一种Lactobacillus casei Zhang（CGMCC 1697）的检测方法技术

本发明专利技术涉及一种用于检测Lactobacillus?casei?Zhang（CGMCC?1697）的检测方法的设计，应用该方法可以对样品中的Lactobacillus?casei?Zhang（CGMCC?1697）进行检测，可准确，快速的完成发酵乳制品，发酵食品以及人体肠道中益生菌Lactobacillus?casei?Zhang（CGMCC?1697）定性和定量测定。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种用于检测Lactobacillus casei ZhangCCGMCC 1697)的检测方法的设计，应用该方法可以对肠道中的Lactobacillus casei ZhangCCGMCC 1697)进行检测，可准确，快速的完成发酵乳制品，发酵食品以及人体肠道中益生菌Lactobacillus caseiZhang (CGMCC 1697)定性和定量测定。
技术介绍
Lactobacillus casei Zhang (CGMCC 1697)是从内蒙古农业大学乳酸菌菌种资源库保藏的243株分离自自然发酵酸马奶中的乳杆菌中优选的I株具有优良益生特性的乳杆菌。该菌株在消化系统中具有优异的耐受胃酸、胆盐和牛磺胆酸钠水解能力。其具有乳杆菌共同的特性，即为革兰氏阳性、过氧化氢酶试验阴性、硝酸盐还原试验阴性、不液化明胶、无运动性、能在PH4. 5的BLB液体培养基中生长发育。L. casei ZhangCCGMCC 1697)属同型乳酸发酵乳杆菌，葡萄糖发酵不产气，经EMP途径只产生乳酸，且产生L-乳酸。能够利用核糖、葡萄糖、甘露糖、甘露醇、果糖、半乳糖、蔗糖、麦芽糖、蕈糖、山本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种定性定量检测L.casei?Zhang（CGMCC?1697）的方法，包括如下步骤：（1）从检测样品中提取DNA,制备用于进一步扩增的模板DNA；（2）PCR扩增，以L.casei?Zhang（CGMCC?1697）的全基因组序列为依据，设计如下引物序列：LcZ?F:tgagccgctatctgatagtctt；LcZ?R:ccgacgtaccagctcact，利用设计的引物通过PCR扩增模板DNA；（3）通过琼脂糖凝胶电泳来检测PCR扩增产物，定性检测样品中的L.casei?Zhang（CGMCC?1697）；（4）通过q?PCR检测样品中L.casei?Zhang（CGMCC?1697...

【技术特征摘要】
1.一种定性定量检测L. casei ZhangCCGMCC 1697)的方法，包括如下步骤(I)从检测样品中提取DNA，制备用于进一步扩增的模板DNA ；(2)PCR扩增，以L. casei Zhang (CGMCC1697)的全基因组序列为依据，设计如下引物序列LcZ F:tgagccgctatctgatagtctt ；LcZR:ccgacgtaccagctcact,利用设计的引物通过PCR扩增模板DNA ； (3)通过琼脂糖凝胶电泳来检测PCR扩增产物，定性检测样品中的L. casei Zhang (CGMCC 1697)； (4)通过q-PCR检测样品中 L. casei Zhang (CGMCC 1697)的数量。2.权利要求I所述的一种定性定量检测L.casei ZhangCCGMCC 1697)的方法，其特征在于，包括如下步骤 (O从检测样品中提取DNA，制备用于进一步扩增的模板DNA 采用液氮冻融-CTAB法取I. Og样品洗涤处理，将洗脱的菌体于I. 5mL离心管中，立即置于液氮中完全冻结，取出后放入65°C水浴中融化5min，反复冻融3次，加O. ImL 10%SDS和10. O μ L 10mg/mL蛋白酶K，于37°C恒温摇床中200r/min摇动2h，室温下12000g离心IOmin,收集上清液转移至另一离心管中，上清液与等体积的氯仿于12000g离心IOmin,吸取上清液转移至另一离心管中进行酚氯仿抽提2次，经O. I倍体积的醋酸钠，I倍体积的冰异丙醇沉淀总DNA，然后70%乙醇洗涤沉淀2次，回溶备用； (2)PCR 扩增 L. casei Zhang (CGMCC 1697)的特异性片段 扩增引物具体序列为；LcZ F:tgagccgctatctgatagtctt ;LcZ R:ccgacgtaccagctcact; 扩增体系 反应体系 50μ L :10XPCR Buffer 5μ L,25mmol/L Mg2+ I. O μ L，2· 5mmol/L dN...

【专利技术属性】
技术研发人员：张和平，张家超，陈永福，
申请(专利权)人：内蒙古农业大学，
类型：发明
国别省市：