丝状真菌宿主菌株和DNA构建体以及它们的使用方法技术

本发明专利技术涉及丝状真菌宿主菌株和用于其产生和使用的重组DNA构建体。所述丝状真菌宿主菌株特别可用于实现重组酶和变体的可靠表达。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】丝状真菌宿主菌株和DNA构建体以及它们的使用方法相关专利申请的交叉引用本专利申请要求于2010年6月3日提交的美国临时申请61/351,286的优先权，所述美国临时申请的公开内容以引用方式并入本文。
本专利技术涉及丝状真菌宿主菌株和用于其产生和使用的重组DNA构建体。丝状真菌宿主菌株特别可用于以可靠或较不可变的方式表达目的蛋白质，且用于有效筛选编码重组蛋白的DNA文库。
技术介绍
丝状真菌宿主细胞菌株已被工程改造为表达各种蛋白质。随后，任选在纯化后，这些蛋白质可以用于各种工业、学术或其他应用中。表达过程通常会是无法预测的。仅极少数(如果有的话)所制备的转化体实际上产生目的酶，这并非罕见情况。异源基因(例如非天然基因，或以与天然形式不同的形式存在的天然基因)的表达的可变性可由于与其核酸和/或氨基酸序列无关的因素而出现。例如，非同源整合在丝状真菌中占优势。因此，表达载体随机整合到基因组内，可能导致对转化体间表达水平的位置效应。此外，可能生成不稳定转化体，使得有必要对转化体进行进一步筛选，以获得稳定转化体。可变性还可通过由于多核原生质体的转化所导致的异核体的生成而出现。因此，以减低的可变性本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.06.03 US 61/351,2861.一种丝状真菌宿主细胞表达系统，包含：a.真菌宿主细胞，所述真菌宿主细胞在其染色体DNA中含有非同源重组(NHR)途径的一个或多个组分中的破坏、缺乏第一可选择功能的第一可选择标记、和可有效赋予第二可选择功能的第二可选择标记；和b.核酸分子，所述核酸分子含有(1)当引入所述真菌宿主细胞中时给所述在宿主细胞染色体上的第一可选择标记赋予所述第一可选择功能的序列；(2)可有效表达一种或多种目的基因的序列；(3)和与侧接所述可选择标记的序列具有实质同源性的序列；其中所述同源序列引起同源重组事件，所述同源重组事件导致有功能的第一可选择标记、导致所述第二可选择标记的去除和导致所述目的基因的表达。2.根据权利要求1所述的丝状真菌宿主细胞表达系统，其中所述NHR途径的一个或多个组分选自ku80、ku70、rad50、mre11、xrs2、lig4和xrs。3.根据权利要求1所述的丝状真菌宿主细胞表达系统，其中所述第一可选择标记和所述第二可选择标记是选自alsR、amdS、hygR、pyr2、pyr4、pyrG、sucA、博来霉素抗性标记、杀稻瘟素抗性标记、吡啶硫胺素抗性标记、氯嘧磺隆抗性标记、新霉素抗性标记、腺嘌呤途径基因、色氨酸途径基因和胸苷激酶的不同标记。4.根据权利要求1所述的丝状真菌宿主细胞表达系统，其中所述真菌宿主细胞来自选自木霉属(Trichoderma)、青霉属(Penicillium)、曲霉属(Aspergillus)、腐质霉属(Humicola)、金孢子菌属(Chrysosporium)、镰刀菌属(Fusarium)、链孢霉属(Neu...

【专利技术属性】
技术研发人员：B·S·鲍尔，T·卡佩尔，B·R·凯莱门，
申请(专利权)人：丹尼斯科美国公司，
类型：
国别省市：