【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及分子检测领域,具体涉及一种miRNA的原位杂交探针及其检测试剂盒和应用。
技术介绍
原位杂交技术是根据核酸分子碱基互补原则,将标记的DNA或RNA探针与经过变性后的单链DNA片段或组织、细胞上特定的核苷酸序列,在适宜条件下结合形成专一的核酸杂交分子,再经过相应的检测手段,将待测核酸在染色体、组织或细胞上的位置显示出来。原位杂交技术是由Gall和Parue (1969)利用标记的rDNA探针与非洲爪蟾细胞核杂交首次获得成功。随着植物染色体制备技术的改进,Rayburn(1985)最早将非放射性检测系统应用到植物染色体原位杂交。目前,该技术在基因定位、多倍体起源、非整倍体鉴定以及系统进化和亲缘关系等方面均得到广泛应用。 现有的原位杂交探针包括DNA探针、寡聚核苷酸探针、RNA探针,这些探针需要信号级联放大反应才能观察结果,而且要有一定的Tm值才能保证实验的正确性和准确性。而且为了增强信号,目前多采取长的核酸序列做为探针的靶向序列或采用信号扩大系统。miRNA是短的非编码的RNA,是致癌基因或抑癌基因的潜在调节子。RT-PCR、Northern印迹法以及生物芯片可以检测miRNA的表达量,但是并不能检测在单个细胞中miRNA的表达也不能在原位研究moRNA的表达,达到研究miRNA在癌细胞增殖或凋亡的机制的目的。为了验证miRNA表达的特异性以及它在癌细胞或癌组织中的定位,需要进行原位杂交。针对miRNA,因为miRNA的片段长度在18 — 22nt范围内,比较小,Tm值比较小不能满足原位杂交的需要,以上方法均不能很好的解决这些问题。目前,为了解 ...
【技术保护点】
一种miRNA的原位杂交探针,其特征在于,所述杂交探针中的碱基的五碳环第2位碳原子修饰了一个氟原子。
【技术特征摘要】
1.ー种miRNA的原位杂交探针,其特征在于,所述杂交探针中的碱基的五碳环第2位碳原子修饰了 ー个氟原子。2.根据权利要求I所述的原位杂交探针,其特征在于,所述杂交探针的序列为5’一3’AGCCTATGGAATTCAGTTCTCA,其中第3、6、15、20个碱基五碳环第2位碳原子修饰了一个氟原子。3.根据权利要求I所述的原位杂交探针,其特征在于,所述杂交探针的序列为5’一3’TCACGCGAGCCGAACGAACAAA,其中第3、8、13、21个碱基五碳环第2位碳原子修饰了一个氟原子。4.根据权利要求1-3之一所述的原位杂交探针,其特征在于,所述杂交探针的5’和3’端修饰地高辛。5.ー种含有权利要求1-3之一所述的原位杂交探针的miRNA的原位杂交检测试剂盒。6.根据权利要求5所述的原位杂交检测试剂盒,其特征在于,还包括对照探针、预杂交液、封闭液和标记物。7.根据权利要求...
【专利技术属性】
技术研发人员:李江超,关新元,李焱,
申请(专利权)人:中山大学肿瘤防治中心,
类型:发明
国别省市:
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