一种同步获得两种以上同质多倍体的枣树多倍体种质创新方法，即对枣树一年生枝条短截后，用TDZ和AgNO3诱导截口产生愈伤组织，进而利用两次秋水仙素诱导截口产生不同倍性愈伤组织，经过芽再生，获得两种以上倍性的枣树同质多倍体。该技术可同步获得不同倍性的枣同质多倍体，不需要进行嵌合体的分离纯化，且对树体损害较小，所获多倍体的枝条可当年开花并完全木质化，第二年春天即可用于嫁接扩繁，可大大缩短多倍体育种周期。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及。
技术介绍
冬饿iZiziphus jujuba Mill.)是原产我国的特色优势果树和第一大干果树种。随着枣产业的快速发展，迫切需要换代型优良新品种。由于枣花很小、人工去雄非常困难，加之多数枣树优良品种的胚败育现象非常严重，致使枣树的常规杂交育种因难于获得杂交后代而进展十分缓慢。 果树多倍体在果实大小、抗逆性等方面通常会表现出明显的优势，多倍体育种在果树上日益受到重视。在枣树上，已经发现的自然三倍体品种赞皇大枣、苹果枣以及本课题组通过秋水仙素诱变培育出的四倍体枣品种‘辰光’，均表现出果个大、丰产、适应性强等优点；率树的近缘种毛叶率(么mauritiana Lam.)多为四倍体、六倍体、八倍体等,也都表现为果个大、适应性强。因此，对枣树进行多倍体诱导前景广阔。在枣树多倍体种质创新和育种方面，田间条件下的茎尖诱变和组培条件下的茎尖、愈伤组织诱变等已取得重要进展，尤其是本课题组专利技术的田间愈伤组织秋水仙素诱导快速获得同质多倍体技术(专利号ZL 201010033318.1)，避免了复杂费时的嵌合体纯化过程，而且诱变得到的多倍体枝条当年即可开花甚至结果，并可用于嫁接扩繁，有效缩短了多倍体育种周期。但实践中发现，上述技术还是存在一些不足之处，一是要求在生长季选择粗壮枝条(一般需要2年时间)进行短截，需要去大量除枝叶，对树体的伤害较大，严重影响树势，且诱变效率较低；二是获得的多倍体为一次加倍的多倍体，即如果处理的材料为二倍体时只能获得四倍体，若想获得八倍体，还需要对具有一定粗度(至少需要2年)和一定数量的前期获得的四倍体枝条进行二次加倍处理。鉴于此，探索田间条件下对树体损伤小且一次获得不同倍性多倍体的枣树多倍体种质创新方法很有价值。
技术实现思路
针对本课题组前一个专利(专利号ZL 201010033318.1)存在的只能实现一次加倍、试验树体损伤大、历时长的问题，本专利进行了两点革新，一是改诱变多年生(2年生以上)枝干为一年生枝条，实践表明，对一年生枝条进行短截和秋水仙素诱变处理，截口更容易形成愈伤组织和出芽，加之一年生枝条数量多、个体小，操作起来更简单易行，诱导效率更高，而且对树体损伤小；二是改秋水仙素I次处理为2次处理，可提高多倍体诱变效率，实现一次加倍的同时，可实现二次加倍，获得四倍体、八倍体等。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是首先在生长季对枣树的一年生枝条进行中度短截；其次利用植物生长调节剂诱导截面处产生愈伤组织，继而先后用秋水仙素对愈伤组织进行2次处理，诱变获得不同倍性的愈伤组织；最后愈伤组织经过芽的再生过程，获得不同倍性新种质。本专利技术的具体内容，即同步获得两种以上同质多倍体的枣树多倍体种质创新方法如下 (1)枝条中度短截于生长季，选择生长健壮的一年生枝条，从其中部进行短截； (2)不同倍性愈伤组织的诱导枝条中度短截后，迅速用脱脂棉覆盖截口，将含有TDZ(4. Omg/L)、AgNO3(2. Omg/L)的药液滴加在脱脂棉上，使浸湿的脱脂棉与截口充分接触，覆上塑料袋，第2天去除塑料袋和脱脂棉，然后将湿泥覆盖在截口上，最外面用塑料袋全部套住并绑紧袋口 ；3-5天后，去掉湿泥，用脱脂棉覆盖截口处产生的愈伤组织，将O. 025%-0. 075%的秋水仙素(含有O. 1% 二甲基亚砜)滴加到脱脂棉上，迅速覆上黑塑料袋，并绑紧袋口 ；12小时后，去除脱脂棉，用湿泥直接覆盖截口愈伤组织，再用塑料袋套住，绑紧袋口 ；3_4天后，再次用O. 025%-0. 075%的秋水仙素处理截口愈伤组织12小时，具体操作方法同上； (3)不同倍性芽的再生约15-20天后，在截口愈伤组织上有新芽长出，当芽长度达到 2cm时，去除所有覆盖物，对新生芽进行染色体倍性检测。获得本专利技术专利的有益效果是，通过在一年生枝条截面上诱导不同倍性愈伤组织，诱变当年即可同步获得两种以上倍性的同质多倍体，不需要进一步分离纯化，四倍体变异芽率达4. 8%-22. 9%，八倍体变异芽率达4. 8%-16. 7%，且对树体损害较小，新倍性种质的枝条可实现当年开花并完全木质化，第二年春天即可用于嫁接扩繁。该技术应用于枣树多倍体育种实践，易操作，诱变效率高，可大大缩短育种周期，提高多倍体育种效率。附图说明图1四倍体幼芽 图2八倍体幼芽 图3诱变的四倍体枣吊当年开花情况具体实施例方式 以二倍体枣品种‘大荔龙枣’为试材，于5月中旬，选择健壮一年生枝条，用修枝剪在其中部进行短截；迅速用脱脂棉覆盖截口，将含有TDZ (4. Omg/L)、AgN03 (2. Omg/L)的药液滴加在脱脂棉上，使浸湿的脱脂棉与截口充分接触，覆上塑料袋，第2天去除塑料袋和脱脂棉，然后将湿泥覆盖在截口上，最外面用塑料袋全部套住并绑紧袋口 ；3-5天后，去掉湿泥，用脱脂棉覆盖截口愈伤组织，将O. 05%的秋水仙素(含有O. 1% 二甲基亚砜)滴加到脱脂棉上，迅速覆上黑塑料袋，并绑紧袋口 ；12小时后，去除脱脂棉，用湿泥直接覆盖截口愈伤组织，并用塑料袋套住，绑紧袋口 ；3天后，再次用O. 05%的秋水仙素处理截口愈伤组织12小时，具体操作方法同上；约15天后，截口愈伤组织上有新芽长出，当芽长度达到2cm时，去除所有覆盖物，采用流式细胞仪检测新芽的染色体倍数，四倍体变异芽率达22. 9%，八倍体变异芽率达5. 7%。权利要求1.，其特征在于对枣树一年生枝条进行短截和截口愈伤组织诱导，进而用秋水仙素两次诱变截口愈伤组织，同步获得两种以上同质多倍体，包括以下几个步骤(1)枝条中度短截于生长季，选择健壮的枣树一年生枝条，从其中部进行短截；(2)不同倍性愈伤组织的诱导枝条中度短截后，迅速用脱脂棉覆盖截口，将含有.4.Omg/L TDZ、2.0mg/L AgNO3的药液滴加在脱脂棉上，使浸湿的脱脂棉与截面充分接触，覆上塑料袋，第2天去除塑料袋和脱脂棉，然后将湿泥覆盖在截口上，最外面用塑料袋全部套住并绑紧袋口 ；3_5d后，去掉湿泥，用脱脂棉覆盖截口愈伤组织，将含有0.1% 二甲基亚砜的O. 025%-0. 075%秋水仙素滴加到脱脂棉上，迅速覆上黑塑料袋，并绑紧袋口 ；12h后，去除脱脂棉，用湿泥直接覆盖愈伤组织，再用塑料袋套住，绑紧袋口 ；3_4 d后，再次用秋水仙素处理截口愈伤组织12h，具体操作方法同上；(3)不同倍性芽的再生约15-20d后，在截口愈伤组织上有新芽长出，当芽长度达到 2cm时，去除所有覆盖物，对新生芽进行染色体倍性检测。全文摘要，即对枣树一年生枝条短截后，用TDZ和AgNO3诱导截口产生愈伤组织，进而利用两次秋水仙素诱导截口产生不同倍性愈伤组织，经过芽再生，获得两种以上倍性的枣树同质多倍体。该技术可同步获得不同倍性的枣同质多倍体，不需要进行嵌合体的分离纯化，且对树体损害较小，所获多倍体的枝条可当年开花并完全木质化，第二年春天即可用于嫁接扩繁，可大大缩短多倍体育种周期。文档编号A01G17/00GK103004548SQ20121053099公开日2013年4月3日 申请日期2012年12月11日 优先权日2012年12月11日专利技术者刘孟军, 刘平, 石庆华 申请人:河北农业大学本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种同步获得两种以上同质多倍体的枣树多倍体种质创新方法，其特征在于对枣树一年生枝条进行短截和截口愈伤组织诱导，进而用秋水仙素两次诱变截口愈伤组织，同步获得两种以上同质多倍体，包括以下几个步骤：（1）枝条中度短截??于生长季，选择健壮的枣树一年生枝条，从其中部进行短截；（2）不同倍性愈伤组织的诱导??枝条中度短截后，迅速用脱脂棉覆盖截口，将含有4.0mg/L?TDZ、2.0mg/L?AgNO3的药液滴加在脱脂棉上，使浸湿的脱脂棉与截面充分接触，覆上塑料袋，第2天去除塑料袋和脱脂棉，然后将湿泥覆盖在截口上，最外面用塑料袋全部套住并绑紧袋口；3?5d?后，去掉湿泥，用脱脂棉覆盖截口愈伤组织，将含有0.1%二甲基亚砜的0.025%?0.075%秋水仙素滴加到脱脂棉上，迅速覆上黑塑料袋，并绑紧袋口；12h?后，去除脱脂棉，用湿泥直接覆盖愈伤组织，再用塑料袋套住，绑紧袋口；3?4?d?后，再次用秋水仙素处理截口愈伤组织12h，具体操作方法同上；（3）不同倍性芽的再生??约15?20d后，在截口愈伤组织上有新芽长出，当芽长度达到2cm时，去除所有覆盖物，对新生芽进行染色体倍性检测。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：刘孟军，刘平，石庆华，
申请(专利权)人：河北农业大学，
类型：发明
国别省市：
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