本发明专利技术涉及双特异性抗体、其生产方法、含有所述抗体的药物组合物及其用途。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】双特异性抗体 本专利技术涉及双特异性抗体、其生产方法、含有所述抗体的药物组合物及其用途。
技术介绍
最近开发了多种多特异性重组抗体形式，例如，通过融合例如IgG抗体形式和单链结构域的四价双特异性抗体(参见例如Coloma, M. J.等人，Nature Biotech 15(1997) 159-163 ；W0 2001/077342 和 Morrison，S. L.，NatureBiotech. 25(2007) 1233-1234)。也开发了若干种其他新形式其中抗体核心结构(IgA、IgD、IgE、IgG或IgM)不再被保留，例如双抗体、三抗体或四抗体、微抗体(minibodies)、若干种单链形式(scFv、Bis-scFv),它们能结合两个或更多抗原(Hoi Iiger, P.等人，Nature Biotech23 (2005) 1126-1136 ；Fischer, N.，Leger 0.，Pathobiology 74(2007)3-14 ；Shen,J.等人，Journal of Immunological Methods 318 (2007) 65-74 ;Wu, C.等人，Nature·Biotech.25(2007)1290-1297)。全部此类形式都使用接头，或用于将抗体核心(IgA、IgD、IgE、IgG或IgM)融合至其他结合蛋白质(例如scFv),或融合例如两个Fab片段或scFv (Fischer N. , Leger 0.,Pathobiology 74(2007)3-14)。应当注意,可通过维持与天然存在的抗体的高度相似,来保留效应子功能，例如通过Fe受体结合介导的补体依赖性细胞毒性(CDC)或抗体依赖性细胞毒性(ADCC)。在WO 2007/024715中报道了作为改造的多价和多特异性结合蛋白质的双可变结构域免疫球蛋白。在US 6，897，044中报道了生物活性抗体二聚体的制备方法。在US7，129，330中报道了具有至少四个通过多肽接头彼此连接的可变结构域的多价Fv抗体构建体。在US 2005/0079170中报道了二聚或多聚抗原结合结构。在US 6，511，663中报道了包含三个或四个通过连接结构彼此共价结合的Fab片段的三价或四价单特异性抗原结合蛋白质，该蛋白质不是天然免疫球蛋白。在WO 2006/020258中报道了可在原核和真核细胞中有效率地表达，并且在治疗和诊断方法中有用的四价双特异性抗体。在US 2005/0163782中报道了从包含通过至少一个链间二硫键连接的二聚体和没有通过至少一个链间二硫键连接的二聚体的混合物中分离上述两种类型的多肽二聚体，或优选地合成通过至少一个链间二硫键连接的二聚体的方法。在US 5，959，083中报道了双特异性四价受体。在W02001/077342中报道了具有三个或更多功能性抗原结合位点的改造的抗体。在WO 1997/001580中报道了多特异性和多价的抗原结合多肽。W01992/004053报道了通常用结合相同的抗原决定簇的IgG类的单克隆抗体制备的同种缀合物(homoconjugate)是通过合成交联共价连接的。在WO 1991/06305中报道了对抗原具有高亲和性的寡聚单克隆抗体，其中分泌的寡聚体，通常属于IgG类的寡聚体，具有两个或更多缔合到一起形成四价或六价IgG分子的免疫球蛋白单体。在US 6，350，860中报道了源自羊的抗体和改造的抗体构建体，它们可用于治疗其中干扰素Y活性是病原的疾病。在US2005/0100543中报道了可靶向的构建体，它们是双特异性抗体的多价载体，即可靶向的构建体的每个分子可以作为两个或更多双特异性抗体的载体。在WO 1995/009917中报道了遗传改造的双特异性四价抗体。在W02007/109254中报道了由稳定化的scFv组成或包含稳定化的scFv的稳定化的结合分子。从 Lu, D.等人，Biochemical and Biophysical Research Communications318 (2004) 507-513 ；Lu,D.等人，J. Biol. Chem.，279 (2004) 2856-2865 和 Lu，D.等人，J. BiolChem. 280(2005) 19665-72中知晓了针对EGFR和IGF-1R的双特异性抗体。US 2007/0274985涉及包含单链Fab(SCFab)蛋白质的合成抗体分子，其也可与二聚体包括异数抗体缔合，其中至少两个单链抗体分子是缔合的。WO 2009/080253涉及双特异性二价抗体。然而，考虑到多特异性抗体的不同的问题和方面(例如药物动力学和生物学性质、稳定性、聚集、表达产量、副产品)，存在对更多备选的多特异性抗体形式的需求。·专利技术概述在一方面，本专利技术涉及双特异性抗体，包含a)特异性结合第一个抗原的第一个全长抗体的重链和轻链；b)特异性结合第二个抗原的第二个全长抗体的重链和轻链，其中重链的N端通过肽接头连接到轻链的C端。在本专利技术的另一方面，根据本专利技术的双特异性抗体还具有以下特征a)的全长抗体的重链的CH3结构域和b)的全长抗体的重链的CH3结构域各自在包含抗体CH3结构域之间的原界面中的改变的界面处交汇；其中，i)在一条重链的CH3结构域中用具有较大侧链体积的氨基酸残基取代氨基酸残基，从而在一条重链的CH3结构域的界面内生成凸起，该凸起可位于另一条重链的CH3域的界面内的腔内并且其中ii)在另一条重链的CH3结构域中用具有较小侧链体积的氨基酸残基取代氨基酸残基，从而在第二个CH3结构域的界面内生成腔，其中第一个CH3结构域的界面内的凸起可置于该腔内。在另一方面，根据本专利技术的双特异性抗体具有以下特征通过引入半胱氨酸(C)作为每个CH3结构域对应位置的氨基酸，两个CH3结构域都被进一步改变，如此使得两个CH3结构域之间能形成二硫桥。在本专利技术的另一方面，根据本专利技术的双特异性抗体具有以下特征b)所述的第二个全长抗体的重链和轻链的抗体重链可变结构域(VH)和抗体轻链可变结构域(VL)是通过在以下位点之间引入二硫键，通过二硫化物稳定的i)重链可变结构域第44位至轻链可变结构域第100位，ii)重链可变结构域第105位至轻链可变结构域第43位，或iii)重链可变结构域第101位至轻链可变结构域第100位。在本专利技术的另一方面，根据本专利技术的双特异性抗体具有以下特征a)第一个全长抗体特异性地结合IGF-IR并包含具有SEQ ID NO : I的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO 2的氨基酸序列的轻链，并且b)第二个全长抗体特异性地结合EGFR并包含通过肽接头与轻链连接的重链，其中所述肽连接的重链和轻链具有SEQ ID NO 3的氨基酸序列。在本专利技术的另一方面，根据本专利技术的双特异性抗体具有以下特征a)第一个全长抗体特异性地结合IGF-IR并包含具有SEQ ID NO : I的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO 2的氨基酸序列的轻链，并且b)第二个全长抗体特异性地结合EGFR并包含通过肽接头与轻链连接的重链，其中所述肽连接的重链和轻链具有SEQ ID NO 4的氨基酸序列。在本专利技术的另一方面，根据本专利技术的双特异性抗体具有以下特征本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：U·布林克曼，R·克罗斯代尔，H·杜尔，C·克莱因，E·科佩茨基，W·劳，J·T·雷古拉，J·M·尚策，P·乌马纳，K·瓦萨，
申请(专利权)人：罗切格利卡特公司，
类型：
国别省市：
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