本发明专利技术提供了一种水飞蓟素的制备方法。首先制备里氏木霉CICC?13052、康宁木霉CICC40144两株菌的复合微生物发酵剂冻干粉，经2％的葡萄糖溶液活化后接种于水分含量为40％～45％、蔗糖含量为4.2％～4.8％的水飞蓟去油种子饼粉中，经25℃～28℃条件下保温发酵60小时，再经热风干燥，15℃～20℃、真空度为-0.1MPa条件下提取10h，得黄色粉末状物质，加甲醇溶解，经过滤后取不溶物真空干燥，得水飞蓟素。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及。
技术介绍
水飞蓟是菊科水飞蓟属的植物，1972年引入我国，作为一种保肝药用植物推广种植。水飞蓟素是紫花水飞蓟的干燥果实经提取、精制而得到的有效成分，其药效成分为水飞蓟总黄酮。水飞蓟素具有抗肝中毒、保护肝细胞膜、改善肝功能的药理活性，临床用于治疗肝炎、胆囊炎等。近年来研究发现，水飞蓟素不仅具有保肝利胆作用，而且还具有明显的抗脂质过氧化、抗辐射、清除自由基和抗胃溃疡等作用，并且毒性小、无致畸和诱变作用，在降血脂、防治动脉粥样硬化、预防脑缺血和抗血小板聚集等方面具有较好的效果，水飞蓟素很有可能成为防治心脑血管疾病的良好药物。因此，对水飞蓟药用有效成分的进一步研究是很有意义的。我国是水飞蓟种植大国，但目前对水飞蓟素的生产利用仅仅局限于工艺提取粗品的研究，产品得率低，纯度也相对较低，导致产品的附加值不高。化学分析结果表明，水飞蓟素主要存在于果皮部分，而目前水飞蓟素的提取方法多数限于丙酮等有机溶剂萃取，该方法只能将水飞蓟果皮中的游离状态的水飞蓟素部分提取出来，提取率较低，产品有溶剂残留，加工时会造成一定的环境污染。本专利技术采用生物技术手段处理水飞蓟种子，使水飞蓟种子中与木质素和纤维素结合状态的水飞蓟素经微生物发酵后而分离开来，然后通过乙醇负压提取，可以大幅度提高水飞蓟素的得率和产品纯度，大大降低了生产成本。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供。本专利技术的目的是这样实现的本专利技术中所涉及的百分比除另有注明之外为质量比，本专利技术的产品采用这样的方法来制备的I.发酵菌株的选择及培养基的制备本专利技术选择的发酵菌株均购于中国工业微生物菌种保藏管理中心，菌株编号及使用的培养基配方如下A菌-里氏木霉Trichoderma reesei,菌株编号CICC 13052,培养基为取去皮的马铃薯200克，切成小块，加水1000毫升煮沸30分钟，滤去马铃薯块，将滤液补足至 1000毫升，加葡萄糖20克，溶化后分装，15磅灭菌30分钟。B 菌-康宁木霉 Trichoderma koningii,菌株编号CICC 40144,培养基为4° Β 麦芽汁。2.复合微生物发酵剂冻干粉的制备过程2. I原菌种活化分别量取O. 9 %的生理盐水IOml于2只试管内，经121 °C灭菌20分钟冷却至28 °C，将2株菌安瓶内的冻干菌粉末在无菌状态下全部倒入O. 9%的生理盐水中，震荡使其溶解， 在28°C恒温箱中静止活化30分钟，备用。2. 2发酵菌扩大培养2. 2. I母发酵剂的制备分别量取2株菌培养基各200ml于2只500ml三角瓶内，121°C灭菌20分钟冷却至28°C，按培养基体积的10%接种2. I步骤中已经活化的菌种，在28°C、摇床转速150转/ 分钟条件下摇床培养24小时，作为母发酵剂。2. 2. 2生产发酵剂的制备首先配制质量百分比浓度为10%的脱脂奶乳浊液，分装于2只500mL三角瓶内，每瓶200mL，121°C灭菌20分钟冷却至28°C，分别按2%体积比例接种母发酵剂，28°C、摇床转速150转/分钟条件下摇床培养48 52小时，检测2株菌发酵液活菌数，各发酵液活菌数彡IO9个/ml，视同为发酵成熟，如果活菌数< IO9个/ml，继续培养，直至达到IO9个/ml。2. 3粉末冻干菌种的制备将成熟的生产发酵剂在无菌条件下导入玻璃安瓶中，液面高度低于1cm，加盖瓶塞后放入-30°C冰柜速冻，冻结后将玻璃安瓶用托盘乘装，放入冻干机进行冷冻干燥，制备粉末冻干菌种。2. 4复合微生物发酵剂冻干粉的制备按各粉末冻干菌种重量，取A菌粉末3 5份，B菌粉末2 3份，充分混匀后制成复合微生物发酵剂冻干粉。需要进一步说明的是本专利技术中选用的发酵菌株购于中国工业微生物菌种保藏中心，这些菌种的活化、冻干方法不仅仅限于本专利技术所述的具体方法，培养基的成分也不限于此，其它常规技术和方法都是可以的，只要可以提高菌种的活力、并将其制备成冻干粉状而方便使用即可。3.水飞蓟素的制备3. I水飞蓟种子预处理取水飞蓟种子经机械粉碎后，用螺旋式榨油机榨油，得去油种子饼粉，加水调整去油种子饼粉水分含量为40 % 45 %，按湿去油种子饼粉重量的4. 2 % 4. 8 %添加蔗糖，充分混匀后，121°C灭菌20分钟冷却至28°C，制成发酵培养基，备用。3. 2复合微生物发酵剂冻干粉活化首先配制质量百分比浓度为2%的葡萄糖溶液I千克，取5克复合微生物发酵剂冻干粉，25°C 28°C条件下完全溶解于I千克葡萄糖溶液中，制成复合微生物菌悬液，静止状态下活化30分钟。3. 3 发酵将经过3. 2步骤活化后的复合微生物菌悬液1千克，均匀接种在10千克经过3. 1 步骤预处理的发酵培养基上，然后将接种后的发酵培养基平摊在无菌盘中，培养基厚度 12cm 15cm，25°C 28°C条件下保温发酵60小时。3. 4 干燥将经过3. 3步骤发酵处理的培养基75°C 80°C热风干燥，边干燥边搅拌，使发酵后的培养基水分含量低于5%。3. 5 提取将3. 4步骤处理的物料超微粉碎，过100目筛，按重量体积比为Ig 15mL的比例取过筛后的粉末加入无水乙醇，在15°C 20°C、真空度为-O. IMPa条件下提取10h，膜分离后取上清液减压蒸馏回收乙醇，得黄色粉末状物质，按Ig 5mL的比例加甲醇溶解，经过滤后取不溶物真空干燥，得水飞蓟素。具体实施例方式下面举例对本专利技术作更详细的描述实施例一本专利技术采用的2株菌均采购于中国工业微生物菌种保藏管理中心，分别为里氏木霉 CICC13052、康宁木霉 CICC 40144。I.复合微生物发酵剂冻干粉的制备过程I. I原菌种活化分别量取O. 9%的生理盐水IOml于2只试管内，经121 °C灭菌20分钟冷却至28°C， 将2株菌安瓶内的冻干菌粉末在无菌状态下全部倒入O. 9%的生理盐水中，震荡使其溶解， 在28°C恒温箱中静止活化30分钟，备用。I. 2发酵菌扩大培养I. 2. I母发酵剂的制备分别量取2株菌培养基各200ml于2只500ml三角瓶内，121°C灭菌20分钟冷却至28°C，按培养基体积的10%接种I. I步骤中已经活化的菌种，在28°C、摇床转速150转/ 分钟条件下摇床培养24小时，作为母发酵剂。I. 2. 2生产发酵剂的制备首先配制质量百分比浓度为10%的脱脂奶乳浊液，分装于2只500mL三角瓶内， 每瓶200mL，121°C灭菌20分钟冷却至28°C，分别按2%体积比例接种母发酵剂，28°C、摇床转速150转/分钟条件下摇床培养48-52小时，检测2株菌发酵液活菌数，各发酵液活菌数彡IO9个/ml，视同为发酵成熟，如果活菌数< IO9个/ml，继续培养，直至达到IO9个/ml。I. 3粉末冻干菌种的制备将成熟的生产发酵剂在无菌条件下导入玻璃安瓶中，液面高度低于1cm，加盖瓶塞后放入-30°C冰柜速冻，冻结后将玻璃安瓶用托盘乘装，放入冻干机进行冷冻干燥，制备粉末冻干菌种。I. 4复合微生物发酵剂冻干粉的制备按各粉末冻干菌种重量，取A菌粉末3份，B菌粉末2份，充分混匀后制成复合微生物发酵剂冻干粉。2.水飞蓟素的制备2. I水飞蓟种子预处理取水飞蓟种子经机械粉碎后，用螺旋式榨油机榨油，得去油种子饼粉，加水调整去油种子本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：张贵，彭波，杨喜春，
申请(专利权)人：佳木斯三江水飞蓟素制品有限公司，
类型：发明
国别省市：
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