一种创制结缕草高频再生系的方法技术

本发明专利技术公开了一种创制结缕草高频再生系的方法。本发明专利技术提供一种创制结缕草高频再生系的方法，包括如下步骤：将单粒结缕草种子依次经诱导培养、第一次继代培养、第二次继代培养、第三次继代培养，得到结缕草高频再生系。本发明专利技术的实验证明，本发明专利技术提供了一种创制结缕草高频再生愈伤组织系或再生植株及专用培养基，本发明专利技术通过筛选日本结缕草品种，以单粒种子为外植体，分别诱导出不同的愈伤系，经培养基配比组合和多次干化继代培养，筛选出分化能力强的愈伤系，每一系增殖的大量高频再生愈伤组织均为同质。最终，建立一种创制结缕草高频再生系的方法，为提高结缕草组织培养再生率和遗传转化效率提供实用方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及植物组织培养领域，尤其涉及。
技术介绍
草坪草具有景观功能、生态功能和运动功能。随着经济的快速发展和人民生活水平的不断提高，草坪对于城市的绿化和环境改善起着越来越重要的作用。人们利用有性杂交、轮回选育等常规育种手段培育出一些草坪草新品种。转基因技术具有可以定向改良、打破生殖隔离等优点，是草坪草遗传改良的一种非常有前途的手段。草坪草与其他植物一样，组织培养是遗传转化操作的前提。目前，尽管有不少报道已建立了各草种的再生体系，但由于大多数草坪草属异花授粉植物，遗传背景复杂，组织培养比其他植物更具有难度。 力和抗逆性，尤其以超群的耐践踏、耐瘠薄和抗病能力而著称。结缕草被誉为“最有前途”的草种，其形成的草坪弹力是早熟禾的30-40倍，耗水量比草地早熟禾少30-40%，建植和管理费用比早熟禾低80%左右(胡叔良，1997，发展草坪绿地关键问题的探讨，中国草地，5 (2)67-70)。正是由于结缕草所具有的这些独特的优良性状，使它们成为运动场、开放绿地、边坡绿化以及水土保持的重要草种，也是适合我国水资源贫乏国情的草坪草种。同时，结缕草也是我国唯一具有出口创汇能力的草种。因此，建立稳本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种创制结缕草再生愈伤组织系的方法，包括如下步骤：将单粒结缕草种子依次经诱导培养、第一次继代培养、第二次继代培养、第三次继代培养，得到结缕草再生愈伤组织系。

【技术特征摘要】
1.一种创制结缕草再生愈伤组织系的方法，包括如下步骤将单粒结缕草种子依次经诱导培养、第一次继代培养、第二次继代培养、第三次继代培养，得到结缕草再生愈伤组织系O2.根据权利要求I所述的方法，其特征在于 所述诱导培养、所述第一次继代培养、所述第二次继代培养和所述第三次继代培养采用的培养材料均源自同一个种子； 所述诱导培养为将所述结缕草种子在诱导培养基中诱导培养，得到诱导愈伤组织； 所述第一次继代培养为将所述诱导愈伤组织在第一代继代培养基中第一代继代培养，得到第一次愈伤组织； 所述第二次继代培养为将所述第一次愈伤组织在第二代继代培养基中第二代继代培养，得到第二次愈伤组织； 所述第三次继代培养为将所述第三次愈伤组织在第三代继代培养基中第三代继代培养，得到再生愈伤组织系； 所述诱导培养基为在液体MS培养基中添加具有如下终浓度的各组分终浓度2mg/L的2，4-D、终浓度的O. 15mg/L 6-BA、终浓度30g · Γ1的蔗糖、终浓度7. Og · Γ1的琼脂、终浓度O.5g · Γ1的水解酪蛋白、终浓度Img · Γ1的VB1、终浓度Img · Γ1的VB2，用水补足体积；所述第一代继代培养基为在液体MS培养基中添加具有如下终浓度的各组分终浓度为lmg/L的2，4-D、终浓度为O. 2mg/L的6-BA、终浓度为O. 2mg/L的ΑΒΑ、终浓度为40g -Γ1的蔗糖、终浓度为9. Og · Γ1的琼脂、终浓度为O. 5g · Γ1的水解酪蛋白、终浓度为Img · Γ1的VB1和终浓度为Img · L—1的VB2，用水补足体积； 所述第二代继代培养基为将所述第一次继代培养基中的蔗糖终浓度调整为35g · L—1、琼脂终浓度调整为8. Og · L—1，其他成分和浓度不变，用水补足体积； 所述第三代继代培养基为将所述第二次继代培养基中的蔗糖终浓度调整为30g · L'琼脂终浓度调整为7. Og · L—1，其他成分和浓度不变，用水补足体积。3.根据权利要求I或2所述的方法，其特征在于 所述诱导培养的条件为温度24-26°C、光照强度1000-3000Umol JiT2iT1下暗培养I个月； 所述第一次、第二次、第三次继代培养条件均为温度24-26°C、黑暗培养20天。4.根据权利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于 在所述第一次继代培养后和所述第二次继代培养前还包括如下步骤选取第一次继代愈伤组织中的胚性愈伤组织。5.根据权利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于所述结缕草种子为去颖后的结缕草种子。6.一种制备结缕草再生植株的方法，包括如下步骤在权利要求1-5任一项中的方法中的第三次继代培养后，将所述结缕草再生愈伤组织系依次经分化培养和生根培养，得到结缕草再生植株； 所述分化培养为将所述结缕草再生愈伤组织系在分化培养基中进行分化培养，得到生芽愈伤组织； 所述分化培养基为在液体MS培养基中添加具有如下终浓度的各组分终浓度为l.Omg/L 6-BA、终浓度为0. 2mg/L KT、终浓度为0. 5mg/L ZT、终浓度为30g · L—1蔗糖、终浓度为7. Og · Γ1琼脂、终浓度为O. 5g · Γ1水解酪蛋白，终浓度为Img · L4VB1、终浓度为Img · L4VB2,用...

【专利技术属性】
技术研发人员：李瑞芬，张杰伟，魏建华，王宏芝，孙振元，
申请(专利权)人：北京农业生物技术研究中心，
类型：发明
国别省市：