一种快速检测鹿产品的多重PCR试剂盒及制备方法技术

本发明专利技术公开一种快速检测鹿产品的多重PCR试剂盒，用于快速准确识别鹿产品，同时还公开了该试剂盒的制备方法，采用多重PCR技术扩增梅花鹿、马鹿、塔里木马鹿、赤鹿以及驯鹿和猪、牛、羊、鸡的各线粒体DNA的特异分子片段制成试剂盒，用于检测被检样品中是否含有上述各动物成分，能检测混合样品；具有操作简单、灵敏度高，速度快特点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术公开一种快速检测鹿产品的多重PCR试剂盒，用于快速准确识别鹿产品，同时还公开了该试剂盒的制备方法，属于生物检测试剂盒

技术介绍
鹿产品是鹿的一些组织或者器官，主要包括有鹿茸，鹿心，鹿肾，鹿胎，鹿筋，鹿鞭，鹿尾，鹿肉和鹿血等。由于鹿产品大多为名贵中药材，价格昂贵，所以市场上屡见用伪劣产品来冒充名贵的鹿产品。目前，鹿产品的鉴定大多采用传统方法，主要包括性状鉴定、显微鉴定和理化鉴定。虽然传统鉴定方法简单、快捷、成本低，但影响传统鉴定方法的因素很多(如人为因素、 环境因素、营养因素)，因而不能准确地判断鹿产品的伪劣情况。比如在鹿产品的加工过程中，其性状、显微结构、理化性质等常常发生改变，利用传统鉴定方法来鉴定鹿产品可能会出现误判。然而，分子鉴定方法(基于DNA的方法)不受这些因素的影响，且具有准确性大、 灵敏度高、稳定性好、通用性强等特点。
技术实现思路
本专利技术提供一种快速检测鹿产品的多重PCR试剂盒，解决了梅花鹿、马鹿、塔里木马鹿、驯鹿及赤鹿以及猪、牛、羊、鸡等常见假冒混合产品的快速检测问题。本专利技术还提供了上述快速检测鹿产品的多重PCR试剂盒的制备方法，通过两个多重PCR方法反应体系(鹿源性反应梅花鹿，马鹿，塔里木马鹿，赤鹿和驯鹿；猪、牛、羊、鸡源性反应猪、牛、羊、鸡)，采用一步反应来鉴别鹿产品中的其他动物成分。本专利技术提供的快速检测鹿产品的多重PCR试剂盒，其特征在于包括DNA提取液、鹿源性多重PCR反应液和猪、牛、羊、鸡源性多重PCR反应液和阴性标准品1、所述的DNA提取液(1)低盐缓冲液(pH7. 6-7. 8 ): 12-13份Tri s碱(三羟甲基氨基甲烷)，32-35份Na2EDTA (乙二胺四乙酸二钠)，7-8份MgCl2,4-5份NaCl，余份为水；(2)细胞裂解液4-6份SDS十二烷基硫酸钠，4-6份TritonX-100 (聚乙二醇对异辛基苯基醚)，1000份低盐缓冲液；(3)蛋白酶K:2份蛋白酶K，100份水；2、所述的鹿源性多重PCR反应液ddH20、10 XPCR Buffer、dNTPs、引物 DF、引物 CCF、弓丨物 CYF、引物 DR、引物 RTF、弓丨物 RTR、Taq 酶具体引物序列为1)梅花鹿、马鹿、塔里木马鹿、赤鹿和驯鹿特异mtD-loopDF (上游)5’ -CAAAGCACGTGATATAACCTTATG-3’DR (下游)5，-CATGGTAATTAAGCTCGTGATCTA-3’2)马鹿特异mtD-loopCCF (上游)5’ -CATGTATAACAGTACATGAGTTAGCG-3’DR (下游)5，-CATGGTAATTAAGCTCGTGATCTA-3’3)塔里木马鹿特异mtD-loop:CYF (上游)5，-CTCAACATCCAITTTACATCTTACATTA-3’DR (下游)5，-CATGGTAATTAAGCTCGTGATCTA-3’4)驯鹿线粒体特异mtl6SrDNA:RTF (上游)5’ -GGAGTAATCCAGGTCGGTTTCTATC-3’RTR (下游)5’ -TAGGGCGGGATATGTTTGTGTATC-3’ ；3、猪、牛、羊、鸡源性多重PCR反应液ddH20、10XPCR Buffer、dNTPs、引物 SSF、引物 SSR、引物 OAF、引物 OAR、引物 GGF、引物 GGR、引物 BTF、引物 BTR、Taq 酶；具体引物序列为①猪特异mtl2S rRNA-tRNA-Val SSF (上游)5’ -CTACATAAGAATATCCACCACA-3’SSR (下游)5，-ACAITGTGGGATCTTCTAGGT-3，②牛特异tRNA-Val-16S rRNA BTF (上游)5’ -GTGCTTGGATAAATCAAGATATAGC-3’BTR (下游)5’ -CTTGGTTGTTTAGTCGAGAGGG-3’③羊特异tRNA-Lys-ATP8 OAF (上游)5’ - TTAAAGACTGAGAGCATGATA-3’OAR (下游)5’ - ATGAAAGAGGCAAATAGATTTTCG-3’④鸡特异12SrRNA GGF (上游)5’ _ TGAGAACTACGAGCACAAAC-3’GGR (下游)5’ -GGGCTATTGAGCTCACTGTT-3，4、阴性标准品为无菌双蒸水。本专利技术所述快速检测鹿产品的多重PCR试剂盒的制备方法，包括以下步骤I)鹿源性多重PCR反应液(I)引物设计设计梅花鹿，赤鹿，马鹿，塔里木马鹿和驯鹿的特异性引物；其中包括一个共同的下游引物(DR)，一个上游引物(DF)和两个物种特异性上游引物(赤鹿CCF，塔里木马鹿CYF)；①梅花鹿、马鹿、塔里木马鹿、赤鹿和驯鹿特异mtD-loopDF (上游)5’ -CAAAGCACGTGATATAACCTTATG-3’DR (下游)5，-CATGGTAATTAAGCTCGTGATCTA-3’②马鹿特异mtD-loopCCF (上游)5’ -CATGTATAACAGTACATGAGTTAGCG-3’DR (下游)5，-CATGGTAATTAAGCTCGTGATCTA-3’③塔里木马鹿特异mtD-loop。CYF (上游)5’ -CTCAACATCCATTTTACATCTTACATTA-3’DR (下游)5，-CATGGTAATTAAGCTCGTGATCTA-3’CN 102605098 A ④驯鹿线粒体特异mtl6S rDNA RTF (上游)5’ -GGAGTAATCCAGGTCGGTTTCTATC-3’RTR (下游)5’ -TAGGGCGGGATATGITTGTGTATC-3’(2)鹿源性多重PCR反应液ddH20 8. 7ul, 10 X PCR Buffer I. 5ul, dNTPs (100 uM) 2. Oul，引物 DF(20 uM)0.2ul，引物 CCF(20 uM) 0. 2ul，引物 CYF(20 uM) 0. 2ul，引物 DR(20 uM) 0.4ul，引物 RTF (20 uM) 0. 3ul，引物 RTR(20 uM) 0. 3ul，Taq 酶(5U/ul) 0.2ul。(3)阴性标准品为无囷双蒸水；2)猪、牛、羊、鸡源性多重PCR反应液(1)引物设计猪、羊、鸡的特异性引物①猪特异mtl2S rRNA-tRNA-Val SSF (上游)5’ -CTACATAAGAATATCCACCACA-3’SSR (下游)5，-ACAITGTGGGATCTTCTAGGT-3，②牛特异tRNA-Val-16S rRNA BTF (上游)5’ -GTGCTTGGATAAATCAAGATATAGC-3’BTR (下游)5’ -CTTGGTTGTTTAGTCGAGAGGG-3’③羊特异tRNA-Lys-ATP8 OAF (上游)5’ - TTAAAGACTGAGAGCATGATA-3’OAR (下游)5’ - ATGAAAGAGGCAAATAGATTTTCG-3’④鸡特异12SrRNA GGF (上游)5’ _ TGAGAACTACGAGCACAAAC-3’GGR (下游)5’ -GGGCTATTGAGCTCAC本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：邢秀梅，杨福合，査代明，荣敏，苏伟林，吴琼，
申请(专利权)人：邢秀梅，
类型：发明
国别省市：