1型糖尿病自身抗体谱检测试纸制造技术

本实用新型专利技术公开了一种1型糖尿病自身抗体谱检测试纸，包括基板，沿基板纵向依次排列粘贴有缓冲液加入垫，胶体金标记物垫、样品垫、层析膜、吸收垫，吸收垫上沿基板横向排列设置有与五种抗原检测线相对应的标识区，所述层析膜上设置有质控线和五种抗原检测线，五种抗原检测线呈线段沿基板横向排列成直线，各种抗原检测线之间不相连，所述质控线位于抗原检测线与标识区之间。该检测试纸联合1型糖尿病五种自身抗体在同样条件下一次同时完成检测，能够减少分次检测的差异，使多种自身抗体不同的诊断效能互补提升；能够排除样品血清中非特异性IgG的干扰；能够克服因检测线重叠排列引起的随反应进程致灵敏度逐渐下降的缺陷。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本技术属于糖尿病血清学诊断领域，特别涉及一种I型糖尿病自身抗体谱检测试纸。
技术介绍
糖尿病(DM)是一组由于胰岛素分泌缺陷，或胰岛素作用缺陷，或二者兼之所引起的以高血糖为特征的代谢疾病，目前分为四型1 型糖尿病(T1DM)、2型糖尿病(T2DM)、特殊类型糖尿病和妊娠糖尿病。其中I型和2型糖尿病最常见，因两者的病因学和发病机理不同，其临床防治措施也有所不同，故目前国际和国内糖尿病防治指南仍规定需予区分。I型糖尿病(TlDM)主要由于胰岛β细胞自身免疫性破坏导致胰岛素绝对缺乏引起，其特征表现为外周血中出现针对胰岛β细胞相关分子的自身抗体。这些自身抗体作为免疫学监测指标，使血清学分型诊断成为可能。事实上目前已有4种自身抗体常规应用于临床TlDM的诊断一胰岛细胞抗体(ICA)、胰岛素自身抗体(ΙΑΑ)、谷氨酸脱羧酶抗体(GADA )、蛋白酪氨酸磷酸酶抗体(I A— 2Α )。ICA是应用最早的TlDM免疫学标志，在新发糖尿病中阳性率为70%_90%，但随病程延长而诊断价值下降较快是其致命的缺陷，病程2-5年患者阳性率仅20%。IAA在TlDM的儿童中出现早，随年龄增长阳性率下降，各类研究显示在成人中一般都低于40%，其检测还会受到因使用外源性胰岛素注射治疗而产生的胰岛素抗体的干扰。GADA在TlDM发病前期和发病时的阳性率较高为60%-80%，而在T2DM中仅为3. 2%。该抗体在体内存在时间较长，甚至在诊断10 20年仍可检出。ΙΑ-2Α存在于55%-75%的新发TlDM患者，在正常对照人群阳性率仅为1%，同时其阳性率随病程延长变化较小，抗体水平在初诊后的6年中下降轻微，具有较好的检测价值。但GADA和ΙΑ-2Α并非胰岛细胞高度特异，在其他自身免疫性疾病如甲状腺相关疾病、风湿类疾病中也可以检测到。近年来发现的一种定位于胰岛β细胞内胰岛素分泌颗粒膜上的锌转运体8(ZnTS)蛋白具有高度β细胞特异性，对胰岛素的合成、储存和分泌具有调控作用，其自身抗体已被认定为一个重要的独立的TlDM免疫标志物。ΖηΤ8Α最早可在处于糖尿病前期的2岁儿童中检出，其滴度随病程进展呈上升趋势，在晚青春期新发TlDM患者中达峰值。在长病程的成年患者中检出率优于GADA、ΙΑ-2Α。2007年Wenzlau等学者报道了利用放射免疫法对223例新发TlDM血清样本的检测结果，60% 80%的患者ΖηΤ8Α阳性，而在健康对照组中〈2%，在2型糖尿病组中〈3 %。更难得的是ΖηΤ8Α在上述其他自身抗体阴性的患者中仍有26%的检出率。由此可见单一自身抗体的检测价值十分有限。一个不争的事实是，联合检测多种抗体可提高敏感性、特异性和准确度。而自身抗体阳性的种类数对于预测发病较单一抗体的滴度更有意义。现有的组合检测IAA、GADA和ΙΑ-2Α可以使诊断率提高到94%，将ΖηΤ8Α加入到组合检测后可以使自身抗体阳性个体的数量增加到98%，同时使两种或多种自身抗体阳性个体的数量上升到82%。虽然组合检测能够提高检出率，但因检测技术的手段和方法不一样，或即使一样也存在孔间、板间或批间差异，无法同时同一批检测等不一致因素造成的误差增加而影响检测效能。现有血清学检测技术中，最常采用的是ELISA法、放射免疫法以及化学发光法。ELISA法常用于单一自身抗体的检测，而且操作过程复杂，单个指标检测需要4小时以上，结果判断利用酶促瀑布效应间接判断而正确性差，同时需要价格昂贵的酶标仪等实验室非通用设备。放射免疫法同样常用于单一自身抗体的检测，单个指标检测也需要2-4小时，还需要价格昂贵的R-计数器等专用设备，且存在放射性衰减和污染。前者导致需制备质控曲线而增加操作复杂性并影响检测准确，同时使试剂盒货架时间短。后者涉及人身安全和环境污染问题。化学发光法检测时间短且灵敏度高，但专用设备费用高昂，且与上述两种方法一样仍是标记方法的间接判读结果，未引入分子量等更为客观的结果判读体系，检测正确度不理想，对每种指标的检测需专供设计，如多种抗体的检测存在检测时间长、成本较高的问题，不利于基层临床开展。近年来出现的金标免疫层析法具有检测快速，操作简便，不需仪器设备等多方面 的优点，可用于同时一次检测样品中的多种抗体，为联合检测I型糖尿病自身抗体带来了机遇。常见的金标试纸的排列顺序依次为样品区、金标区、检测区、吸水区，检测区依次平行画有检测线，检测线的长度与试纸宽度一致，当采用间接法原理检测多种抗体时其缺点在于①滴加血清到样品区，层析至金标区使胶体金标记抗体复融，待测物与胶体金标记抗体结合后一起向检测区层析，但是由于血清中的非特异性IgG竞争结合胶体金标记抗体的干扰，造成胶体金标记抗体的非目的性消耗，导致灵敏度下降；②由于金标垫中的胶体金标记抗体含量一定，当其与第一条检测线形成复合物后，剩余的胶体金标记抗体再与下一条检测线反应时因浓度下降而造成灵敏度降低。尤其当前一条检测线呈强阳性反应时，因大量胶体金标记抗体的消耗导致位置靠前的检测线显色深，位置靠后的检测线显色浅或不显色，易导致假阴性的发生。
技术实现思路
本技术的目的是提供一种I型糖尿病自身抗体“谱”检测试纸，该检测试纸能够一次同时联合检测上述五种糖尿病自身抗体，克服了上述检测方法的缺陷，误差小而检测效能提高，无需专用仪器设备，操作简便，结果判读直观，费用低廉而便于推广。本技术的技术方案如下一种I型糖尿病自身抗体谱检测试纸，包括基板，沿基板纵向依次排列粘贴有缓冲液加入垫，胶体金标记物垫、样品垫、层析膜、吸收垫，吸收垫上沿基板横向排列设置有与五种抗原检测线相对应的标识区，所述层析膜上设置有质控线和与标识区对应的五种抗原检测线，五种抗原检测线呈线段沿基板横向排列成直线，各种抗原检测线之间不相连，所述质控线位于抗原检测线与标识区之间。所述五种抗原检测线分别包被有ICA对应抗原、GADA对应抗原、IAA对应抗原、ΙΑ—2A对应抗原、ZnT8A对应抗原。质控线上包被有胶体金标记抗体的抗抗体。上述技术方案与现有技术的区别在于I.由于样品垫位于层析膜之前，样品先与检测线反应，避免了样品先与胶体金标记物垫反应过程中非特异性IgG竞争结合胶体金标记抗体的干扰，减少了胶体金标记抗体的非目的性消耗，提高了检测灵敏度；2.五种抗原检测线呈线段沿基板横向排列成直线，各种抗原的检测线之间不相连，避免了因检测线依次重叠排列而导致的随反应进程的进行致灵敏度逐渐下降的不利因素，减少了假阴性的发生。3.层析膜上的抗原检测线包被的五种抗原为ICA对应抗原、GADA对应抗原、IAA对应抗原、ΙΑ—2A对应抗原、ZnT8A对应抗原，即为ICA检测线、GADA检测线、IAA检测线、ΙΑ—2Α检测线、ΖηΤ8Α检测线，可以在同样条件下一次同时联合检测五种糖尿病自身抗体。所述吸收垫上与检测线对应的标识区内标注有待测抗体的名称，便于结果读取。本技术所述试纸克服了
技术介绍
所述的因检测技术的手段和方法不一样，或即使一样也存在孔间、板间或批间差异，无法同时同一批检测等不一致因素造成的误差增加的缺陷。因此，本技术所述试纸检测效能提高。 采用本技术所述检测试纸开展检测，无需专用仪器设备，结果判读直观，费用低廉而便于推广。以下结合附图和具体实施方式对本本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种1型糖尿病自身抗体谱检测试纸，包括基板，沿基板纵向依次排列粘贴有缓冲液加入垫，胶体金标记物垫、样品垫、层析膜、吸收垫，其特征在于：吸收垫上沿基板横向排列设置有与五种抗原检测线相对应的标识区，所述层析膜上设置有质控线和与标识区对应的五种抗原检测线，五种抗原检测线呈线段沿基板横向排列成直线，各种抗原检测线之间不相连，所述质控线位于抗原检测线与标识区之间。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈兵，李涛，程立庆，徐静，张玲，
申请(专利权)人：中国人民解放军第三军医大学第一附属医院，
类型：实用新型
国别省市：