本发明专利技术涉及一种依替巴肽的液相合成方法，包括合成三肽，合成四肽，合成七肽，环化，脱除保护基和胍基化六个阶段。本发明专利技术液相合成依替巴肽的方法，解决了形成分子内二硫键合成环肽过程中导致副产物生成的问题，确立了脱除环肽侧链保护基的相关条件，建立了将环肽氨基转化为胍基的条件及方法，提高了收率；该方法的原料试剂均价廉易得，能有效降低产品成本，显著提高生产效益。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及，属于生物化学领域。
技术介绍
依替巴肽(Eptifibatide)由美国COR Therapeutic公司研发，1998年在美国上市，用于急性冠脉综合症(Acute Coronary Syndrome, ACS)的治疗。通过抑制凝血因子I (Fibrinogen),与血小板糖蛋白II b / III a受体结合,从而抑制血小板聚集。在临床应用中，对不稳定型心绞痛、急性心肌梗死、冠状动脉介入等心血管疾病的治疗均显示了良好疗效。目前，心血管疾病逐年增加已成为现代社会对人类健康威胁严重的常见病之一，作为具有药效高、毒副作用低、不会在体内蓄积中毒等优势的多肽药物，依替巴肽可有效减少心血管事件的发生率，降低死亡率，其临床应用将会越来越广。目前已知的依替巴肽化学合成方法中，固相合成作为实验室研究是一个较好的方法，此方法高效、迅速，但固相合成原料利用率低，使用的试剂及溶剂昂贵、不易处理，用到的乙二硫醇、DMF等毒性较大不适合产业化生产。其中，采用Fmoc-Har-OH这一特殊氨基酸衍生物为起始原料，不但价格相当昂贵，而且由于侧链基团未保护，在有机溶剂中溶解性差，导致副产物增加，合成效率降低。此外，规模较小，仅局限在IL左右的反应体系。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种能大规模制备依替巴肽的液相合成方法。本专利技术解决上述技术问题的技术方案如下，包括合成三肽，合成四肽，合成七肽，环化，脱除保护基和胍基化六个阶段。具体步骤如下I)合成三肽将H-Cys (Trt) -NH2与Fmoc-Pro-OH进行偶合反应，然后再依次进行洗涤、干燥、减压蒸馏、加乙醚重结晶后得到二肽Fmoc-PiO-Cys (Trt) -NH2 ;然后脱除所述Fmoc-Pro-Cys (Trt) -NH2 中的 Fmoc 保护基，得到 H-Pro-Cys (Trt) -NH2 ;再将得到的所述H-Pro-Cys (Trt)-NH2与Fmoc-Trp-OH进行偶合反应,然后再依次进行洗漆、干燥、减压蒸懼、加乙醚重结晶后得到三肽Fmoc-Trp-Pro-Cys (Trt) -NH2 ；2)合成四肽将Fmoc-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2 中的 Fmoc 保护基脱除，得到H-Trp-Pro-Cys (Trt) -NH2 ;然后将所述 H-Trp-Pro-Cys (Trt) -NH2 与 Fmoc-Asp (OtBu) -OH 进行偶合反应，然后再依次进行洗涤、干燥、减压蒸馏、加乙醚重结晶后得到四肽FmOC-Asp(0tBu) -Trp-Pro-Cys (Trt) -NH2 ;再将所述 Fmoc-Asp (OtBu) -Trp-Pro-Cys (Trt) -NH2 中的 Fmoc保护基脱除，得到四肽 H-Asp (OtBu) -Trp-Pro-Cys (Trt) -NH2 ；3)合成七肽首先制备三肽Mpa (Trt)-Lys (Boc)-Gly-OH 将H-Gly-OMe与Cbz-Lys (Boc) -OH进行偶合反应，然后再依次进行洗涤、干燥、减压蒸馏、加乙醚重结晶后得到二肽Cbz-Lys (Boc) -Gly-OMe ;然后将所述Cbz-Lys (Boc) -Gly-OMe 中的 Cbz 保护基脱除，得到 H-Lys(Boc)-Gly-OMe ;再将所述H-Lys (Boc) -Gly-OMe与Mpa (Trt) -OH进行偶合反应，然后再依次进行洗涤、干燥、减压蒸懼、加乙醚重结晶后得到三肽Mpa (Trt) -Lys (Boc) -Gly-OMe ;再将所述三肽Mpa(Trt)-Lys(Boc)-Gly-OMe用NaOH溶液水解，然后再依次用水和乙醚浸洗，得到三肽Mpa(Trt)-Lys(Boc)-Gly-OH,其中所述水和乙醚质量比为3:1 ；其次将四肽H-Asp (OtBu)-Trp-Pro-Cys (Trt)-NH2 与三肽Mpa (Trt) -Lys (Boc) -Gly-OH进行偶合反应,然后再依次进行洗漆、干燥、减压蒸懼、加乙醚重结晶后得到线性七肽 Mpa (Trt) -Lys (Boc) -Gly-Asp (OtBu) -Trp-Pro-Cys (Trt) -NH2 ；4)环化Mpa-Lys(Boc)-Gly-Asp(OtBu)-Trp-Pro-Cys-NH2将线性七肽环化得到环肽丨^I权利要求1.，其特征在于，包括以下步骤 1)将H-Cys(Trt) -NH2与Fmoc-Pro-OH进行偶合反应，然后再依次进行洗涤、干燥、减压蒸馏、加乙醚重结晶后得到二肽Fmoc-PiO-Cys (Trt) -NH2 ;然后脱除所述Fmoc-Pro-Cys (Trt) -NH2 中的 Fmoc 保护基，得到 H-Pro-Cys (Trt) -NH2 ;再将得到的所述H-Pro-Cys (Trt)-NH2与Fmoc-Trp-OH进行偶合反应,然后再依次进行洗漆、干燥、减压蒸懼、加乙醚重结晶后得到三肽Fmoc-Trp-Pro-Cys (Trt) -NH2 ； 2)将步骤I)中得到的Fmoc-Trp-Pro-Cys(Trt) -NH2中的Fmoc保护基脱除，得到H-Trp-Pro-Cys (Trt) -NH2 ;然后将所述 H-Trp-Pro-Cys (Trt) -NH2 与 Fmoc-Asp (OtBu) -OH 进行偶合反应，然后再依次进行洗涤、干燥、减压蒸馏、加乙醚重结晶后得到四肽FmOC-Asp(0tBu) -Trp-Pro-Cys (Trt) -NH2 ;再将所述 Fmoc-Asp (OtBu) -Trp-Pro-Cys (Trt) -NH2 中的 Fmoc保护基脱除，得到四肽 H-Asp (OtBu) -Trp-Pro-Cys (Trt) -NH2,备用； 3)将H-Gly-OMe与Cbz-Lys(Boc) -OH进行偶合反应，然后再依次进行洗涤、干燥、减压蒸馏、加乙醚重结晶后得到二肽Cbz-Lys (Boc) -Gly-OMe ;然后将所述Cbz-Lys (Boc) -Gly-OMe 中的 Cbz 保护基脱除，得到 H-Lys(Boc)-Gly-OMe ;再将所述H-Lys (Boc) -Gly-OMe与Mpa (Trt) -OH进行偶合反应，然后再依次进行洗涤、干燥、减压蒸懼、加乙醚重结晶后得到三肽Mpa (Trt) -Lys (Boc) -Gly-OMe ;再将所述三肽Mpa (Trt) -Lys (Boc) -Gly-OMe用NaOH溶液水解，然后再依次用水和乙醚浸洗，得到三肽Mpa(Trt)-Lys(Boc)-Gly-OH,其中所述水和乙醚质量比为3:1 ； 4)将步骤2)中得到的四肽H-Asp(OtBu)-Trp-Pro-Cys (Trt)-NH2与步骤3)中得到的三肽Mpa (Trt) -Lys (Boc) -Gly-OH进行偶合反应，然后再依次进行洗漆、干燥、减压蒸懼、加乙醚重结晶后得到线性七肽 Mpa (Trt) -Lys (Boc) -Gly-Asp (OtBu) -Trp-Pro-Cys (Trt) -NH2;5)将步骤4)得到的线性七肽 Mpa(Trt) -Lys (B本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种依替巴肽的液相合成方法，其特征在于，包括以下步骤：1）将H？Cys(Trt)？NH2与Fmoc？Pro？OH进行偶合反应，然后再依次进行洗涤、干燥、减压蒸馏、加乙醚重结晶后得到二肽Fmoc？Pro？Cys(Trt)？NH2；然后脱除所述Fmoc？Pro？Cys(Trt)？NH2中的Fmoc保护基，得到H？Pro？Cys(Trt)？NH2；再将得到的所述H？Pro？Cys(Trt)？NH2与Fmoc？Trp？OH进行偶合反应，然后再依次进行洗涤、干燥、减压蒸馏、加乙醚重结晶后得到三肽Fmoc？Trp？Pro？Cys(Trt)？NH2；2）将步骤1）中得到的Fmoc？Trp？Pro？Cys(Trt)？NH2中的Fmoc保护基脱除，得到H？Trp？Pro？Cys(Trt)？NH2；然后将所述H？Trp？Pro？Cys(Trt)？NH2与Fmoc？Asp(OtBu)？OH进行偶合反应，然后再依次进行洗涤、干燥、减压蒸馏、加乙醚重结晶后得到四肽Fmoc？Asp(OtBu)？Trp？Pro？Cys(Trt)？NH2；再将所述Fmoc？Asp(OtBu)？Trp？Pro？Cys(Trt)？NH2中的Fmoc保护基脱除，得到四肽H？Asp(OtBu)？Trp？Pro？Cys(Trt)？NH2，备用；3）将H？Gly？OMe与Cbz？Lys(Boc)？OH进行偶合反应，然后再依次进行洗涤、干燥、减压蒸馏、加乙醚重结晶后得到二肽Cbz？Lys(Boc)？Gly？OMe；然后将所述Cbz？Lys(Boc)？Gly？OMe中的Cbz保护基脱除，得到H？Lys(Boc)？Gly？OMe；再将所述H？Lys(Boc)？Gly？OMe与Mpa(Trt)？OH进行偶合反应，然后再依次进行洗涤、干燥、减压蒸馏、加乙醚重结晶后得到三肽Mpa(Trt)？Lys(Boc)？Gly？OMe；再将所述三肽Mpa(Trt)？Lys(Boc)？Gly？OMe用NaOH溶液水解，然后再依次用水和乙醚浸洗，得到三肽Mpa(Trt)？Lys(Boc)？Gly？OH，其中所述水和乙醚质量比为3:1；4）将步骤2）中得到的四肽H？Asp(OtBu)？Trp？Pro？Cys(Trt)？NH2与步骤3）中得到的三肽Mpa(Trt)？Lys(Boc)？Gly？OH进行偶合反应，然后再依次？进行洗涤、干燥、减压蒸馏、加乙醚重结晶后得到线性七肽Mpa(Trt)？Lys(Boc)？Gly？Asp(OtBu)？Trp？Pro？Cys(Trt)？NH2；5）将步骤4）得到的线性七肽Mpa(Trt)？Lys(Boc)？Gly？Asp(OtBu)？Trp？Pro？Cys(Trt)？NH2环化得到环肽6）将步骤5）得到的？溶于饱和的HCl和AcOEt溶液，脱除所述？侧链β？羧基上的？OtBu和ε？氨基上的？Boc的保护基，得到环七肽盐酸盐7）将环七肽盐酸盐？中Lys的侧链氨基在三氧化硫脲作用下转化为胍基，得到所述依替巴肽。FDA00002138853500021.jpg,FDA00002138853500022.jpg,FDA00002138853500023.jpg,FDA00002138853500024.jpg,FDA00002138853500025.jpg...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：高秀伟，高秀岩，任孝敏，王朴，
申请(专利权)人：烟台海安多肽药物研发技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。