一种抗杨尺蠖害虫的转基因欧美杂交杨制造技术

本发明专利技术公开了一种抗杨尺蠖害虫的转基因欧美杂交杨，用下述方法获得：以杂交杨（Populus?trichocarpa×Populus?deltoides）叶片的总RNA为模板，以SEQ?ID?No.2、3为引物，RT-PCR得到SEQ?ID?No.1并连接到pJET1.2上得到重组质粒并导入E.coli菌株TOP10，筛选阳性克隆，筛选含有抗性质粒的菌落，提取质粒进行PCR验证、双酶切验证，挑选正确的重组子，命名为pBI121-WIN4并转入根癌农杆菌，进行菌落PCR鉴定；获得的菌株转化欧美杂交杨，得到抗杨尺蠖害虫的转基因欧美杂交杨。本发明专利技术的抗杨尺蠖害虫的转基因欧美杂交杨对杨尺蠖害虫的抗虫能力强。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于植物品种改良的生物技术，具体地涉及一种抗杨尺蠖害虫的转基因欧美杂交杨。
技术介绍
杨树是世界上分布最广，适应性最强的树种，是我国重要的速生用材树种之一。然而，随着环境的不断恶化，自然灾害的频繁发生，食叶害虫和蛀干害虫的危害成为大面积发展杨树丰产林的最大障碍，化学防治方法不仅成本高、污染环境，而且易使害虫产生抗药性，因此，利用基因工程方法培育具有抗虫能力的杨树新品种是控制虫害的重要途径。林木植物由于生长周期较长，总是面临周围环境中各种病虫害的侵犯，因此在长期的演化过程中，他们自身已获得了适度、有效的生物抗性机制，能够最大限度地避免逆境的危害。通过深入挖掘并利用林木植物这种自身的病虫害防御机制，利用基因工程方法培育转基因抗虫林木新品种，对发展生态林业、保护生态环境具有重要意义。WIN4是一种杨树叶片创伤后诱导表达的蛋白，目前仅被描述为一种营养储存蛋白，尚无文献资料报道其对杨树主要食叶害虫之一——鳞翅目杨尺蠖具有抗虫能力。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服现有技术的不足，提供一种抗杨尺蠖害虫的转基因欧美杂交杨。本专利技术的技术方案概 述如下:一种抗杨尺蠖害虫的转基因欧美杂交本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗杨尺蠖害虫的转基因欧美杂交杨，其特征是用下述方法获得：（1）以杂交杨（Populus?trichocarpa×Populus?deltoides）叶片的总RNA为模板，以SEQID?No.2、SEQ?ID?No.3所示核苷酸序列为上、下游引物，通过RT?PCR得到了SEQ?ID?No.1表示的核苷酸序列；（2）将凝胶回收的SEQ?ID?No.1表示的核苷酸序列连接到pJET1.2载体上得到重组质粒并导入E.coli菌株TOP10，筛选出阳性克隆，提取质粒；（3）将步骤（2）获得的质粒双酶切，将凝胶回收的SEQ?ID?No.1表示的核苷酸序列与经双酶切的植物表达载体pBI121进行连接，转...

【技术特征摘要】
1.一种抗杨尺蠖害虫的转基因欧美杂交杨，其特征是用下述方法获得: (1)以杂交杨(PopulustrichocarpaXPopulus deltoides)叶片的总 RNA 为模板，以SEQID N0.2,SEQ ID N0.3所示核苷酸序列为上、下游引物，通过RT-PCR得到了 SEQ ID N0.1表示的核苷酸序列； (2)将凝胶回收的 SEQID N0.1表示的核苷酸序列连接到pJETl.2载体上得到重组质粒并导入E.coli菌株T0P10，筛选出阳性克隆，提取质粒； (3)将步骤(2)获得的质粒双酶切，将凝胶回收的SEQID N0.1表示的核苷酸序列...

【专利技术属性】
技术研发人员：王洁华，杨少辉，宋英今，
申请(专利权)人：天津大学，
类型：发明
国别省市：