白花蛇舌草有效部位及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种白花蛇舌草有效部位及其制备方法，本发明专利技术通过对白花蛇舌草的有效部位进行纯化，并对其中总环烯醚萜苷和6-O-对香豆酰鸡屎藤苷甲酯进行了含量测定，进一步明确了该有效部位中抗肿瘤的有效成分，有利于提高产品的稳定性；同时，通过小鼠的抗肿瘤实验以及与临床常用抗肿瘤药物环磷酰胺的对照，显示本发明专利技术白花蛇舌草有效部位的抗肿瘤作用明显。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及医药
，特别是涉及一种、 检测方法，以及其在制备抗肿瘤药物中的应用。
技术介绍
白花蛇舌草是民间常用的一种中药，其味苦、甘、性寒，归心、肺、肝、大肠经。主要功效为清热解毒，利湿，抗癌，主治肺热喘咳、咽喉肿痛、肠痈疮疡、毒蛇咬伤、热淋涩痛、水肿、痢疾、肠炎、湿热黄疽、癌肿等。近年来，许多学者对白花蛇舌草的抗肿瘤作用进行了研究，其抗肿瘤的有效成分多而且较为复杂。但是迄今未见涉及和用途的专利。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种，还提供一种白花蛇舌草有效部位的检测方法，还提供一种白花蛇舌草在制备抗肿瘤药物中的应用。本专利技术白花蛇舌草有效部位的制备方法为提取取药材白花蛇舌草加8-16重量倍的45-80%乙醇，提取1_3次，每次1_3小时，合并提取液，浓缩；纯化以石油醚萃取浓缩物的水溶液2-5次，去除石油醚层，上D-101型大孔树脂柱，上样浓度为2. 6-5. 2mg/mL，按照2-6mL/min的吸附流速进行动态吸附，其中径高比为 1 4 1 13，分别用水、10-30%、20-45%、25-60%乙醇溶液以2-5mL/min的流速进行洗脱，收集25-60%洗脱部分并蒸干，温度不高于60°C，真空干燥后即得白花蛇舌草有效部位，有效部位中6-0-对香豆酰鸡屎藤苷甲酯含量为50-85%。本专利技术白花蛇舌草有效部位的检测方法为如下含量测定中的一种或几种本专利技术白花蛇舌草有效部位中总环烯醚萜苷的含量测定精密称取6-0-对香豆酰鸡屎藤苷甲酯对照品0. 0015-0. 0038重量份，置IOmL量瓶中，加水6-10体积份，以功率250W，频率40kHz超声处理3_8分钟，放冷，用水稀释至刻度，摇勻，即得对照品溶液，其中每ImL含6-0-对香豆酰鸡屎藤苷甲酯0. 267mg ；取本专利技术白花蛇舌草有效部位0. 02-0. 04重量份，精密称定，置IOmL量瓶中，加水 6-12体积份，以功率250W，频率40kHz超声处理15-30分钟，放冷，用水稀释至刻度，摇勻， 即得。取0. 2-0. 8体积份待测溶液，置IOmL量瓶中，50-85 %乙醇加至2-8体积份，加入 30-70%盐酸1-3体积份，摇勻，80°C水解15-40分钟，取出，立即冷却，加入1_3体积份对二甲氨基苯甲醛溶液，用50-85%乙醇定容，摇勻，室温放置20-45分钟，在640nm处用分光光度计测定溶液吸光度，根据回归方程计算本专利技术白花蛇舌草有效部位中总环烯醚萜苷的含量为 85% -96%。本专利技术白花蛇舌草有效部位中6-0-对香豆酰鸡屎藤苷甲酯含量测定色谱条件色谱柱采用YMC-C18柱250mmX4. 6mm，5 μ m ；检测波长为310nm ；进样量为10 μ L，流速为l.OmL/min;柱温为30°C ；以乙腈为流动相A，以0. 05%甲酸水溶液为 流动相B，进行梯度洗脱，梯度条件为时间O 15 20 30 60分钟，流动相A乙腈由 15% 20% 20% 25% 25% ；对照品溶液的制备精密称取6-0-对香豆酰鸡屎藤苷甲酯对照品适量，力口 40-60%甲醇制成每Iml含6-0-对香豆酰鸡屎藤苷甲酯0. 105mg的溶液；精密量取上述 6-0-对香豆酰鸡屎藤苷甲酯溶液0. 5-1. 5体积份，置IOmL量瓶中，加40-60%甲醇稀释至刻度，摇勻，即得每Iml含6-0-对香豆酰鸡屎藤苷甲酯20. 9 μ g的溶液；供试品溶液的制备取本专利技术白花蛇舌草有效部位0. 0025-0. 0048重量份，精密称定，置IOOmL量瓶中，加40-60%甲醇60-85体积份，以功率250W，频率40KHz超声处理 8-12分钟，取出，放冷，加40-60 %甲醇至刻度，摇勻，用0. 45 μ m的微孔滤膜滤过，取滤液， 即得；测定法分别精密吸取上述对照品溶液、及供试品溶液各0. 008-0. 012体积份，注入液相色谱仪，测定，即得。本专利技术白花蛇舌草有效部位中含香豆酸以6-0-对香豆酰鸡屎藤苷甲酯计为 60-85%。本专利技术所述的重量份与体积份的关系为g/ml的关系。本专利技术白花蛇舌草有效部位可以单独、组合或与其它任何中西药物按任意比例配伍，加入常规辅料，按照常规工艺，制成胶囊齐 、片齐 、丸齐 、颗粒齐 、口服液体制齐 、注射剂等药学上可接受的各种剂型。其中注射液原料纯度大于80%。本专利技术通过对白花蛇舌草的有效部位进行纯化，并进行了白花蛇舌草有效部位中总环烯醚萜苷和6-0-对香豆酰鸡屎藤苷甲酯的含量测定，进而明确了该有效部位中抗肿瘤的有效成分，有利于提高产品的稳定性。同时，通过小鼠的抗肿瘤实验以及与临床常用抗肿瘤药物环磷酰胺的对照，显示本专利技术白花蛇舌草有效部位的抗肿瘤作用明显。附图说明图1 图A为样品紫外吸收图，图B为样品液相图，图C为对照品液相图，图D，E为样品质谱2 总环烯醚萜苷光谱扫描3 6-0-对香豆酰鸡屎藤苷甲酯标准曲线图4 6-0-对香豆酰鸡屎藤苷甲酯标准曲线图5 6-0-对香豆酰鸡屎藤苷甲酯标准曲线下面实验例和实施例进一步说明但不限于本专利技术。实验例1白花蛇舌草纯化后有效部位的鉴定实验条件仪器=Waters-Micromass(HPLC-MS)色谱条件如(表1);色谱柱YMC-C18柱(250mm X 4. 6mm, 5 μ m)；流动相流动相A为水(0. 05%甲酸)，流动相B为乙腈，梯度条件见下表1 ；流速1· OmL/min ；检测波长3IOnm；柱温35°C；进样体积10 μ L。表1液相分析梯度洗脱条件考察权利要求1.一种白花蛇舌草有效部位，其特征在于该有效部位由如下方法制成取药材白花蛇舌草加8-16重量倍的45-80%乙醇，提取1-3次，每次1_3小时，合并提取液，浓缩；以石油醚萃取浓缩物的水溶液2-5次，去除石油醚层，上D-101型大孔树脂柱，上样浓度为2. 6-5. 2mg/mL,按照2-6mL/min的吸附流速进行动态吸附，其中径高比为 1 4 1 13，分别用水、10-30%、20-45%、25-60%乙醇溶液以2-5mL/min的流速进行洗脱，收集25-60%洗脱部分并蒸干，温度不高于60°C，真空干燥后即得白花蛇舌草有效部位，有效部位中6-0-对香豆酰鸡屎藤苷甲酯含量为50-85%。2.如权利要求1所述的一种白花蛇舌草有效部位，其特征在于该有效部位由如下方法制成取药材白花蛇舌草加12重量倍60 %乙醇，提取2次，每次2小时，合并提取液，浓缩； 以石油醚萃取浓缩物的水溶液3次，去除石油醚层，上D-101型大孔树脂柱，上样浓度为 3.733mg/mL，按照4mL/min的吸附流速进行动态吸附，其中径高比为1 10，分别用水、 20%、30%、40%乙醇溶液以3mL/min的流速进行洗脱，收集40 %洗脱部分并蒸干，温度不高于60°C，真空干燥后即得白花蛇舌草有效部位，有效部位中6-0-对香豆酰鸡屎藤苷甲酯含量为70%。3.如权利要求1或2所述的一种白花蛇舌草有效部位的制备方法，其特征在于该方法包括如下步骤取药材白花蛇舌草加8-16重量倍的45-80%乙醇，提取1-3次，每次1_3小时，合并提取液，浓缩；以石油醚萃取浓缩物的水溶液2-5次，去除石油醚层，上D-101型大孔树脂柱，上样浓度为2. 6-5. 2m本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种白花蛇舌草有效部位，其特征在于该有效部位由如下方法制成：取药材白花蛇舌草加８－１６重量倍的４５－８０％乙醇，提取１－３次，每次１－３小时，合并提取液，浓缩；以石油醚萃取浓缩物的水溶液２－５次，去除石油醚层，上Ｄ－１０１型大孔树脂柱，上样浓度为２．６－５．２ｍｇ／ｍＬ，按照２－６ｍＬ／ｍｉｎ的吸附流速进行动态吸附，其中径高比为１∶４～１∶１３，分别用水、１０－３０％、２０－４５％、２５－６０％乙醇溶液以２－５ｍＬ／ｍｉｎ的流速进行洗脱，收集２５－６０％洗脱部分并蒸干，温度不高于６０℃，真空干燥后即得白花蛇舌草有效部位，有效部位中６－Ｏ－对香豆酰鸡屎藤苷甲酯含量为５０－８５％。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王英锋，郑宜，
申请(专利权)人：首都师范大学，
类型：发明
国别省市：11