一种检测克罗诺杆菌属菌株的方法及其试剂盒和引物技术

本发明专利技术公开了一种检测克罗诺杆菌属菌株的方法及其检测试剂盒。该方法包括以下步骤：（1）提取待检样品的基因组DNA，以其为模板，以克罗诺杆菌属特异性扩增引物对为引物，进行PCR扩增，所述的引物对中，一条引物的序列为SEQ?ID?NO.1所示，另一条引物的序列为SEQ?ID?NO.2所示；和（2）检测438bp位置单一扩增产物的存在。本发明专利技术的方法，检测克罗诺杆菌属菌株时间短，降低了检测成本，提高了检测效率，具有单一特异性，检测结果可靠，结果判定简单。本发明专利技术为食品安全检测技术领域提供了一种简单快速灵敏的检测克罗诺杆菌属细菌的方法，对我国的食品安全具有较大意义。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及微生物检测领域，具体涉及一种检测克罗诺杆菌属菌株的方法及其试剂盒和引物。
技术介绍
克罗诺杆菌属(Cronobacter spp)是人和动物肠道内寄生的一种革兰阴性无芽孢杆菌。作为一种重要的食源性条件致病菌，克罗诺杆菌属菌株能够引起婴儿致命的感染，致死率高达10%_80%。它通常能导致婴儿严重的临床症状，例如脑脓疡，脑膜炎，坏死性小肠结肠炎和全身性败血症。曾经有在婴儿配方粉中分离到阪崎克罗诺杆菌菌株的报道。克罗诺杆菌属菌株是通过配方粉危害婴幼儿健康的重要条件性致病菌。新生婴儿或早产儿都存在通过食用污染有克罗诺杆菌属的婴儿配方粉而感染克罗诺杆菌属菌株的风险。在污染环节调查中发现，整个婴幼儿配方粉生产工艺流程中，可检测到克罗诺杆菌的污染点占到全部取样点的31%。因此，对克罗诺杆菌属菌株快速鉴定与鉴别是实现有效控制的基础。该菌在1980年被首次命名和定义后，又于2008年由一个种被重新分为克罗诺杆菌新属(Cronobacter spp·),属下分为5个新种(其中Cronobacter sakazakii称为新组合)、1个克罗诺杆菌基因种(Genomospeciese)和3个本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测克罗诺杆菌属菌株的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）提取待检样品的基因组DNA，以其为模板，以克罗诺杆菌属特异性扩增引物对为引物，进行PCR扩增，所述的引物对中，一条引物的序列为SEQ?ID?NO.1所示，另一条引物的序列为SEQ?ID?NO.2所示；和（2）检测438bp位置单一扩增产物的存在。

【技术特征摘要】
1.一种检测克罗诺杆菌属菌株的方法，其特征在于，包括以下步骤 (1)提取待检样品的基因组DNA，以其为模板，以克罗诺杆菌属特异性扩增引物对为引物，进行PCR扩增，所述的引物对中，一条引物的序列为SEQ ID NO. I所示，另一条引物的序列为SEQ ID NO. 2所示；和 (2)检测438bp位置单一扩增产物的存在。2.如权利要求I所述的方法，其特征在于，步骤(I)中，所述PCR中，PCR的反应体系为1 XPCR 反应缓冲液，10-15mmol/L Mg2+，O. 2-0. 3mmol/L dNTP，0. 1_0·3μΜ 引物 1，O.1-0. 3μ M 引物 2，Taq 酶 O. 01-0. lU/yL，DNA 模板 IO-IOOng/μ L03.如权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(I)中，所述PCR中，PCR的反应体系为I XPCR 反应缓冲液，12. 5mmol/L Mg2+，O. 25mmol/L dNTP，0. 2μΜ 引物 1，O. 2 μ M 引物 2，Taq酶 O. 04U/ μ L, DNA 模板 40ng/ μ L。4.如权利要求I所述的方法，其特征在于，步骤(I)中，所述PCR中，P...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈万义，艾连中，任婧，穆海菠，杭锋，郭本恒，李云飞，
申请(专利权)人：光明乳业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：