本发明专利技术涉及微生物农药制剂，具体的说是一种白僵菌AS-70菌株及其应用。白僵菌AS-70（Beauveria?felina）保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏日期：2012年9月29日，保藏号为：CGMCC?NO.6643。所述白僵菌的发酵产物用于制备农业杀虫剂。本发明专利技术菌株分离自福建苏澳岛采集的苔藓虫，通过测定其ITS1-5.8S-ITS2序列，并与Genbank数据库中已知菌株相应序列信息比较，其与菌株Beauveria?felina(Accession?number:AY261369)的相似度为99%。该菌株发酵产物可用于制备农业杀虫剂，具有生产工艺简单、周期短、产品成本低等特点。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及微生物农药制剂，具体的说是一种白僵菌AS-70菌株及其应用。
技术介绍
随着化学农药的大量使用，植物病虫害对其抗药性也越来越明显，随之也带来了环境污染、人畜中毒与三致(致癌、致畸、致突变)等问题。近年来，因化学农药残留而导致的“绿色壁垒”严重制约着我国农产品的出口，传统农业产业也面临着更大的风险与挑战。而与传统的化学合成农药相比，微生物源农药具有对人畜和非靶标生物安全，环境兼容性好，不易产生抗性等优点。白僵菌(Beauveria)是一类寄主范围广、致病性与适应性很强的昆虫病原真菌，对昆虫致病机制独特。应用其防治植物病虫害具有对人畜无害，环境友好，无农药残留等优点，符合未来绿色农业发展的趋势。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供一种白僵菌AS-70菌株及其应用。为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案为一种白僵菌AS-70菌株，白僵菌AS-70 (Beauveria felina)保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏日期2012年9月29日，保藏号为CGMCC6643。将所述白僵菌于发酵培养基中静置或摇床发酵培养15-50天，发酵产物待用。所述发酵培养基比例为大米100g、蛋白胨O. 6g，天然海水100mL。白僵菌AS-70菌株的应用，所述白僵菌经发酵培 养基的发酵产物用于制备农业杀虫剂。将所述白僵菌于发酵培养基中静置或摇床发酵培养15-50天，发酵产物待用。将发酵产物用溶剂提取，提取物进行柱层析分离，分离产物用于制备农业杀虫剂。所述溶剂为石油醚、乙酸乙酯、氯仿、丙酮、甲醇、乙醇、正丁醇或水中的一种或几种。所述发酵产物进行柱层析分离，以石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，收集石油醚-乙酸乙酯体积比5:1与2:1梯度的洗脱组分I与II用于制备农业杀虫剂；以氯仿-甲醇进行梯度洗脱进行柱层析分离，收集氯仿-甲醇体积比50:1与20:1梯度的洗脱组分III与IV用于制备农业杀虫剂。所述柱层析可采用硅胶柱层析、凝胶柱层析、反相柱层析及大孔吸附树脂柱层析中的一种或几种。所述石油醚-乙酸乙酯洗脱梯度为100:1至1:1 ;氯仿-甲醇洗脱梯度为100:1至1:1。本专利技术所具有的优点本专利技术所述的白僵菌AS-70菌株分离自福建苏澳岛采集的苔藓虫，通过测定其ITS1-5. 8S-1TS2序列，并与Genbank数据库中已知菌株相应序列信息比较，其与菌株Beauveria felina (Accession number :AY261369)的相似度为 99%。该菌株发酵产物具有较好杀虫活性，可用于制备农业杀虫剂，具有生产工艺简单、周期短、产品成本低及环境友好等特点，具有较好开发应用前景。具体实施例方式为阐明对本专利技术特征的理解，下面结合一些非限定性的实施实例对本专利技术做进一步阐述。本专利技术所述白僵菌(Beauveria felina),保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期2012年9月29日，保藏号为CGMCC6643 ;保藏单位地址北京市朝阳区大屯路。实施例1 :海洋来源白僵菌(Beauveria felina) AS-70菌株分类。I)菌种培养按照微生物的常规培养方法，挑取少量保存于琼脂一麦芽膏培养基的白僵菌(Beauveria felina) AS-70，接种于PDA平板表面，28°C培养7天，初期菌落呈平茸状，后期形成乳白色分生孢子梗。2)菌种初步鉴定按照文献方法(J. Nat. Prod. 2006，69，1622.)，通过克隆真菌核糖体rDNA基因转录间隔序列(ITS1-5. 8S-1TS2全长序列)、测序，并与Genbank数据库中已知菌株相应序列信息比较，其与菌株 Beauveria felina(Accessionnumber :AY261369)的相似度为 99%。序列信息如下CTCCTTTGTG·ACATACCTATCGTTGCTTCGGCGGGTCCGTCCCGGAGCTGGCAGTGCACGGCCAGCCCCGGAACCAGACGCCCGCCGAGGACCCCAAACTCTTGTTTTTATAGTGGATCTTCTGAGTCTTATACAAAATAAATTAAAACTTTCAGCAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCGCCAGTACTCTGGCGGGCATGCCTGTCCGAGCGTCATTTCAACCCTCAGGGCCCGTCCGCGGGACCTGGCGTTGGGGATCGGCTGCCCCTGGCGGCTGCCGGCCCTGAAATACAGTGGCGGTCTCTTCGCGACCTCCCCTGCGTAGTAGTGATACCTCGCAGCCGGATAGCGGAGCGGCCACGCCGTAAAACCCCCTACTTCTCAAGGTTGACCTCGGATCAGGTAGGMTACCCGCTGAACTTAAGCATATCAATMGCGGAGGAA。实施例2:白僵菌(Beauveria felina) AS-70菌株的发酵培养I)发酵培养菌种培养按照微生物的常规培养方法，挑取少量保存于琼脂一麦芽膏培养基的白僵菌(Beauveria felina) AS-70，接种于PDA平板表面，28°C培养3天，作为规模发酵培养的菌种，待用。切取上述PDA平板表面的菌种适量，接种至已灭菌的、盛有大米培养基的锥形瓶中，室温静置培养30天后采用乙酸乙酯灭菌，待用。所述大米培养基为大米IOOg/瓶，蛋白胨O. 6g/瓶，天然海水IOOmL/瓶。2)发酵产物分离与纯化将上述白僵菌经大米培养基发酵培养的产物用乙酸乙酯超声提取3次，合并提取液，减压蒸馏得浸膏。按照洗脱液极性递增顺序，分别以石油醚-乙酸乙酯(体积比100:1至1:1)和氯仿-甲醇(体积比100:1至1:1)为梯度洗脱剂进行硅胶柱层析分离。分别收集以石油醚-乙酸乙酯为洗脱液的体积比5:1与2:1梯度的洗脱组分I与II，用于制备农业杀虫剂；收集以氯仿-甲醇为洗脱液的体积比50:1与20:1梯度的洗脱组分III与IV，用于制备农业杀虫剂。实施例3 :杀虫活性试验卤虫(brine shrimp)也称盐水丰年虫,分类上属于节肢动物门，甲壳纲,无甲目，盐水丰年虫科，卤虫属。卤虫作为一种杀虫剂筛选模型，国内外已经有相关报道，王再强等[农药，2011，50 (4) :261 - 263]以卤虫作为模型生物评价了 14种常见杀虫剂的杀虫活性，结果表明用卤虫筛选具有杀虫活性的化合物，方法简便，且对多种不同作用机制的杀虫剂敏感；胡志钰等[海洋通报，2000，19(4):36-41]以卤虫作为指示生物，快速筛选海洋放线菌中具有杀虫活性的化合物；Blizzard Τ. Α.等[J. Antibiot，1989，42 (8) : 1304-1307]以卤虫快速筛选杀虫剂阿维菌素的类似物。总之，卤虫作为杀虫活性测定的模型生物具有来源广泛、操作简单、所需化合物的量少等优势，可以提高筛选效率，对新农业杀虫剂的研发具有重要意义。I)卤虫卵的孵化取卤虫卵IOOmg置于500mL烧杯中，加入人工海水400m本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种白僵菌AS?70菌株，其特征在于：白僵菌AS?70（Beauveria?felina）保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏日期：2012年9月29日，保藏号为：CGMCC?6643。
【技术特征摘要】
1.一种白僵菌AS-70菌株,其特征在于白僵菌AS-70 (Beauveria felina)保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏日期2012年9月29日，保藏号为=CGMCC 6643。2.按权利要求1所述的白僵菌AS-70菌株，其特征在于将所述白僵菌于发酵培养基中静置或摇床发酵培养15-50天，发酵产物待用。3.按权利要求2所述的白僵菌AS-70菌株，其特征在于所述发酵培养基比例为大米100g、蛋白胨0. 6g，天然海水100mL。4.一种权利要求1所述的白僵菌AS-70菌株的应用，其特征在于所述白僵菌经发酵培养基的发酵产物用于制备农业杀虫剂。5.按权利要求4所述的白僵菌AS-70菌株的应用，其特征在于将所述白僵菌于发酵培养基中静置或摇床发酵培养15-50天，发酵产物待用。6.按权利要求4所述的白僵菌AS-70菌株的应用，其特征在于将发酵产物用溶剂提取，提取物进行柱层析分...
【专利技术属性】
技术研发人员：王斌贵，杜丰玉，
申请(专利权)人：中国科学院海洋研究所，
类型：发明
国别省市：
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