouseArtificialChromosome(MAC))，以及含有该MAC并可以产生人抗体的非人动物。本专利技术还涉及上述非人动物的制作方法。本专利技术还涉及使用上述非人动物制造人抗体的方法。
技术介绍
抗体在医疗领域中作为癌症、类风湿性关节炎等治疗药而被应用。例如，曲妥珠单抗(Trastuzumab)作为针对癌细胞表面的HER2(或ErbB2)的分子靶向抗体药物，用于治疗乳腺癌。此外，托珠单抗(Tocilizumab)是人源化抗人白介素6(IL-6)受体抗体，用于类风湿性关节炎的治疗药。为了在对人给药时提高治疗效果和安全性，要求抗体是人源化抗体或人抗体。人源化抗体是将来自小鼠等异种动物的抗体重链和轻链的互补决定区的氨基酸序列替换为人抗体的相应互补决定区(CDR1、CDR2和CDR3)而得到的抗体，可以结合单克隆抗体制作技术和DNA重组技术进行制作。而人抗体则是抗体的氨基酸序列完全来自人的抗体，可以通过利用携带人抗体基因的人抗体产生小鼠(例如KM小鼠(协和发酵麒麟株式会社))的技术、将ScFV等抗体以重组抗体的形式呈现在纤维状噬菌体表面的噬菌体展示法等制作。与本专利技术相关的技术是制作可以产生人抗体的小鼠等非人动物的技术，这种动物保持有人抗体基因。由于构成该人抗体基因的重链基因、κ轻链基因、λ轻链基因分别存在于不同的染色体上，并且由于具有大约0.9Mb以上的大小，因此如果要制作产生人抗体的非人动物，需要人工染色体载体等染色体工程技术。专利文献1中公开了一种非人动物和人抗体的制造方法，其使用包含人抗体基因的人类人工染色体能够产生人抗体的小鼠等。专利文献2中公开了一种转基因有蹄动物，其特征在于，含有编码人免疫球蛋白基因的整体或其一部分的1个以上的核酸，并且所述有蹄动物选自由牛、绵羊和山羊组成的组，所述人免疫球蛋白基因表达经过重排的1个以上的人免疫球蛋白分子。专利文献3中公开了一种人类人工染色体载体、具有该人类人工染色体载体的动物，以及生产人抗体的方法，所述人类人工染色体载体包含人抗体重链基因、人抗体轻链基因和人抗体替换轻链基因。专利文献4中公开了一种小鼠人工染色体。非专利文献1中对利用转基因动物生产人抗体进行了综述。该文献中举出了在目前的转基因动物中，人抗体的生产效率低的问题。作为该问题的解决方法，文献中提出了将内源性抗体基因敲除，并使人可变区的V、D、J片段与内源性C基因结合的方案。现有技术文献专利文献专利文献1：日本国专利第4082740号公报专利文献2：日本国专利第3797974号公报专利文献3：国际公布WO2011/062206专利文献4：日本国专利第5557217号公报非专利文献非专利文献1：M.Bruggemannetal.,Arc.Immunol.Ther.Exp.(2015)63:101-108
技术实现思路
专利技术所要解决的问题本专利技术的目的在于提供一种稳定地保持且可以传递给后代的产生人抗体的非人动物(例如小鼠、大鼠等)，以及使用该动物的人抗体的制造方法。解决问题的技术方案概括而言，本专利技术包含以下特征：(1)一种非人动物，其含有小鼠人工染色体载体(以下称作“hIGHK-MAC”)，hIGHK-MAC包含人抗体重链基因或基因座，以及人抗体κ轻链基因或基因座。(2)一种非人动物，其含有小鼠人工染色体载体(以下称作“hIGHL-MAC”)，hIGHL-MAC包含人抗体重链基因或基因座，以及人抗体λ轻链基因或基因座。(3)一种非人动物，其含有小鼠人工染色体(以下称“hIGHK-MAC”)和小鼠人工染色体载体(以下称“hIGHL-MAC”)，hIGHK-MAC包含人抗体重链基因或基因座，以及人抗体κ轻链基因或基因座；hIGHL-MAC包含人抗体重链基因或基因座，以及人抗体λ轻链基因或基因座。(4)一种非人动物，其含有小鼠人工染色体载体(以下称“hIGHKL-MAC”)，hIGHKL-MAC包含人抗体重链基因或基因座、人抗体κ轻链基因或基因座，以及人抗体λ轻链基因或基因座。(5)根据上述(1)～(4)中任一项所述的非人动物，其中，所述非人动物为哺乳动物。(6)根据上述(5)所述的非人动物，其中，所述哺乳动物为啮齿类。(7)根据上述(6)所述的非人动物，其中，所述啮齿类为小鼠或大鼠。(8)根据上述(1)～(7)中任一项所述的非人动物，其中，所述非人动物的至少2个内源性抗体基因或基因座被敲除。(9)一种能够产生人抗体的非人动物的制作方法，所述方法包括：使上述(1)所述的非人动物与其中对应于人抗体重链基因或基因座以及人抗体κ和λ轻链基因或基因座的内源性抗体基因或基因座被敲除的同种非人动物进行交配，并选择含hIGHK-MAC且所述内源性抗体基因或基因座被敲除的非人动物。(10)一种能够产生人抗体的非人动物的制作方法，所述方法包括：使上述(2)所述的非人动物与其中对应于人抗体重链基因或基因座以及人抗体κ和λ轻链基因或基因座相的内源性抗体基因或基因座被敲除的同种非人动物进行交配，并选择含hIGHL-MAC且所述内源性抗体基因或基因座被敲除的非人动物。(11)一种能够产生人抗体的非人动物的制作方法，所述方法包括以下步骤：使上述(1)所述的非人动物与上述(2)所述的非人动物进行交配，制作含hIGHK-MAC和hIGHL-MAC的非人动物；以及使制作的非人动物与其中对应于人抗体重链基因或基因座以及人抗体κ和λ轻链基因或基因座的内源性抗体基因或基因座被敲除的同种非人动物进行交配，并选择含hIGHK-MAC和hIGHL-MAC且所述内源性抗体基因或基因座被敲除的非人动物。(12)一种能够产生人抗体的非人动物的制作方法，所述方法包括：使含有小鼠人工染色体载体(hIGHK-MAC)且对应于人抗体重链基因或基因座以及人抗体κ和λ轻链基因或基因座的内源性抗体基因或基因座被敲除的非人动物与含有小鼠人工染色体载体(hIGHL-MAC)且对应于人抗体重链基因或基因座以及人抗体κ和λ轻链基因或基因座的内源性抗体基因或基因座被敲除的非人动物进行交配，并选择含hIGHK-MAC和hIGHL-MAC且所述内源性抗体基因或基因座被敲除的非人动物，其中，所述hIGHK-MAC包含人抗体重链基因或基因座以及人抗体κ轻链基因或基因座，所述hIGHL-MAC包含人抗体重链基因或基因座以及人抗体λ轻链基因或基因座。(13)一种能够产生人抗体的非人动物的制作方法，所述方法包括：使上述(4)所述的非人动物其中对应于人抗体重链基因或基因座、人抗体κ轻链基因或基因座以及人抗体λ轻链基因或基因座的内源性抗体基因被敲除的同种非人动物进行交配，并选择含hIGHKL-MAC且所述内源性抗体基因或基因座被敲除的非人动物。(14)一种制造人抗体的方法，所述方法包括以下步骤：向上述(1)～(8)中任一项所述的非人动物给予抗原物质；以及从所述非人动物中回收所产生的与所述抗原物质结合的人抗体。(15)根据上述(14)所述的方法，其中，所述抗原物质为细胞、蛋白质、多肽或肽。(16)一种制造人单克隆抗体的方法，所述方法包括以下步骤：向上述(1)～(8)中任一项所述的非人动物给予抗原物质；从本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种非人动物，其含有小鼠人工染色体载体(hIGHK‑MAC)，所述小鼠人工染色体载体(hIGHK‑MAC)包含人抗体重链基因或基因座，以及人抗体κ轻链基因或基因座。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.10.31 JP 2016-2138441.一种非人动物，其含有小鼠人工染色体载体(hIGHK-MAC)，所述小鼠人工染色体载体(hIGHK-MAC)包含人抗体重链基因或基因座，以及人抗体κ轻链基因或基因座。2.一种非人动物，其含有小鼠人工染色体载体(hIGHL-MAC)，所述小鼠人工染色体载体(hIGHL-MAC)包含人抗体重链基因或基因座，以及人抗体λ轻链基因或基因座。3.一种非人动物，其含有小鼠人工染色体载体(hIGHK-MAC)和小鼠人工染色体载体(hIGHL-MAC)，所述小鼠人工染色体载体(hIGHK-MAC)包含人抗体重链基因或基因座，以及人抗体κ轻链基因或基因座；所述小鼠人工染色体载体(hIGHL-MAC)包含人抗体重链基因或基因座，以及人抗体λ轻链基因或基因座。4.一种非人动物，其含有小鼠人工染色体载体(hIGHKL-MAC)，所述小鼠人工染色体载体(hIGHKL-MAC)包含人抗体重链基因或基因座、人抗体κ轻链基因或基因座，以及人抗体λ轻链基因或基因座。5.根据权利要求1～4中任一项所述的非人动物，其中，所述非人动物为哺乳动物。6.根据权利要求5所述的非人动物，其中，所述哺乳动物为啮齿类。7.根据权利要求6所述的非人动物，其中，所述啮齿类为小鼠或大鼠。8.根据权利要求1～7中任一项所述的非人动物，其中，所述非人动物的至少2个内源性抗体基因或基因座被敲除。9.一种能够产生人抗体的非人动物的制作方法，所述方法包括：使权利要求1所述的非人动物与其中对应于人抗体重链基因或基因座以及人抗体κ和λ轻链基因或基因座的内源性抗体基因或基因座被敲除的同种非人动物进行交配，并选择含hIGHK-MAC且所述内源性抗体基因或基因座被敲除的非人动物。10.一种能够产生人抗体的非人动物的制作方法，所述方法包括：使权利要求2所述的非人动物与其中对应于人抗体重链基因或基因座以及人抗体κ和λ轻链基因或基因座的内源性抗体基因或基因座被敲除的同种非人动物进行交配，并选择含hIGHL-MAC且所述内源性抗体基因或基因座被敲除的非人动物。11.一种能够产生人抗体的非人动物的制作方法，所述方法包括以下步骤：使权利要求1所述的非人动物与权...
【专利技术属性】
技术研发人员：香月康宏，阿部智志，押村光雄，
申请(专利权)人：国立大学法人鸟取大学，染色体移入股份公司，
类型：发明
国别省市：日本,JP
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