HCV感染患者中的冷球蛋白血症性血管炎和B细胞恶性肿瘤的预测标志物制造技术

本发提供了通过采用检测一种特异抗体上的交叉独特型表位(cross-idiotypic?epitope)来检测在产生疾病的临床症状之前产生该抗体的细胞的用于与一种特异性抗体相关的疾病的早期诊断和治疗的方法和组合物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】HCV感染患者中的冷球蛋白血症性血管炎和B细胞恶性肿瘤的预测标志物相关申请本申请要求于2010年3月1日提交的美国临时申请号61/309,161的优先权的权益，通过引用以其全部内容结合在此。
本专利技术总体上涉及用于与丙型肝炎病毒感染相关的疾病的早期诊断和治疗的方法。
技术介绍
丙型肝炎病毒(HCV)感染的一种不常见的表现是与II型冷球蛋白血症(冷球蛋白血症性血管炎)有关的系统性血管炎，一种增殖性B细胞紊乱，其中5％-10％的患者转化为B细胞恶性肿瘤。产生冷球蛋白血症性血管炎所需要的HCV感染的持续时间尚不明确，但似乎为10年或更长的时间。由于大多数感染者在冷球蛋白血症性血管炎症状发作之前的这段延长的时间期间不表现出任何症状，很少做出冷球蛋白血症性血管炎或相关的B细胞恶性肿瘤的早期诊断。由于丙型肝炎患者在其有症状前不太可能进行治疗，本领域中对于发现有助于HCV感染患者中的冷球蛋白血症性血管炎和相关的B细胞恶性肿瘤的早期诊断的预后标志物存在着需要。
技术实现思路
本专利技术包括通过采用检测一种特异抗体上的交叉独特型表位(cross-idiotypicepitope)来检测在产生疾病的临床症状之前产生该抗体的细胞的用于与一种特异性抗体相关的疾病的早期诊断和治疗的方法。具体而言，本专利技术提供了一种在这样的患者产生该感染的这些并发症之前利用丙型肝炎病毒(HCV)感染患者的B细胞克隆扩增(BCE)分析的用于与II型冷球蛋白血症相关的冷球蛋白血症性血管炎或B细胞恶性肿瘤的早期诊断的方法。在此还描述的是采用针对检测到的交叉独特型抗原的抗体进行治疗的方法。本专利技术是基于以下令人惊奇的发现：即，在无症状HCV感染患者中检测到的WAB细胞是产生冷球蛋白血症性血管炎和相关的B细胞恶性肿瘤的一个标志物。在此描述的是用于鉴定具有产生与HCV相关的冷球蛋白血症性血管炎和B细胞恶性肿瘤的风险的受试者的方法。首先，提供了一种来自感染有HCV的受试者的样品。适合的样品是一种包括全血的生物流体。如果在样品中检测到WA交叉独特型阳性(Xid+)B细胞，则该受试者被鉴定为具有产生与HCV相关的冷球蛋白血症性血管炎和B细胞恶性肿瘤的风险的人。一方面，该受试者是被早期鉴定的。优选地，该早期鉴定的受试者是在初次HCV感染之后、但在表现与冷球蛋白血症性血管炎或B细胞恶性肿瘤相关的症状之前被鉴定的。一方面，这些WAXid+B细胞是通过鉴定来自一个克隆扩增的B细胞群的一种免疫球蛋白核酸序列而检测的，其中该免疫球蛋白核酸序列与WAXid相关。该与WAXid相关的免疫球蛋白核酸序列包含IgHV1-69、或IgHVV3-7或相关的种系基因、VK325或VK328、JH4或JH3、Jk1、以及一个D区共有序列，D区共有序列包括SEQIDNO：1(共有序列1)或SEQIDNO：2(共有序列2)。可替代地，这些WAXid+B细胞是用一种分离的抗WAXid的抗体检测的。任选地，该分离的抗WAXid的抗体附着到一种标记上。一方面，该标记是一种异硫氰酸荧光素(FITC)标记或一种藻红蛋白(PE)标记。这些WAXid+B细胞是通过免疫染色或流式细胞分析进行检测的。一方面，该方法进一步包括用一种抗CD11c抗体来检测该样品中的CD11C+的细胞。还提供了用于鉴定具有产生与HCV感染相关的冷球蛋白血症性血管炎或B细胞恶性肿瘤的风险的受试者的方法。首先，提供了来自一位HCV感染患者的克隆扩增的B细胞的一种核酸样品来检测与WAXid相关的免疫球蛋白核酸序列，其中所述免疫球蛋白核酸序列包括IgHV1-69或IgHV3-7或有关的种系基因、VK325或VK328、JH4或JH3、以及Jk1。随后，检测该样品中的包含SEQIDNO：1或SEQIDNO：2的一个序列。如果SEQIDNO：1或SEQIDNO：2存在于含有与WAXid相关的IgH和VK序列的源于HCV感染患者的核酸中，则预测HCV感染相关性冷球蛋白血症性血管炎或B细胞恶性肿瘤的产生。一方面，该患者缺乏冷球蛋白血症性血管炎或B细胞恶性肿瘤的临床症状。本专利技术还提供了早期治疗在受试者中的与HCV相关的冷球蛋白血症性血管炎和B细胞恶性肿瘤的方法。首先，获得一种来自感染有HCV的受试者的样品。适合的样品是一种包括全血的生物流体。如果该样品含有WAXid+B细胞，则将一种抗WA的抗体给予该受试者，从而治疗受试者中的与HCV相关的冷球蛋白血症性血管炎和B细胞恶性肿瘤。优选地，该早期治疗是在初次HCV感染之后、但在表现出与冷球蛋白血症性血管炎或B细胞恶性肿瘤相关的症状之前进行的。本专利技术还提供了一种用于早期检测和治疗具有产生B细胞恶性肿瘤(由WAB细胞引起的那些除外)风险的一位受试者的方法。首先，提供了一种来自感染有HCV的受试者的样品。任选地，该特异性非WAXid+B细胞是用一种分离的抗非WAXid抗体检测的。一方面，该受试者是早期被鉴定的。优选地，该早期被鉴定的受试者是在初次HCV感染之后、但在表现出与冷球蛋白血症性血管炎或B细胞恶性肿瘤相关的症状之前被鉴定的。本专利技术还提供了一种试剂盒，该试剂盒包含一套第一引物和第二引物，以及用于基于与WAXid相关的免疫球蛋白核酸序列的检测来预测与HCV感染相关的冷球蛋白血症血管炎和B细胞恶性肿瘤的说明书，这些免疫球蛋白核酸序列包括IgHV1-69或VIgHV3-7或相关的种系基因、VK325或VK328、JH4或JH3、Jk1、以及SEQIDNO：1或SEQIDNO：2。该套第一和第二引物包括位于互补决定区3(CDR3)序列的两侧的一种第一引物和一种第二引物、位于VH-D-JH序列的两侧的一种第一引物和一种第二引物、以及位于Ig编码转录本中的VK-JK序列的两侧的一种第一引物和一种第二引物。根据本专利技术的以下优选实施方案的描述并且根据权利要求书，本专利技术的其他特征和优点将是明显的。除非另有规定，在此使用的所有科技术语具有与本专利技术所属领域的普通技术人员通常所理解的相同的含义。虽然与在此描述的那些相似或等同的方法和材料可以被用于本专利技术的实践或试验中，以下描述了适合的方法和材料。将所有出版物、专利申请、专利、Genbank/NCBI登录号、以及其他在此提及的参考文献以其全部内容通过引用进行结合。在发生冲突的情况下，将以本说明书(包括定义)为准。另外，材料、方法和实例仅仅是说明性的而不旨在进行限制。根据以下详细描述和权利要求书，本专利技术的其他特征和优点将是明显的。附图说明图1是一个B细胞克隆扩增分析凝胶的化学发光图(chemilumigraph)。患者的核糖核酸(RNA)被扩增。患者27、45、71、72、80、84和88被考虑为阳性(白色箭头表示BCE)并且患者17、50、83、85、86和87被考虑为阴性。通过凝胶图像的光密度扫描证实了这些分类。图2显示了患者127的另外研究结果。图2A是外周血瑞氏染色的显微照片，显示了绒毛淋巴细胞。图2B是一个流式细胞术直方图，显示了一个CD11c+、WA+B细胞群。图2C和2D是描绘了用异硫氰酸荧光素(FITC)标记的抗WAXid(C)和藻红蛋白(PE)标记的抗CD11c(D)的CD11C分离的细胞的双重染色的显微照片。具体实施方式在美国，感染有丙型肝炎病毒(本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.03.01 US 61/309,1611.一种用于检测WAXid+B细胞的试剂在制造诊断试剂中的应用，所述诊断试剂用在鉴定具有产生与丙型肝炎病毒相关的冷球蛋白血症性血管炎或B细胞恶性肿瘤的风险的受试者的方法中，该方法包括：提供一种来自感染有丙型肝炎病毒的受试者的样品；使用所述诊断试剂检测在所述样品中的WAXid+B细胞；从而鉴定具有产生与丙型肝炎病毒相关的冷球蛋白血症性血管炎或B细胞恶性肿瘤的风险的受试者。2.如权利要求1所述的应用，其中所述WAXid+B细胞是通过鉴定来自一个克隆扩增的B细胞群的一种免疫球蛋白核酸序列而检测的，其中该免疫球蛋白核酸序列与WAXid相关。3.如权利要求1所述的应用，其中所述WAXid+B细胞是用一种分离的抗WAXid抗体检测的。4.如权利要求1所述的应用，其中所述受试者缺乏冷球蛋白血症性血管炎或B细胞恶性肿瘤的临床症状。5.如权利要求4所述的应用，其中所述受试者是在初次丙型肝炎病毒感染之后、但在表现出与冷球蛋白血症性血管炎或B细胞淋巴瘤相关的症状之前被鉴定的。6.如权利要求1所述的应用，其中所述样品是一种包括全血的生物流体。7.如权利要求2所述的应用，其中与WAXid相关的所述免疫球蛋白核酸序列包含：IgHV1-69或IgHV3-7；VK325或VK328；JH4或JH3；Jk1；以及编码D区共有序列的核酸序列。8.如权利要求3所述的应用，其中所述分离的抗WAXid抗体附着到一种标记上，该标记选自下组，该组由异硫氰酸荧光素标记和藻红蛋白标记组成。9.如权利要求1所述的应用，其中所述WAXid+B细胞是通过流式细胞分析进行检测的。10.如权利要求1所述的应用，其中所述方法进一步包括用一种抗CD11c抗体来检测在所述样品中的一种CD11C+细胞。11.一种用于检测预测标志物的试剂在制造诊断试剂中的应用，所述诊断试剂用在鉴定具有产生与丙型肝炎病毒感染相关的冷球蛋白血症性血管炎或B细胞恶性肿瘤的风险的受试者的方法中，该方法包括...

【专利技术属性】
技术研发人员：文森特·阿格内洛，
申请(专利权)人：文森特·阿格内洛，
类型：
国别省市：