使用可食用的微生物制造及施用的口服疫苗制造技术

本发明专利技术的抗病原体疫苗是在重组细菌和/或转基因植物中生产的，然后通过标准的疫苗注射方法或者通过口服方式施用。编译病原体抗原的DNA序列编码被连接至启动子上，所述启动子可以调节细菌或转基因植物中表面抗原的产生。在一实施方案中，外源基因被表达在植物某部分或细菌之中，所述植物或细菌作为疫苗使用。在一实施方案中，所述疫苗是通过口服方式施用。本发明专利技术还提供了一种使用经过基因改造的微生物作为口服疫苗的方法，这种微生物通常被认为可以食用和/或在摄入时对动物或人类无害，例如乳酸菌，其中包括乳酸链球菌菌种系。在一个实施方案中，能表达禽流感血凝素(HA)基因的乳酸链球菌可以用作预防H5N1病毒感染的口服疫苗。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种对抗动物病毒、细菌、其它致病原生物和/或抗原体的疫苗，及制备该疫苗的方法。本专利技术涉及一种能表达外來的抗原体的可食用植物以及该植物作为疫苗的使用。本专利技术更涉及外來的抗原体在微生物(例如细菌)中的表达，以及该微生物作为疫苗的使用。在一個实施方案中，本专利技术提供 一种使用乳酸乳球菌来表达禽流感血凝素(HA)，從而作为对抗H5N1病毒感染的口服疫苗的方法。本专利技术更涉及该产自植物或微生物的疫苗的制备和施用方法。背景技術家畜的疾病每年都带来严重的商业影响。在发达国家中可容易得到兽医服务和注射式疫苗，这些疾病虽然严重，但能得到改善。这在具有大规模的畜牧业和能夠制造過量食物的国家更为真确。但在发展中国家中，由于兽医服务和药物的缺乏，以及较差的粮食制造能力，家畜的疾病对人口造成严重的影响，包括导致食物短缺和人民的健康问题。由于抗药性病原体的增加，使用抗生素来有效地控制致病细菌已经越来越困难。因此，许多畜牧业者已经自愿减少在动物饲料中添加抗生素。然而，由于传染病的预防比治疗较为便宜，越来越多的注意力放在了疫苗的研发上。疫苗引发动物的免疫系统去制造抗体对抗病毒、细菌、和其他病原生物。在经济发达的国家，疫苗令很多疾病受控。尤其是很多病毒性疾病现已通过免疫计划得到预防。但是很多疾病，如狂犬病、手足口病等的疫苗对于发展中国家仍然过于昂贵，沒法施用在它们大量畜牧的动物上。缺少这方面的预防措施常在这些国家中引起食物短缺的问题从而令人民的生存条件恶化。致病微生物能通过以下方式感染宿主进入创伤外皮的缺口 ；带菌者传播；或和粘膜表面接触。大部分的动物病菌通过粘膜表面接触引起疾病。病菌和病毒首先在粘膜表面繁殖，或被覆蓋在培氏斑和淋巴小结上的一种特别细胞(M细胞)所吸收。能进入淋巴组织的微生物可在淋巴小结中被杀死，并由于抗原体被送到淋巴小结，从而引发潜在的保护性免疫反应。或者，能抵抗淋巴小结的防御的病原体能从小结中散播，造成局部或全面性的疾病(如沙门氏菌)。除了昆虫传播的病原体或通过伤口进入的病原体外，大部分的病原体都通过粘膜表面进入体内。通过粘膜进入的病原体包括但并不局限于放线菌、气单胞菌属、杆菌、类杆菌属、博德特氏菌、布鲁氏菌、弧菌、Capnbocy Iophaga > Clanrdia、梭菌、Corynebacter iurn>埃肯菌、丹毒絲菌、埃希氏菌、梭杆菌、嗜血杆菌、克雷白氏杆菌、军团杆菌、钩端螺旋体、Lisleria、分支杆菌、支原体、奈瑟氏菌、诺卡氏菌、巴斯德氏菌、Proteus、假单胞菌、立克次氏体、沙门氏菌、月形单胞菌、Shigelia、葡萄球菌、链球菌、密螺旋体、Bibro、以及耶尔森氏菌、Adetiovirus族群的致病组、冠状病毒、疱疫病毒、正粘病毒、Picornovirus、痘病毒、呼肠孤病毒、逆转录酶病毒、及轮状病毒、一般来自Aspercillus、子囊酵母菌、假丝酵母、球孢子菌、隐球菌组织胞浆菌和须霉的病原性真菌、和在一般艾美虫、内阿米巴和毛滴虫中的病原寄生物。被病原体感染的哺乳类动物使用免疫反应來克服病原体。该免疫系统包括粘膜、体液及细胞三个分支。粘膜免疫力來自分泌液中的分泌性抗体(SlgA)，分泌液由所有分泌腺产生，且覆盖在所有粘膜表面，包括呼吸道、肠胃道、生殖泌尿道的粘膜。分泌性抗体IgA能阻止病原体在粘膜表面上繁殖，是第一道预防病原体通过粘膜表面繁殖和入侵的防线。SlgA的生产可由分泌腺或组织的局部免疫激发，或通过向肠相关淋巴组织(GALT或培氏斑)或支气管相关淋巴组织(BALT)提供抗原而激发。膜微皱细胞，或称为M细胞覆盖在GALT和BALT的表面上，或在其他分泌性粘膜表面上。M细胞在粘膜表面旁的管腔采集抗原体，并传送它们至抗原呈递细胞(树突细胞和巨噬细胞)，此细胞从而传送抗原体到T淋巴细胞，T淋巴细胞把抗原体送到B细胞。B细胞被激发繁殖、迁徙并最终转化为能分泌抗体的浆细胞，从而制造IgA对抗被送到的抗原体。当抗原体由覆蓋在GALT和BALT上的M细胞接收时，体内所有分泌组织都能制造能对抗抗原体的slgA，造成一种全面的粘膜免疫力。由于大部分的病原体都是通过粘膜表面进入身体，且这些表面通常是对抗感染和促进身体免疫反应的第一道防线，因此能口服的疫苗是一种激发全面粘膜免疫力的重要途径，能激发口腔和肠胃道的分泌免疫反应。分泌性IgA抗体能直接抑制微生物粘附在宿主的粘膜表皮细胞和牙齿上。这抑制的原因可以是微生物的粘合、疏水性或负电量的降低、以及微生物的粘附受到阻止。这些抗粘附的效果可由其他因素增強，如分泌性醣蛋白、表皮细胞的持续脱落和细菌相爭等。人类口腔脊髓灰质炎病毒疫苗以及若干口腔或鼻腔病毒疫苗应用在動物上的临床经验显示出，在粘膜免疫系统对抗呼吸道和肠胃病毒感染的保护性效果上，SlgA具有决定性的角色。slgA的作用似乎是阻止病毒进入人体细胞，而非阻止病毒的粘附。能对抗感染生物的特定毒性因素的分泌性IgA抗体在整体粘膜免疫力中有重要的角色。在很多病例中，提高粘膜slgA的生产量来对抗感染生物的相关毒性因素可以预防粘膜表面的初期感染。分泌性IgA能通过阻止附着和/或繁殖并且中和表面的毒素，来预防病原体和粘膜表面的初期反应，或阻止其进入人体细胞。注射不活跃的完整细胞和完整病毒能有效地引发保护性血清IgG和延迟性的超敏感反应，从而对抗在致病過程中有明显血清阶段的生物(例如伤寒沙门氏菌和乙型肝炎的人类或动物病原体)。然而，注射的疫苗在诱发粘膜slgA的反应并不有效，而且也不能有效地对抗只和粘膜表面相互反应但并不侵入的细菌((如霍乱弧菌等人类和动物病原体)。因为培氏斑能优先引起IgA B-细胞的发展，如果抗原被送到培氏斑内的T和B淋巴细胞及其副卫细胞，口服免疫便能有效地诱发特定slgA的反应。培氏斑含有辅助性T细胞(TH)，辅助性T细胞能把IgM直接转换成IgA B细胞，然后迁移至肠系膜淋巴结并进行分化、进入胸导管及循环系統、最终停留在包括肠鼓膜中层和呼吸道的所有体内分泌组织中，因而调控B细胞的同型。IgA然后由成熟的浆细胞所制造，与膜上的分泌成分形成复合物，并被运送到粘膜表面，从而能和入侵的病原体互相反应。这种粘膜免疫系统解释了口服疫苗和口服免疫如何能对抗从粘膜表面入侵而引起感染的病原体。由于口服方法简单，现今世界对发展新的口服疫苗技术有很大的兴趣。由于在发展中国家給大量动物进行免疫注射并非可行或极难执行，因此适当地施用口服免疫原能刺激体液和细胞免疫，并有可能为发展中国家提供价格适宜和安全的疫苗。这样的疫苗可基于能表达病源体的保护性抗原表位的细菌或病毒载体系统(多价疫苗)，或基于净化后的抗原，能单独或和其他相关抗原或病原体联合传送。已被采用來发展口服免疫的策略包括使用减弱的变种细菌(如沙门氏菌)作为异种抗原的载体、把抗原装入由聚-DL-乳酸-乙醇酸(PGL)组成的微球体，类蛋白聚合物，胶囊，不同的脂质体配方，把抗原吸附在纳米粒子上，使用亲脂免疫刺激性复合物，或加入有佐剂特性的细菌产品。 目前大部分疫苗的发展需要大规模种植致病媒介。现时，疫苗一般由已死或活着但减弱的病原体制造。如果病原体是病毒，大量的病毒必须在动物体内或人工培养的动物细胞中种植。如果使用活着但减弱的病毒本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：林文傑，徐宇虹，
申请(专利权)人：疫苗基因集团，
类型：发明
国别省市：