【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉 及一种利用实时荧光定量PCR技术检测普洱茶渥堆发酵过程中特定高温菌的种群动态变化的方法，属于微生物检测领域。
技术介绍
普洱茶是云南特有的历史名茶，是以云南原产地的大叶种晒青毛茶作为原料经过漫长自然后发酵或快速人为发酵加工而成的产品。大叶种晒青毛茶即我们现在市场俗称的生茶；而发酵后得到的产品即为俗称的熟茶，成品后都还可以持续进行自然陈化过程，而且具有越陈越香的独特品质，渥堆发酵是现代普洱茶熟茶制作的关键。普洱茶的渥堆过程其实是一个高温发酵过程，整个过程涉及到错综复杂的生物转化作用，而微生物便是这些生物转化的执行者。因此，要想掌握普洱茶发酵机制、改进发酵工艺，必然需要对微生物进行深入的研究，进而有效为普洱茶渥堆高温发酵的基础理论研究奠定科学基础。分子生物学技术是一项对微生物免培养检测的新技术，实时定量PCR，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。该技术在常规PCR基础上添加了荧光染料或荧光探针。荧光定量PCR技术具有灵敏度高、特异性强、操作简便、定量准确、速度快、全封...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种检测普洱茶渥堆发酵过程中特定高温菌群动态变化的方法，其特征在于按如下具体步骤进行 (1)序列比对及引物设计 根据特定的高温菌，参照相关文献报道，在NCBI中查找相应的16S rDNA或18S rDNA序列，通过序列比对分析，最终确定出其特异性片段及位置，并以此来设计特异性引物； (2)茶叶的预处理 取发酵过程中的茶叶2-3g，加入去腐缓冲液20-30ml，静置20_30min，超声处理10-15min,涡旋震荡60-90s后取上清液，将上清液置于60_65°C水浴5min，然后6000-8000g离心5-10min，弃上清液收集菌体沉淀，用去腐缓冲液反复洗涤菌体，直至离心后上清液澄清透明，菌体备用； (3)高温菌总DNA提取 在预处理后的菌体中加入液氮、研磨，然后在研磨后菌体中加入DNA提取液，混匀后60-65°C恒温水浴60-90min，冷却；然后加入等体积的氯仿-异戊醇混合液，混匀，10000rpm离心lOmin，取上清液，再重复提取一次，在取出的上清液中加入等体积的异丙醇和1/10上清液体积的3M pH5. 2的醋酸钠，混匀，_20°C冰浴30_40min后15000rpm离心15min，弃上清液，DNA沉淀用质量百分比浓度为75%的乙醇清洗2-3次后，干燥，DNA用TE缓冲液溶解； (4)DNA的纯化 在上述DNA溶液中加入Rnase酶至终浓度0. 25 0. 5mg/ ml，37°C水浴30_45min，然后加入等体积的Tris饱和酹,混勻后IOOOOrpm离心5_10min...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈朝银，孔祥君，刘迪秋，葛锋，韩本勇，熊向峰，吕昌勇，
申请(专利权)人：昆明理工大学，
类型：发明
国别省市：
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