醋酸格拉默分子量标记制造技术

本发明专利技术的方面涉及用于精确测定醋酸格拉默的平均分子量的醋酸格拉默分子量标记。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】醋酸格拉默分子量标记引言本专利技术的方面涉及不具有预定氨基酸序列的多肽，其用作醋酸格拉默的分子量标记，并且用于精确测定醋酸格拉默的平均分子量。醋酸格拉默(以前称为共聚物-1)化学上称为L-谷氨酸与L-丙氨酸、L-赖氨酸和L-酪氨酸的聚合物的醋酸盐。其具有式(I)的结构式。(Glu, Ala, Lys, Tyr) x. XCH3COOH(C5H9NO4. C3H7NO2. C6H14N2O2. C9H11NO3) x. XC2H4O2式⑴醋酸格拉默是多肽的合成混合物的乙酸盐，所述多肽的每一种基本由四种天然氨基酸组成平均摩尔份数分别为0. 141,0. 427,0. 095和0. 338的L-谷氨酸、L-丙氨酸、L-酪氨酸和L-赖氨酸。醋酸格拉默的平均分子量为5，000-9，000道尔顿。醋酸格拉默在美国以 Copaxone (Teva Pharmaceutical Industries Ltd.的注册商标)销售。指出醋酸格拉默用于降低患有复发-缓解型多发性硬化症(RRMS)的患者的复发频率。第6，514，938号美国专利公开了七种具有在该专利中鉴定的氨基酸序列的多肽。第7，074，580号美国专利公开了用于获得含有多肽混合物的药品的方法。每种多肽基本由丙氨酸、谷氨酸、酪氨酸和赖氨酸组成。混合物具有4000道尔顿至13，000道尔顿的平均分子量，并且在该混合物中，丙氨酸的摩尔份数为0. 427，谷氨酸的摩尔份数为0. 141，赖氨酸的摩尔份数为0. 337，并且酪氨酸的摩尔份数为0. 093。该专利教导了测定某一批次的多肽水性混合物的分子量分布，所述多肽的每一种基本由丙氨酸、谷氨酸、酪氨酸和赖氨酸组成。分子量分布测定使用凝胶渗透色谱柱以测定混合物是否具有用于包含在药品中的4000道尔顿至13，000道尔顿的平均分子量。测定方法包括使用凝胶渗透色谱柱通过使多种分子量标记在柱上进行层析来建立在柱上的保留时间与分子量之间的关系，从而校准所获得的分子量，其中所述分子量标记的每一种为基本由丙氨酸、谷氨酸、酪氨酸和赖氨酸组成的多肽。第7，163，802号美国专利公开了用于获得含多肽混合物的药品的方法，所述多肽的每一种基本由丙氨酸、谷氨酸、酪氨酸和赖氨酸组成。多肽混合物具有2000道尔顿至40，000道尔顿的平均分子量，并且在该混合物中，丙氨酸的摩尔份数为0. 38至0. 5，谷氨酸的摩尔份数为0. 13至0. 15，酪氨酸的摩尔份数为0. 08至0. 10，并且赖氨酸的摩尔份数为0.3至0.4。在所述方法中，使用凝胶渗透色谱柱检测某一批次的多肽混合物(所述多肽的每一种基本由丙氨酸、谷氨酸、酪氨酸和赖氨酸组成)以测定混合物是否具有用于包含在药品中的2000道尔顿至40，000道尔顿的平均分子量。检测方法包括通过使多种分子量标记(所述分子量标记各自为基本由丙氨酸、谷氨酸、酪氨酸和赖氨酸组成并且具有预定氨基酸序列的多肽)在柱上进行层析来建立在柱上的保留时间与分子量之间的关系，从而校准凝胶渗透色谱柱，所述关系用于测定多肽混合物的平均分子量。仍亟需提供用作用于测定醋酸格拉默多肽组合物的峰值平均分子量(peakaverage molecular weight)的标准的醋酸格拉默分子量标记。专利技术概述本专利技术提供了不具有预定氨基酸序列的多肽，其用作醋酸格拉默的分子量标记，所述分子量标记用作用于测定醋酸格拉默多肽的峰值平均分子量的标准。附图简述附图说明图1为使用基于保留时间(RT)的算法，本专利技术的分子量标记的RT对那些标记的对数分子量(log molecular weight)的图。图2是根据实施例1制备的分子量标记I的MALDI谱的图示。图3是根据实施例1制备的分子量标记2的MALDI谱的图示。图4是根据实施例1制备的分子量标记3的MALDI谱的图示。图5是根据实施例1制备的分子量标记4的MALDI谱的图不。图6是Copaxone 的圆二色谱的图示。图7是根据实施例1制备的分子量标记2的圆二色谱的图示。图8是根据实施例1制备的分子量标记3的圆二色谱的图示。图9是根据实施例1制备的分子量标记4的圆二色谱的图示。专利技术详述本专利技术提供了不具有预定氨基酸序列的多肽，其用作醋酸格拉默的分子量标记，所述分子量标记用作用于测定醋酸格拉默多肽的峰值平均分子量的标准。本专利技术提供了用作用于测定醋酸格拉默多肽的峰值平均分子量的醋酸格拉默分子量标记的多肽。一方面，本专利技术提供了具有与醋酸格拉默多肽对应的氨基酸组成且经鉴定的分子量(identified molecular weight)为约2，000道尔顿至约40，000道尔顿或约2，000道尔顿至约20，000道尔顿或约2，000道尔顿至约15，000道尔顿或约2，000道尔顿至约10，000道尔顿的多肽，其用作用于测定多肽的平均分子量的分子量标记。—方面，本专利技术提供了具有与醋酸格拉默对应的氨基酸组成且经鉴定的分子量为约2，000道尔顿至约40，000道尔顿或约2，000道尔顿至约20，000道尔顿或约2，000道尔顿至约15，000道尔顿或约2，000道尔顿至约10，000道尔顿的多肽，其用作用于测定醋酸格拉默的平均分子量的分子量标记。一方面，本专利技术提供基本由以下氨基酸组成的多肽丙氨酸、谷氨酸、酪氨酸和赖氨酸，所述氨基酸的摩尔份数为约0. 38至约0. 50的丙氨酸、约0. 13至约0. 155的谷氨酸、约0. 08至约0. 12的酪氨酸和约0. 28至约0. 4的赖氨酸,其用作用于测定多肽的平均分子量的分子量标记。一方面，本专利技术提供基本由以下氨基酸组成的多肽丙氨酸、谷氨酸、酪氨酸和赖氨酸，所述氨基酸的摩尔份数为约0. 38的丙氨酸至约0. 50的丙氨酸、约0. 13的谷氨酸至约0. 155的谷氨酸、约0. 08的酪氨酸至约0. 12的酪氨酸和约0. 28的赖氨酸至约0. 4的赖氨酸组成，其用作用于测定醋酸格拉默的平均分子量的分子量标记。一方面，本专利技术提供了制备本专利技术的分子量标记的方法，其包括单独的或以所述顺序进行的下列步骤中的一步或多步(a)将醋酸格拉默多肽在凝胶渗透色谱(GPC)柱中分级；(b)使步骤(a)中收集的流份通过分子量截留膜；以及(c)通过将从步骤(b)收集的流份冻干来分离所述分子量标记。一方面，本专利技术提供了制备本专利技术的分子量标记的方法，其包括单独的或以所述顺序进行的下列步骤中的一步或多步(a)将醋酸格拉默在凝胶渗透色谱(GPC)柱中分级；(b)使步骤(a)中收集的流份通过分子量截留膜；以及(C)通过将从步骤(b)收集的流份冻干来分离所述分子量标记。步骤(a)包括在凝胶渗透色谱(GPC)柱中分级醋酸格拉默样品。可以在步骤(a)中使用的用于凝胶过滤的合适的色谱介质包括但不限于Superdex 、Sephacryl 、Superose 和Sephadex 等。Superdex 是基于已与葡聚糖共价结合的高度交联的多孔琼脂糖颗粒的复合介质。Superdex 是GEHealthcare公司的商标。Sephacryl 是与N，N，-亚甲基双丙烯酰胺交联的烯丙基葡聚糖。Sephacryl 是GE Healthcare的商标。Superose 是基于高度交联的多孔琼脂糖颗粒的具有高度物理和化学稳本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.07.29 IN 2146/CHE/2010;2010.10.04 US 61/389,31.分子量标记，其具有与醋酸格拉默对应的氨基酸组成和约2，OOO道尔顿至约40，000道尔顿的经鉴定的分子量。2.如权利要求1所述的分子量标记，其中所述经鉴定的分子量为约2，000道尔顿至约20, 000道尔顿。3.如权利要求1所述的分子量标记，其中所述经鉴定的分子量为约2，000道尔顿至约15,000道尔顿。4.如权利要求1所述的分子量标记，其中所述经鉴定的分子量为约2，000道尔顿至约10,000道尔顿。5.如权利要求1所述的分子量标记，其基本由以下氨基酸组成:丙氨酸、谷氨酸、酪氨酸和赖氨酸，所述氨基酸的摩尔份数为约0.38至约0.50的丙氨酸、约0.13至约0.15的谷氨酸、约0.08至约0.10的酪氨酸和约0.3至约0.4的赖氨酸。6.如权利要求1所述的分子量标记，其为峰值平均分子量为16833道尔顿的分子量标记1、峰值平均分子量为8908道尔顿的分子量标记2、峰值平均分子量为5006道尔顿的分子量标记3或峰值平均分子量为3709道尔顿的分子量标...

【专利技术属性】
技术研发人员：S·斯里尼瓦桑，K·拉玛萨米，C·K·N·哈勒姆，Y·K·K·科马拉沃卢，S·R·卡勒姆，B·H·V·甘吉，R·C·鲍托朱，B·戴维，
申请(专利权)人：雷迪博士实验室有限公司，雷迪博士实验室公司，
类型：
国别省市：