一种利用雄蕊瓣化标记不结球白菜雄性不育基因的方法技术

本发明专利技术涉及一种利用雄蕊瓣化标记不结球白菜雄性不育基因的方法，属于生物技术领域，用于不结球白菜雄性不育系的分子标记辅助选择育种。用标记引物AFLP17，或者用标记引物SCAR33，扩增由雄蕊瓣化品系及其保持系RNA反转录合成的DNA，如果能够扩增出300bp的片段，就标志着不结球白菜雄性不育基因的存在。本发明专利技术对不结球白菜雄蕊瓣化品系W053及其保持系W052?RNA反转录合成的DNA进行cDNA-AFLP及SCAR分子标记的筛选，可有效开展不结球白菜雄性不育系的分子标记辅助选育，大大提高选择效率，从而加快育种进程。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术公开了，属于生物
，用于不结球白菜雄性不育系的分子标记辅助选择育种。
技术介绍
近年来，不结球白菜(Brassicacampestris L. ssp. chinensis Makino)的需求量不断增长，但其具有不耐储运的特性，且品种较为单一。这就使杂种优势利用的重要性日益突显，通过杂交获得具有优质、丰产、抗逆性强的不结球白菜品种。目前，广泛用于配制杂交种的途径主要有自交不亲和系、化学杀雄和雄性不育系等，但是前两种途径分别在工作量和效果方面具有很大的缺陷。因此，雄性不育系的利用成为当前杂种优势利用的首选途径。通常情况下，无论是细胞质雄性不育(CMS)还是细胞核雄性不育(GMS)，大都表 现雄蕊退化引起的不能产生花粉或不产生有活性花粉的雄性不育类型，其雄性器官虽然退化、畸形，但仍然残存(俞咪娜，2008)。然而，雄蕊瓣化突变体表现为花瓣错位表达于雄蕊位置以致雄蕊消失，雌雄两性花变成无雄蕊的单性雌花，由此产生的雄性不育稳定、彻底，是一种新的雄性不育类型，为雄性不育机理的研究提供了很好的材料，同时也丰富了现有不结球白菜雄性不育的类型(张彦锋，2010)。因此，预测以这一本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用雄蕊瓣化标记不结球白菜雄性不育基因的方法，其特征在于：用标记引物AFLP17，左端引物序列：GACTGCGTACCAATTCAGC，右端引物序列：GATGAGTCCTGAGTAATGC；或者用标记引物SCAR33，左端引物序列：CTGAGTAATCGGGCATGCAA，右端引物序列：GTAATCGCAGCCCAGACAAC。扩增由雄蕊瓣化品系及其保持系RNA反转录合成的DNA，如果能够扩增出300bp的片段，则标志着不结球白菜雄性不育基因的存在。

【技术特征摘要】
1.一种利用雄蕊瓣化标记不结球白菜雄性不育基因的方法，其特征在于用标记引物 AFLP17，左端引物序列GACTGCGTACCAATTCAGC，右端引物序列GATGAGTCCTGAGTAATGC ；或者用标记引物SCAR33，左端引物序列CTGAGTAATCGGGCATGCAA，右端引物序列GTAATCGCAGCCCAGACAAC。扩增由雄蕊瓣化品系及其保持系RNA反转录合成的DNA，如果能够扩增出300bp的片段，则标志着不结球白菜雄性不育基因的存在。2.根据权利要求I所述的一种利用雄蕊瓣化标记不结球白菜雄性不育基因的方法，其中采用的AFLP17和SCAR33两种分子标记引物是通过以下方法筛选获得的 1)选用不结球白菜雄蕊瓣化品系W053及其保持系W052； 2)用于筛选标记引物的DNA模板的制备 提取植物组织总RNA并反转录合成双链DNA，利用识别序列分别6bp和4bp的限制性内切酶EcoRI和MseI将双链DNA酶切并加上适宜的接头，使用相应的引物进行预扩增获得大量的模板，产物稀释后用于选择性扩增； 3)标记引物的筛选 使用64对选择性扩增引物进行PCR反应，体系为20μ 1，其中模板2μ 1，左端引物I μ 1，右端引物 I μ 1，IOXPCR buffer (Mg2+free) 2 μ 1，dNTP (2. 5mM) I. 6μ I, Mg2+L 2 μ 1，5U rTaq O. 2 μ 1，加ddH20至20 μ I ;PCR反应程序为94°C预变性2min，第一轮扩增参数94°C 30s, 65°C 30s, 72°C 45s，12轮循环，每轮循环温度递减O. 7°C。第二轮扩增参数940C 30s, 56...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡春梅，李树燕，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：