一种利用SILAC整体标记果蝇蛋白质组的方法及专用培养基技术

本发明专利技术公开了一种利用SILAC标记果蝇蛋白质组的方法及专用培养基。本发明专利技术提供的SILAC标记果蝇专用培养基，按照如下方法制备：将SILAC标记的酵母菌体涂布在果蝇培养基上，得到SILAC标记果蝇专用培养基。本发明专利技术的实验证明，本发明专利技术开发的一种用于果蝇SILAC标记的培养基，可以专门用于SILAC标记果蝇蛋白质组，可以实现快速、高效地标记，为定量内标的制备和高精度地定量蛋白质组研究创造了条件。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种利用SILAC整体标记果蝇蛋白质组的方法及专用培养基。
技术介绍
果蚬(Drosophila melanogaster)是个体微小的昆虫。自从摩尔根开始利用它研究遗传学以来，果蝇逐渐成为遗传学、生理学、发育和进化生物学研究的模式生物。由于果蝇具有生长快、易饲养和繁殖、易维持大群体、价廉、表型丰富且绝大多数信号途径与高等生物一致等诸多优点，使得果蝇成为了现代生物学研究中的金虫。 蛋白质是生物功能的直接执行者。蛋白质组学是系统鉴定和定量细胞内蛋白质，并研究其生物学功能的新兴学科。随着果蝇基因组测序的完成和蛋白质组学研究技术的快速发展，科学家已经可以实现果蝇蛋白质组鉴定的目标。蛋白质组的定量比较是研究基因突变或生物学处理及其效应关系的有效手段，也是当前蛋白质组学研究的重点领域。至今已有果蝇定量蛋白质组学的报道。如Brunner等利用ICAT技术定量比较了果蝇的蛋白质组。Xun等定量比较了帕金森病的果蝇模型。Kri jgsveld等利用15N标记的酵母饲喂果蝇，得到了 15N标记的果蝇，开始了果蝇体内标记和定量蛋白质组学的研究。但由于15N标记的蛋白质组同位素分布宽，轻重标之间容易重叠导致定量精度低，且轻重标难于区分，易产生假阳性等技术难题，使得定量蛋白质组学逐渐转向基于细胞培养过程中的重稳定性同位素标记氨基酸的整体蛋白质组标记技术(stable isotope labeling by amino acid in cellculture, SILAC)这一定量蛋白质组学研究的金标准。Mann研究小组利用SILAC技术对果蝇的SL2细胞系进行了研究，鉴定和定量了6000多个蛋白质，并比较了 mRNA和蛋白质丰度的关联关系。尽管SILAC刚开始只是用于培养的细胞，如酵母、哺乳动物细胞等，最近SILAC标记整体小鼠的成功开创了整体动物重稳定性同位素标记的先河。Sury等利用SILAC技术标记了整体果蝇，但因技术限制，其标记效率只能达到96%左右，影响了定量的精度和检测的灵敏度。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供一种SILAC标记果蝇专用培养基。本专利技术提供SILAC标记果蝇专用培养基，按照如下方法制备将SILAC标记的酵母菌体涂布在果蝇培养基上，得到SILAC标记果蝇专用培养基。上述果蝇培养基由低熔点琼脂糖、葡萄糖、对羟基苯甲酸甲酯、乙酸乙酯和水组成；所述低熔点琼脂糖、所述葡萄糖、所述对羟基苯甲酸甲酯、所述乙酸乙酯的质量比为O. 8 10 :0· 002 :0· 8ο上述果蝇培养基组分具体浓度如下所述低熔点琼脂糖在所述果蝇培养基中的浓度为0. 8% (质量百分含量);所述葡萄糖在所述果蝇培养基中的浓度为10% (质量百分含量)；所述对羟基苯甲酸甲酯在所述果蝇培养基中的浓度为O. 002% (质量百分含量);所述乙酸乙酯所述琼脂在所述果蝇培养基中的浓度为O. 8% (质量百分含量)。其中果蝇培养基组分中对羟基苯甲酸甲酯以对羟基苯甲酸甲酯乙醇溶液的形式加入果蝇培养基中，对羟基苯甲酸甲酯乙醇溶液按照如下方法制备将对羟基苯甲酸甲酯溶于95%乙醇水溶液中得到的混合液，且对羟基苯甲酸甲酯在混合液中的浓度为10%(质量百分含量)。上述专用培养基中，所述SILAC标记的酵母菌体按照如下方法制备将赖氨酸营养缺陷型酵母菌株在含有重稳定性同位素标记赖氨酸的SILAC标记酵母专用培养基中培养，收集菌体，得到SILAC标记的酵母菌体。本专利技术的实施例中的赖氨酸营养缺陷型酵母菌株为敲除菌株BY4741 Δ YBRl 15C,购自 Saccharomyces Genome Deletion Project。上述含有重稳定性同位素标记赖氨酸的SILAC标记酵母专用培养基按照如下方法制备由酵母氮源基础、葡萄糖、重稳定性同位素标记的赖氨酸、腺苷、尿嘧啶、色氨酸、组氨酸、精氨酸、蛋氨酸、酪氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、缬氨酸、苏氨酸、丝氨酸和水组成；所述酵母氮源基础在所述SILAC标记酵母专用培养基中的浓度为7g/L ;所述葡萄糖在所述SILAC标记酵母专用培养基中的浓度为20g/L ;所述重稳定性同位素标记的赖氨酸L-Iysine-13C6在所述SILAC标记酵母专用培养基中的浓度为164. 3 μ M ;所述腺苷、所述尿嘧啶、所述色氨酸、所述组氨酸、所述精氨酸、所述蛋氨酸在所述SILAC标记酵母专用培养基中的浓度均为20mg/L ;所述酪氨酸、所述亮氨酸、所述异亮氨酸在所述SILAC标记酵母专用培养基中的浓度均为30mg/L ;所述苯丙氨酸在所述SILAC标记酵母专用培养基中的浓度为50mg/L ;所述谷氨酸和所述天冬氨酸在所述SILAC标记酵母专用培养基中的浓度均为100mg/L ;所述缬氨酸在所述SILAC标记酵母专用培养基中的浓度为150mg/L ;所述苏氨酸在所述SILAC标记酵母专用培养基中的浓度为200mg/L ;所述丝氨酸在所述SILAC标记酵母专用培养基中的浓度为400mg/L。上述SILAC标记酵母专用培养基中的重稳定性同位素标记的赖氨酸为L-Iysine-13C6 ;也可以为其它质量数不同的重稳定性同位素标记赖氨酸，如L-Iysine-13C615N2等。上述SILAC标记的酵母菌体制备方法中，所述培养的方式为30°C培养9代，共培养18h。上述专用培养基在SILAC标记果蝇蛋白质组中的应用也是本专利技术保护的范围。本专利技术的另一个目的是提供一种SILAC果蝇培养基标记果蝇蛋白质组的方法。本专利技术提供的方法，包括如下步骤用上述的SILAC标记果蝇专用培养基培养果蝇的卵至发育成成虫，得到SILAC整体标记果蝇蛋白质组的果蝇，实现SILAC整体标记果蝇蛋白质组。上述方法中，所述果蝇的卵为将成对的雌雄果蝇在上述的专用培养基上培养、产卵得到。本专利技术的实验证明，本专利技术开发的一种用于果蝇SILAC标记的培养基，可以专门用于SILAC标记果妮蛋白质组，并可以实现快速、闻效地标记，为定量内标的制备和闻精度地定量蛋白质组研究创造了条件。附图说明图I为重稳定性同位素标记氨基酸完全标记的酵母菌图2为含有SILAC标记培养基的果蝇培养装置图3为SILAC标记培养基养殖的果蝇与普通果蝇的比较图4为SILAC标记培养基养殖果蝇标记效率测试具体实施例方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。 本专利技术可以通过以下实例更容易地理解，但本专利技术并不仅限于这些实例。实施例I、SILAC标记酵母菌体的制备一、SILAC标记酵母专用培养基的制备每IL的SILAC标记酵母专用培养基(含有重稳定性同位素标记的氨基酸的SC培养基)的组分如下7g Difco酵母氮源基础(美国BD公司，货号239210)、20g葡萄糖(国药集团化学试剂有限公司，货号10010592)、164. 3 μ mol的重稳定性同位素标记的赖氨酸L-Iysine-13C6 (美国 CIL 公司，货号CNLM-291-0. 25)、20mg 的腺苷(美国 Amresco 公司，货号0325-50G0325-50G)、20mg 尿嘧啶(美国 Amresco 公司，货本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种SILAC标记果蝇专用培养基，按照如下方法制备：将SILAC标记的酵母菌体涂布在果蝇培养基上，得到SILAC标记果蝇专用培养基。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：徐平，杨大福，常蕾，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所，
类型：发明
国别省市：