白花蛇舌草作用于视黄醇X受体的应用制造技术

本发明专利技术提供了一种白花蛇舌草提取物ＢＨＰ组分用于制备调控视黄醇Ｘ受体的活性与功能的药物，视黄醇Ｘ受体用于筛选白花蛇舌草提取物及其包含的活性成分，以及视黄醇Ｘ受体作为受体靶点用于指导白花蛇舌草包含的活性成分的结构修饰的应用。本发明专利技术提供的白花蛇舌草提取物ＢＨＰ组分中有与视黄醇Ｘ受体结合的成分，这些成分抑制视黄醇Ｘ受体的转录激活的同时，还能显著抑制多种癌细胞的生长，两者密切相关。视黄醇Ｘ受体作为受体靶点，可以用于指导筛选白花蛇舌草提取物ＢＨＰ组分的活性成分，从中获得具有调控ＲＸＲα活性的化合物药物，也可用于指导白花蛇舌草提取物ＢＨＰ组分的结构修饰，从而获得活性更高的化合物。

Application of Oldenlandia diffusa acting on retinol X receptor

The present invention provides an Oldenlandia diffusa extract BHP components for the preparation of drug activity and function regulation of retinoid X receptor, retinoid X receptor for the screening of Hedyotis diffusa extract and active ingredients contained, and retinol X receptor as a receptor target for application of structural modification of active ingredient guidance include of Hedyotis diffusa willd. Have combined with the retinoid X receptor component of Hedyotic diffusa extract group BHP provided by the invention, the transcription of these components inhibits retinoid X receptor activation at the same time, can significantly inhibit the growth of various cancer cells, both are closely related. Retinol X receptor as a target receptor, can be used for screening the active constituents of Oldenlandia diffusa extract BHP component, to obtain a compound drug for regulating the activity of RXR alpha, also can be used to guide the structure modification of Oldenlandia diffusa extract BHP component, so as to obtain compounds with higher activity.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于中草药领域，具体地说，是关于白花蛇舌草作用于视黄醇x受体的应用。
技术介绍
核激素受体家族成员包括类固醇激素受体、甲状腺激素受体、维生素D受体、各种孤 儿受体以及由代谢中间产物活化的受体，如被脂肪酸激活的过氧化物酶体增殖因子激活受 体(PPAR)、被胆固醇代谢物激活的肝X受体(LXR)、被胆汁酸激活的法尼酯X受体(FXR)和被外源生物激活的孕烷X受体。作为转录因子，核受体在胚胎发育、细胞分化、 代谢和维持机体内平衡方面具有重要作用，其信号通路的异常可以导致增殖，再生及代谢 方面的疾病如癌症、不育、肥胖及糖尿病等。类维生素A受体属于核受体家族成员，分为视黄酸受体(RARs)和视黄醇X受体(RXRs)两大类，其中，RXRs只能和与9-顺-视黄酸结合。RXR的特殊性在于其不仅可 以形成同源二聚体，还能与众多的核受体形成异源二聚体而结合到特定的DNA反应元件 上而参与对耙基因转录的调节。白花蛇舌草(HedyotisdiffiisaWilld)，为茜草科植物白花蛇舌草的全草，具有清热、 利湿、解毒之功效，治肺热喘咳、扁桃体炎、咽喉炎、阑尾炎、痢疾、黄疸、盆腔炎、附 件炎、痈肿疔疮、毒蛇咬伤等，为常用中草药。药理研究表明白花蛇舌草具有抗肿瘤、抗 菌、消炎等活性。白花蛇舌草在体外、动物和临床实验均证实其对多种肿瘤具有明显的杀 伤作用，但是对其抗肿瘤的机理仍不甚清楚。
技术实现思路
本申请的专利技术人首次发现了白花蛇舌草提取物的BHP组分(即白花蛇舌草石油醚组 分)具有调控核受体RXRa的功能。进一步的研究发现，白花蛇舌草提取物BHP组分通过调控靶点RXR功能和抑制RXR 的转录，从而抑制癌细胞的生长，这些不同的细胞系包括MGC803胃癌细胞、H460肺 癌细胞和SMMC7721肝癌细胞。因此，本专利技术的第一个目的在于，提供一种白花蛇舌草提取物BHP组分用于制备调 控视黄醇X受体的活性与功能的药物的用途。本专利技术的第二个目的在于，提供一种视黄醇X受体用于筛选白花蛇舌草提取物BHP 组分的活性成分的应用。本专利技术还有一个目的在于，提供一种视黄醇X受体作为受体靶点用于指导白花蛇舌草 提取物BHP组分的活性成分结构修饰的应用。本专利技术提供的白花蛇舌草提取物BHP组分中有与视黄醇X受体结合的成分，这些成 分能抑制视黄醇X受体的转录激活，同时，还能显著抑制多种癌细胞的生长；研究发现， 其对癌细胞生长的抑制和癌细胞凋亡的诱导与对RXRoc蛋白的转录活性的抑制密切相关， 因此表明白花蛇舌草提取物的BHP组分可以用于治疗和/或预防肿瘤疾病。本专利技术提供的视黄醇X受体，作为细胞和受体的药物筛选系统，筛选出了针对视黄醇 X受体的白花蛇舌草提取物的BHP组分，同时，还可进一步筛选其中针对RXR的活性成 分；作为配体依赖的转录因子，当RXR与配体结合后，RXR自身发生构型变化，从而， 调控其下游基因的转录，而这些基因与细胞的生长、凋亡是密切相关的，因此，本专利技术提 供的视黄醇X受体还可以作为受体靶点用于指导白花蛇舌草提取物BHP组分的活性成分 结构修饰。附图说明图1为白花蛇舌草提取物BHP组分和RXR结合的体外Binding实验结果。 图2是白花蛇舌草提取物BHP组分对RXR同源二聚体的转录抑制作用的实验结果。 图3是白花蛇舌草提取物BHP组分对癌细胞的生长抑制作用的实验结果的示意图， 其中，图3.1为采用原始数据作图，获得的白花蛇舌草对人胃癌细胞系MGC80-3的生长 抑制作用的示意图，图3.2为以DMSO浓度为1.25mg/mL的空白对照，加白花蛇舌草组 分的测量结果除以其该DMSO组的数值作为标准化值作图，获得的白花蛇舌草对人胃癌 细胞系MGC80-3的生长抑制作用的示意图，图3.3为以DMSO浓度为40mg/mL的空白对 照，加白花蛇舌草组分的测量结果除以其该DMSO组的数值作为标准化值作图，获得的 白花蛇舌草对人胃癌细胞系MGC80-3的生长抑制作用的示意图，图3.4为釆用原始数据 作图，获得的白花蛇舌草对人肺癌细胞系H460的生长抑制作用的示意图，图3.5为以 DMSO浓度为1.25mg/mL的空白对照，加白花蛇舌草组分的测量结果除以其该DMSO组 的数值作为标准化值作图作图，获得的白花蛇舌草对人肺癌细胞系H460的生长抑制作用 的示意图，图3.6为白花蛇舌草对小鼠肺癌细胞系LLC的生长抑制作用的示意图，图3.7 为白花蛇舌草对大鼠肝癌细胞系HepAl-6的生长抑制作用 示意 。具体实施方式以下结合具体实施例，对本专利技术作进一步说明。应理解，以下实施例仅用于说明本发 明而非用于限定本专利技术的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，如《分子克隆实验室手册》(New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989)中所述的条件进行。 在本专利技术的下述实施例中，使用的溶液2*|3-Gal Assay Buffer: 200mM磷酸二氢钠缓冲液(PH7.3), 2mMMgCl2， lOOmM P -巯基乙醇，1.33mg/ml邻硝基苯-a -D-吡喃半乳糖苷(ONPG)。2*TEG buffer: 10mM Tris-HCl pH 7.6， 1.5mM EDTA pH8.0， 10%甘油。2*binding buffer:取10pL 10% BSA (牛血清白蛋白)禾卩1^LDTT (二硫苏糖醇)加 入到lmL 2*TEG buffer中。闪烁液PPO (2.5-二苯基恶唑)(购自Sigma) 2.5g， POPOP (1,4-双(5-苯基-2噁唑 基)苯)(购自Sigma) 0.075g，溶于500mL二甲苯中。在本专利技术的下述实施例中，使用的GST-RXR LBD蛋白为带有GST标记的RXR ligand binding domain的纯化蛋白，表达该蛋白的质粒以及(TREpal) 2-tk-CAT质粒和卩-gal质 粒按ZhangXK等提供的方法(ZhangXK， Wa/.， Nature, 355:441-446， 1992)构建获得。在本专利技术的下述实施例中，P-Gal的检测方法如下每孔加入lOul细胞裂解液(购自 Promega)， 40ul双蒸水，50ul 2*p-Gal Assay Buffer,置于37°C 15分钟到2小时，直到出 现明显可区分的黄色，加入150ul 1MNaC03终止反应，用酶标仪(购自Thermo)在405nm 波长检测吸光度。在本专利技术的下述实施例中，CAT的活性检测方法如下取20ul细胞裂解液(购自 Promega)，加入3.86ul 0.25M Tris (pH7.8)， 8.57ul 5mM氯霉素(溶于0.25M Tris， pH7.8)， 0.5ul 5mM Acetyl-CoA (溶于75uMHCl)， 0.5ul 3H-Acetyl-CoA (购自Amersham)， 6.6ul 75uMHCl。反应混合物在37'C孵育6小时，加入500ul 8M尿素终止反应。再加入3.5ml 闪烁液，放置至少l小时后用液烁仪(购自Thermo)测定cpm值，并将所得的cpm值除 以该孔相应的P-Gal值获得的结果作为标准化值。实施本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种白花蛇舌草提取物ＢＨＰ组分的应用，其特征在于，所述ＢＨＰ组分用于制备调控视黄醇Ｘ受体的活性与功能的药物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张晓坤，任春妍，曾锦章，
申请(专利权)人：中国科学院上海生命科学研究院，上海生茂投资有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]