一种白花蛇舌草抗癌活性组分的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种白花蛇舌草抗癌活性组分的提取方法，以白花蛇舌草全草为原材料，用正己烷提取2-3次，抽滤分离正己烷提取液与余渣，余渣用85-95%乙醇提取2-3次，得到乙醇提取液；合并乙醇提取液，浓缩后得浸膏；浸膏用无离子水重悬后，分别用乙醚和乙酸乙酯萃取，萃取物合并浓缩后，经硅胶柱色谱，分别用正己烷-二氯甲烷、二氯甲烷-乙酸乙酯梯度洗脱，收集正己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯洗脱液，浓缩蒸干后得到白花蛇舌草提取物。本发明专利技术经过乙醇溶液提取、液液萃取富集及硅胶柱层析纯化，获得的白花蛇舌草抗癌活性组分中游离蒽醌类与总三萜酸成分含量，抗癌活性大大提高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种药用植物的提取和成分富集方法，具体是。
技术介绍
现代社会中，癌症在发达国家是第二位死亡原因(仅次于心脏病)，在发展中国家是第三位死亡原因(仅次于心脏病和肠道传染疾病)，已成为世界范围内一个主要健康问题，给病人、家庭和社会造成了巨大的身心痛苦和经济负担。随着我国人口老龄化进程的加快，癌症和其它老年疾病的发病率和死亡率预计将会增加。因此，寻求新颖、有效的癌症治疗药物对减轻患者痛苦、减小家庭和社会的负担具有重大意义。从传统药用植物中分离有效的抗癌成分是新药发现的一个热点领域。白花蛇舌草·(.Hedyotis diffusa Willd.)为菌草科耳草属植物的干燥全草,用于气管炎、肠痈(阑尾炎)、疮疖肿毒、湿热黄疸、小便不利等症，外用治疮疖痈肿，毒蛇咬伤。白花蛇舌草作为一味抗肿瘤中药，临床上用于手术、放化疗肿瘤病人的辅助治疗，或中晚期肿瘤病人以中医为主的抗癌治疗。目前，在白花蛇舌草中发现的活性成分有萜类(三萜和环烯醚萜)、蒽醌类、黄酮类、甾醇和多糖等，其中三萜类和蒽醌类均与白花蛇舌草的抗癌作用相关。在体外和动物试验中，主要三萜类成分熊果酸和齐墩果酸及蒽醌类成份2-羟基-3-甲基蒽醌对人白血病、直肠癌、肝癌、胃癌、宫颈癌、皮肤癌、成胶质细胞瘤的多种细胞株有明显的抑制作用。目前按提取目标化合物的不同，白花蛇舌草的提取工艺分为沸水提取法、乙醇提取法及水提醇沉法。沸水提取法常用于汤剂制备，主要用于亲水性化合物的提取，对于极性较小的三萜类和蒽醌类提取效果不佳；乙醇提取法主要用于亲脂性化合物的提取，同时也可提取部分亲水化合物；水提醇沉法则用于粗多糖的提取。这些方法耗时较长，提取效率也较低。目前白花蛇舌草的乙醇提取工艺仅停留在乙醇提取物的制备阶段，对于运用减压短柱层析富集其中有效成分的方法尚无报道。用乙醇提取的白花蛇舌草粗提物抗癌活性成分的含量较低，制约了具有高抗肿瘤活性的产品的开发。因此，探索白花蛇舌草三萜类和蒽醌类成分的超声波辅助提取和减压短柱层析富集工艺，制备具有抗癌活性的有效组分，开发具有高抗肿瘤活性的产品，对实现该药材的精细加工、提高其加工效率和附加值具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种白花蛇舌草抗癌活性组分的提取和制备方法，该方法可提高抗癌活性组分中的游离醌类与总三萜酸成分的含量。为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案是 一种白花蛇舌草抗癌活性组分的提取方法，包括以下步骤(1)白花蛇舌草全草干燥、粉碎；(2)在室温下，用正己烷超声波辅助提取2-3次，抽滤分离正己烷提取液与余渣，余渣挥干正己烷；(3)室温下，将步骤(2)中的余渣用85-95%乙醇超声波辅助提取2-3次，得到乙醇提取液；(4)合并乙醇提取液，浓缩后得浸膏；(5)浸膏用无离子水重悬，分别用乙醚和乙酸乙酯萃取，重复3-5次，萃取液减压浓缩蒸干，得到乙醚萃取物和乙酸乙酯萃取物；(6)将乙醚萃取物和乙酸乙酯萃取物混合，经硅胶减压短柱层析(附图说明图1)，分别用正己烷_ 二氯甲烷、二氯甲烷_乙酸乙酯梯度洗脱，收集正己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯洗脱液，浓缩、冷冻干燥后得到白花蛇舌抗癌活性组分。做为一种优选的技术方案，步骤(2)中，每次用正己烷提取时的液料比为I kg:5-10 L，每次超声波辅助提取30-60分钟。做为一种优选的技术方案，步骤(3)中，每次用乙醇提取时的液料比为I kg :5-10L，每次超声波辅助提取30-60分钟。做为一种优选的技术方案，步骤(4)中，合并后的提取液在40_60°C真空浓缩。做为一种优选的技术方案，步骤(5)中，萃取液在40_60°C减压浓缩蒸干。做为一种优选的技术方案，步骤(6)中，根据上样量，以400-600 mg样品/cm2柱底面积的比例选择适合的层析用玻璃布氏漏斗；将步骤(5)的浸膏用乙酸乙酯溶解，70-230目硅胶拌样，蒸干备用；400-800目硅胶干法装柱于层析用玻璃布氏漏斗中，柱内硅胶高度在7-12 cm，后经减压抽实至4-7 cm ;样品/硅胶混合物干法上样，用正己烷洗脱至柱平衡，泵压力8-12 mbar下，以高极性溶剂10-30%递增的梯度依次用正己烷-二氯甲烷、二氯甲烷-乙酸乙酯溶剂组合减压洗脱，每个梯度组合200-900 mL，每100 mL为一个流份，收集二氯甲烧乙酸乙酯=80:20 (v/v)至二氯甲烧乙酸乙酯=0 :100 (v/v)洗脱液，40-60°C减压浓缩后冷冻干燥。本专利技术还提供一种具有抗癌作用的药物，该药物是用上述白花蛇舌草提取物制成与医学上可接受的药物载体制成的片剂、胶囊、粉剂、注射剂和口服液。与以往粗提取物的制备方法不同，本专利技术经过正己烷脱脂、乙醇溶液超声波辅助提取、液液萃取富集及硅胶减压短柱层析纯化，获得白花蛇舌草抗癌活性组分。通过不同极性溶剂的梯度萃取和硅胶柱不同极性溶剂的梯度洗脱，以薄层色谱法和显色法进行监控，合并富含游离蒽醌类与总三萜酸成分的洗脱液流份，得到活性组分，超声波辅助提取可产生高速、强烈的空化效应和搅拌作用，破坏植物细胞壁，使溶剂渗透到细胞中，不仅可以提高提取效率，还可大大缩短提取时间。而与传统柱层析比较，减压短柱层析具有耗时短(一般1-2 h)、硅胶和洗脱剂用量小、上样量大、分离效果好等优点，结合上述方法使得游离蒽醌与总三萜酸在有效组分中的含量大大提高，得到的有效组分中蒽醌成分含量为416. 4mg/g，总三萜酸成分含量为83. I mg/g。为证明本方法对白花蛇舌草蒽醌和总三萜酸成分的提取、富集和纯化效果，以大黄素为标准品用乙酸镁显色法对游离蒽醌成分含量进行了，并以齐墩果酸为标准品用香草醛_高氯酸显色法对总三萜酸成分含量进行了测定，结果见表Io表I白花蛇舌草样品中蒽醌类和总三萜酸成分含量_权利要求1.一种白花蛇舌草抗癌活性组分的提取方法，其特征在于包括以下步骤(1)白花蛇舌草全草干燥、粉碎；(2)在室温下，用正己烷超声波辅助提取2-3次，抽滤分离正己烷提取液与余渣，余渣挥干正己烷；(3)室温下，将步骤(2)中的余渣用85-95%乙醇超声波辅助提取2-3次，得到乙醇提取液；(4)合并乙醇提取液，浓缩后得浸膏；(5)浸膏用无离子水重悬，分别用乙醚和乙酸乙酯萃取，重复3-5次，萃取液减压浓缩蒸干，得到乙醚萃取物和乙酸乙酯萃取物；(6)将乙醚萃取物和乙酸乙酯萃取物合并、浓缩，经硅胶减压短柱色谱，分别用正己烷_ 二氯甲烷、二氯甲烷_乙酸乙酯洗脱，收集正己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯洗脱液，浓缩、冷冻干燥后得到白花蛇舌抗癌活性组分。2.根据权利要求I所述的方法，其特征在于步骤(2)中，每次用正己烷提取时的液料比为I kg :5-10 L，每次超声波辅助提取30-60分钟。3.根据权利要求I所述的白花蛇舌草提取物，其特征在于步骤(3)中，每次用乙醇提取时的液料比为Ikg :5-10 L，每次超声波辅助提取30-60分钟。4.根据权利要求I所述的方法，其特征在于步骤(4)中，合并后的乙醇提取液在40-60°C真空浓缩。5.根据权利要求I所述的方法，其特征在于步骤(5)中，萃取液在40-60°C减压浓缩蒸干。6.根据权利要求I所述的方法，其特征在于步骤(6)中，根据上样量，以400-600mg样品/cm2柱底面积的比例选择层析用玻璃布氏漏斗；将步本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种白花蛇舌草抗癌活性组分的提取方法，其特征在于包括以下步骤：（1）白花蛇舌草全草干燥、粉碎；（2）在室温下，用正己烷超声波辅助提取2？3次，抽滤分离正己烷提取液与余渣，余渣挥干正己烷；（3）室温下，将步骤？（2）中的余渣用85？95%乙醇超声波辅助提取2？3次，得到乙醇提取液；（4）合并乙醇提取液，浓缩后得浸膏；（5）浸膏用无离子水重悬，分别用乙醚和乙酸乙酯萃取，重复3？5次，萃取液减压浓缩蒸干，得到乙醚萃取物和乙酸乙酯萃取物；（6）将乙醚萃取物和乙酸乙酯萃取物合并、浓缩，经硅胶减压短柱色谱，分别用正己烷？二氯甲烷、二氯甲烷？乙酸乙酯洗脱，收集正己烷？二氯甲烷？乙酸乙酯洗脱液，浓缩、冷冻干燥后得到白花蛇舌抗癌活性组分。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：蒙秋霞，牛宇，张丽珍，牛伟，
申请(专利权)人：牛宇，
类型：发明
国别省市：