本发明专利技术涉及一种鸡新城疫、产蛋下降综合征和病毒性关节炎三联灭活疫苗的生产方法。本发明专利技术采用新城疫病毒、产蛋下降综合征病毒和病毒性关节炎病毒作为生产菌毒种，超强浓缩工艺和优质佐剂制备成灭活疫苗，免疫动物后抗体产生快，效价高，保护期长，降低了疫病的发生及蔓延。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术是一种用于预防鸡的新城疫、产蛋下降综合征、病毒性关节炎三种疫病油乳剂疫苗的制备方法，属于兽用生物制品领域。
技术介绍
鸡新城疫(newcastle disease, ND)具有很高的发病率和病死率，世界各地多有发生，且一旦爆发将给禽养殖业带来毁灭性打击 ，是危害养禽业的ー种主要传染病。OIE将其列为A类疫病。鸡产蛋下降综合征(Egg drop syndrome, EDS76)是20世纪70年代后期发现的一种以商品蛋鸡和种母鸡产蛋率下降、蛋壳异常、蛋体畸形、蛋质低劣等症状为特征的病毒性传染病。鸡群感染病毒后不死亡，产蛋前不出现临床症状。母鸡产蛋后产蛋率达到50%吋，表现出产蛋量突然下降，连续2 3周下降幅度达到30% 50%。造成很大经济损失。鸡病毒性关节炎(Avian viral arthritis, AVA)是由禽正呼肠孤病毒(Avianorthoreovirus)鸡病毒性关节炎病毒(Avian viralarthritis virus, AVAV)引起的主要发生于肉用鸡的ー种传染病，以侵害胫跖关节、趾关节及其肌腱为特征，故又称传染性腱鞘炎、腱裂综合症或腱滑膜炎等。目前本病分布广泛，世界各地均有发生。在急性发病鸡群中，特别是种鸡群，常因生长缓慢或停滞、体重减轻，饲养利用率低以及死淘率高等，给养鸡业带来巨大的经济损失。国内外现在上市的商品化产品品种很多，但都是很单ー的传统疫苗，多次使用疫苗尤其是灭活疫苗，不仅增加鸡场人力和物カ负担，同时多次抓鸡的注射应激，还会影响生产性能，致使鸡群对疾病的易感性増大。加之近年来毒株的不断变异，使得虽然推出的多种选择的疫苗，但仍然出现控制不住疫情发展的局面。所以迫使我们在以往具有不散毒、抗体滴度高、免疫保护期长、受母源抗体影响小等优点的油乳剂灭活疫苗的基础上开发出更新更好更适合预防这三种流行性疾病的产品。
技术实现思路
本专利技术的目的是制备鸡新城疫、鸡产蛋下降综合征、病毒性关节炎的三种抗原，并进行合理复配制成鸡新城疫、鸡产蛋下降综合征、病毒性关节炎三种疫病油乳剂疫苗，可以有效预防鸡新城疫、鸡产蛋下降综合征、病毒性关节炎的发生，同时也可以大大減少人们的劳动强度，降低养禽业养殖户的风险，而且保证了公众健康。该三联灭活疫苗苗技术的主要相关内容和所采用的技术手段(I)生产用菌毒种为CVCC AV1615株鸡新城疫病毒、NE4株蛋下降综合征和CAVCCV2311株病毒性关节炎病毒；(2)分别按常规方法用鸡胚繁殖CVCC AV1615株鸡新城疫病毒、NE4株蛋下降综合征病毒和CVCC AV2311株病毒性关节炎病毒，收获病毒液后经浓缩和灭活エ艺制备成灭活病毒液；(3)将以上制备的三种灭活抗原混合后鸡新城疫病毒含量不低于108 0EID50/0. 1ml，产蛋下降综合征病毒含量不低于106_°EID5Q/0. Iml ；0. Iml病毒性关节炎病毒含量不低于10&°EID5(i/0. Im ；(4)按常规方法制备灭活佐剂疫苗。本专利技术的详细描述 I.疫苗生产用菌毒种的来源(I)鸡新城疫病毒La Sota株(CVCC AV1615)和效检用鸡新城疫强毒北京株(CVCCAV1611株)均购于北京市海淀区中关村南大街8号中国兽医药品监察所(中国兽医药品监察所，中国兽医微生物菌种保藏管理中心.中国兽医菌种目录第二版，中国农业科学技术出版社，2002，pl42-143)；(2)产蛋下降综合征病毒(Egg drop syndrome virus) NE4株由农业部动物疫病诊断及免疫重点开放实验室引进(陈傅言教授惠赠)，该毒株是从南京某鸡场患病的褐壳蛋鸡海赛克斯父母代种鸡中分离到的一株减蛋综合征病毒(李刚、郑明球.产蛋減少综合征(EDS76)病毒的分离与初步鉴定.《畜牧与兽医》.1992 (1) 10 12)。该毒株已经过严格的毒种鉴定，其成果已荣获江苏省科技进步二等奖(成果编号为(92)苏科鉴字523号)。我们对该毒株用敏感鸭胚进行増殖，梯度离心纯化，再经过血清学、分子生物学等试验对各子代作了系统鉴定。(3)禽正呼肠孤病毒(Avian orthoreovirus,本专利技术又称鸡病毒性关节炎病毒)CVCCAV2311株购于北京市海淀区中关村南大街8号中国兽医药品监察所(中国兽医药品监察所，中国兽医微生物菌种保藏管理中心.中国兽医菌种目录第二版，中国农业科学技术出版社，2002，pl51)。2.生产用种毒的制备鸡新城疫病毒La Sota株(CVCC AV1615)生产用毒种制备将毒种用灭菌生理盐水作适当稀释(如10_4或10_5)，尿囊腔内接种10日龄SPF鸡胚，每胚0. lml。选接种后72 120小时死亡且病痕明显的鸡胚，分别收获鸡胚液(尿囊液及羊水)，装于灭菌容器内。将检验无菌、对1%鸡红细胞凝集价不低于1:512 (微量法)的鸡胚液混合，定量分装于无菌安瓿中，冷冻保存。注明收获日期、毒种代次等。产蛋下降综合征病毒(Egg drop syndrome virus)NE4株生产用毒种制备将毒种，用灭菌生理盐水作适当稀释(如10_2或10_3)，接种10日龄易SPF鸡胚，每胚0. Iml0接种后72 120小时死亡的鸡胚，分别收获尿囊液，装于灭菌容器内。将检验无菌、对1%鸡红细胞凝集价不低于1:20480的鸡胚液混合，定量分装于无菌安瓿中，冷冻保存。注明收获日期、毒种代次等。鸡病毒性关节病毒AV2311株生产用毒种制备将毒种用灭菌生理盐水作适当稀释(如10_3或10_4)，尿囊腔接种10日龄SPF鸡胚，每胚0. lml。选择接种后48 72小时的活胚，分别收获鸡胚液(尿囊液及羊水)，装于灭菌容器内。收获时应逐个检查胚体，应有皮下出血、水肿、发育小等特异性病痕。将检验无菌的鸡胚液混合，定量分装于安瓿中，冷冻保存。注明收获日期、毒种代次等。3.制苗用病毒液的制备(I)鸡新城疫病毒液的制备接种取生产用毒种，用灭菌生理盐水作适当稀释(如10_4或10_5)，接种10 11日龄易感鸡胚，每胚O. 1ml，接种后密封针孔，置36 37°C继续孵育，不必翻胚。孵育与观察鸡胚接种后，毎日照胚I次，将60小时前死亡的鸡胚弃去。此后，每4 6小时照胚I次，死亡的胚随时取出，至96小吋，无论死亡与否，全部取出，气室向上，置于2 8°C冷却12 24小时。收获将冷却的鸡胚取出，收获鸡胚尿囊液(先收活胚后收死胚)。吸取胚液放于50000ml灭菌容器内，抽样测定红细胞凝集价。凝集价低于1:256 (微量法)者应弃去。同时按现行《中国兽药典》进行无菌检验(可不移植)，应无菌生长。收获的胚液灭活前在2 8°C保存，应不超过5日。浓缩将收获的胚液在2 8°C条件下，用超滤浓缩机浓缩，至少浓缩4倍，抽样測定红细胞凝集价，凝集价不低于1:2048 (微量法)时停止浓缩，按中华人民共和国兽药典(中国兽药典委员会.中华人民共和国兽药典ニO — O年版三部.中国农业出版社，2011，本专利技术以下简称为《中国兽药典》)规定的方法进行无菌检验(可不移植)，应无菌生长，并留样备测毒价。浓缩后的胚液随即进行灭活。灭活将鸡新城疫病毒液导入灭活罐内，计量加入10%甲醛溶液，开启搅拌机搅拌，使其充分混合，甲醛的最終浓度为O. 1%。加甲本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种鸡新城疫、产蛋下降综合征、病毒性关节炎三联灭活疫苗，其特征在于该疫苗主要成分是灭活的CVCC AV1615株鸡新城疫病毒、NE4株产蛋下降综合征病毒和CVCC AV2311 株病毒性关节炎病毒和疫苗佐剂。2.—种权利要求I所述鸡新城疫、产蛋下降综合征和病毒性关节炎三联灭活疫苗的生产方法，其特征在于(1)生产用菌毒种为CVCCAV1615株鸡新城疫病毒、NE4株蛋下降综合征和CAVCCV2311 株病毒性关节炎病毒；(2)分别按常规方法...
【专利技术属性】
技术研发人员：左青山，李昌友，郭伟伟，宫晓，王龙，王红，胡潇，李金积，
申请(专利权)人：青岛易邦生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：
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