本发明专利技术涉及怀牛膝水提物在制备雌激素类药物中的应用，可有效解决由于体内雌性激素分泌异常而引起的疾病用药问题，其解决的技术方案是，将怀牛膝每次用其10倍重量的水煎煮2次，每次2h，合并2次水煎液，减压浓缩干燥得到怀牛膝浸膏状水提物，该怀牛膝水提物可有效用于制备和预防由于体内雌激素分泌异常引起的相关疾病的药物，实现怀牛膝水提物在制备治疗由于体内雌性激素分泌异常而引起的相关疾病药物中的应用，本发明专利技术水提物制备方法简单，稳定可靠，并经多次试验，均取得了相同或相近似的结果，方便，成本低，其水提物有效用于制备雌激素类药物，开辟了怀牛膝药用新用途，临床意义巨大。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医药新用途，特别是一种怀牛膝水提物在制备雌激素类药物中的应用。
技术介绍
怀牛膝为觅科植物牛膝Achyranthes bibentata BI.的干燥根。牛膝，在四州、湖北、陕西等省均有生产，但怀牛膝质量最佳，数量也居全国之首，怀牛膝因产于历史上的怀庆府而得名，位于今河南焦作一带。怀牛膝的特点是条子粗壮、明亮、色泽鲜艳、油性多。历代名家对其均有论述和研究，认为其性平，味苦、甘、酸。归肝、肾经，具有补肝肾，强筋骨，利尿通淋，引血下行的功能。用于经闭，痛经，腰膝酸痛，筋骨无力，淋证，水肿，头痛，眩晕，牙痛，口疮，吐血，衄血等症。现代药理及临床研究表明怀牛膝具有降压，改善肝功能，增强体液免疫，抗炎与镇痛，利尿，解痉，抗衰老等作用。妇女进入绝经期后，体内雌激素水平下 降，进而引起一系列症状，如骨质疏松症，老年痴呆症，心脑血管疾病等，其中骨质疏松症和心脑血管疾病导致的死亡率呈逐年上升趋势。怀牛膝的抗衰老作用，自《神农本草经》即有记载，诸多延年益寿方中应用比例极高。现代的研究报道亦较多，如怀牛膝对家蚕寿命及生长发育影响实验表明怀牛膝可延长家蚕龄期，减轻家蚕体重，并有减缓家蚕身长增长的作用；怀牛膝还可明显改善戊巴比妥钠所致小鼠记忆障碍，明显延长小鼠负荷游泳时间，从而增强记忆和提高耐力。以O. 4g/kg的怀牛膝粉拌食喂养Wistar雌性9月龄大鼠至19月龄，可明显提高大鼠全血SOD活性，降低LPO的形成。但关于怀牛膝具有雌激素样作用方面的研究尚未见报道。
技术实现思路
针对上述情况，本专利技术的目的就是提供一种怀牛膝水提物在制备雌激素类药物中的应用，可有效解决由于体内雌性激素分泌异常而引起的疾病(如妇女更年期综合症等)用药问题。本专利技术解决的技术方案是，将怀牛膝每次用其10倍重量的水煎煮2次，每次2h，合并2次水煎液，减压浓缩干燥得到怀牛膝浸膏状水提物，该怀牛膝水提物可有效用于制备和预防由于体内雌激素分泌异常引起的相关疾病的药物，实现怀牛膝水提物在制备治疗由于体内雌性激素分泌异常而引起的相关疾病(如妇女更年期综合症等)药物中的应用。本专利技术水提物制备方法简单，稳定可靠，并经多次试验，均取得了相同或相近似的结果，方便，成本低，其水提物有效用于制备雌激素类药物，开辟了怀牛膝药用新用途，临床意义巨大。附图说明图I为本专利技术的怀牛膝水提物对性未成熟雌性小鼠子宫系数的影响作用图。图2为本专利技术的怀牛膝水提物对MCF-7细胞增殖的影响作用图。图3为本专利技术的怀牛膝水提物对ERE调控的报告基因载体ERa瞬时表达的诱导作用图。图4为本专利技术的怀牛膝水提物对ERE调控的报告基因载体ERi3瞬时表达的诱导作用图。具体实施例方式以下结合实施例和有关试验资料对本专利技术的具体实施方式作详细说明。 实施例I本专利技术在具体实施中，所述的怀牛膝水提物是，将怀牛膝(Achyranthesbibentata BI.) IOOg用其10倍重量的水IOOOg (即IOOOmL)煎煮2次，每次2h，合并两次水煎液，减压浓缩干燥得到怀牛膝浸膏状水提物，连续反复三次，平均得率为68. 76%，该水提物可制备雌激素类药物，用于治疗由于体内雌性激素分泌异常而引起的相关疾病，如妇女更年期综合症等。实施例2本专利技术在具体实施中，所述的怀牛膝水提物是，将怀牛膝(Achyranthesbibentata BI.) 200g用其10倍重量的水2000g (即2000mL)煎煮2次，每次2h，合并两次水煎液，减压浓缩干燥得到怀牛膝浸膏状水提物，连续反复三次，平均得率为68. 58%，该水提物可制备雌激素类药物。实施例3本专利技术在具体实施中，所述的怀牛膝水提物是，将怀牛膝(Achyranthesbibentata BI.) 300g用其10倍重量的水3000g (即3000mL)煎煮2次，每次2h，合并两次水煎液，减压浓缩干燥得到怀牛膝浸膏状水提物，连续反复三次，平均得率为68. 29%，该水提物可制备雌激素类药物。根据上述方法按怀牛膝和水的比例可以通过工业化生产制得任意量的怀牛膝水提物，用于制备雌激素类药物，有效解决由于体内雌性激素分泌异常而引起的疾病(如妇女更年期综合症等)的用药治疗问题，并经试验得到了充分证明，有关试验资料如下首先，通过小鼠子宫增重实验，证明怀牛膝能够增加性未成熟雌性小鼠的子宫系数，说明其在体内具有雌激素样作用。其次，通过MCF-7细胞增殖实验(E-SCREEN)，发现怀牛膝能够促进MCF-7细胞增殖，说明其在体外具有雌激素样作用。最后，通过ERE调控的报告基因瞬时表达检测技术，进一步验证怀牛膝水提物是通过与雌激素受体ER β结合而发挥雌激素样作用。专利技术人已通过实验证明了本专利技术药物在制备雌激素类药物中的新用途。其主要实施方案如下一、实验材料与方法I.实验药物采用本专利技术怀牛膝水提物。2.实验动物与细胞株及质粒昆明种小鼠，雌性，出生21d (刚断乳)，体重9 12g，购于河南省实验动物中心。人乳腺癌细胞(MCF-7)由中国军事医学科学院生物工程研究所提供。HEK293细胞株购于中国典型培养物保藏中心。β-半乳糖苷酶(β-galactosidase, β-gal)对照质粒P β gal-Control、重组报告基因 pERE-TAL-luc、重组人 ER a (humanER α，hER α )表达载体pCXN2-hER α和重组人ER β (humanER β，hER β )表达载体pCXN2_hER β由军事医学科学院生物工程研究所叶棋浓博士惠赠。3.主要试剂RPMI1640 培养基、小牛血清(Newborn Calf Serum, NCS)和脂质体Lipofectamine 2000Reagent 购自 Gibco Invitrogen 公司；胎牛血清、无酌·红 RPMI1640 培养基、17 β -雌二醇(17 β -estrogen, E2)、氨节青霉素(Amp)、Tris 碱和活性炭(Charcoal)均购自Sigma公司；葡聚糖T-70 (Dextran-70)购自上海化学试剂公司；己烯雌酹片(合肥久联制药)；邻-硝基苯-β -D-半乳卩比喃糖苷(O-Nitrophenyl-β -D-galactopyranoside, 0NPG)、EDTA, MTT 及 DMSO 为 Amresco 公司产品；17-β 雌二醇(E2)为 Sigma公司产品；Steady-GloB稳定突光素酶检测系统试剂盒(Steady-Glo^ Luciferase Assay Systerm)、闪亮裂解缓冲液(Glo lysis Buffer)购自Promega公司；胰蛋白胨、酵母粉购自OXOID 公司；感受:态大肠杆菌 DH5 α (E. coli Competent Cells DH5 α )购自 Solarbio 公司；西班牙琼脂糖为Biowest生产；质粒提取试剂盒(Plasmid Mini Kit I )购自OMEGA公司；其余试剂均为国产分析纯。4.所用主要仪器普通手术器械；二氧化碳培养箱(REVCO);倒置显微镜(NIKON ECLIPSE TS100)；KDC-160HR高速低温冷冻离心机(科大创新股份有限公司)；酶标仪(BI0-RAD680);纯水仪(Sart本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种怀牛膝水提物在制备雌激素类药物中的应用，所述的怀牛膝水提物是，将怀牛膝每次用其10倍重量的水煎煮2次，每次2？h，合并2次水煎液，减压浓缩干燥得到怀牛膝浸膏状水提物。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：郑晓珂，冯卫生，蒋贇，刘朝妍，王小兰，
申请(专利权)人：河南中医学院，
类型：发明
国别省市：
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