药物原料中细菌内毒素的检测方法技术

一种药物原料中细菌内毒素的检测方法，包括以下步骤：药物原料的选择：选择易挥发、难溶于水药物原料；供试液的制备：称取计量所选择的药物原料，加热使其挥发，用等量细菌内毒素检查用水补充到原药物质量，得到供试液；对供试液采用常规方法检测药物原料中细菌内毒素。本发明专利技术提供的检测方法能够测定出采用已知方法无法直接测定的但异氟烷、恩氟烷、七氟烷等难容于水、易挥发的药物原料中的细菌内毒素，能从源头上对无菌产品质量进行控制，对保证制剂产品安全性有重要意义。检测过程中无需添加其它试剂，能够简便、可靠的检测样品中细菌内毒素的存在。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于微生物检验领域，具体涉及ー种测定易挥发、难溶于水药物原料中細菌内毒素的方法。
技术介绍
无菌药品是指法定药品标准中列有无菌检查项目的制剂和原料药，包括无菌制剂和无菌原料药。“产品的无菌或其它质量特性绝不能只依赖于任何形式的最终处理或成品检验(包括无菌检查)。”是2010年版药品生产质量管理规范中，无菌药品管理的基本原则之ο細菌内毒素是注射剂药品中的主要污染物质。細菌内毒素是革兰氏阴性菌細胞壁上的一种脂多糖和微量蛋白的复合物，它的特殊性不是細菌或細菌的代谢产物，而是細菌死亡或解体后才释放出来的ー种具有内毒素生物活性的物质。内毒素具有极强的生物学活性，特別是革兰氏阴性菌感染和静脉注射提取的内毒素溶液吋，可导致动物体发生内毒素休克和死亡。很多严重疾病(如损失、烧伤、心、肾、消化系统、呼吸系统、肿瘤、心血管手木、 自动免疫等方面的疾病)都直接或间接与革兰氏阴性菌感染及其释放的内毒素有关。专利CN1116031C提供了一种静脉注射用乳化吸入全身麻酔药及其制备方法。该方法提示可将挥发性麻醉药制成静脉给药。挥发性药物如氟烷、地氟醚、异氟烷、恩氟烷、七氟烷等在制成静脉注射用药时，作为直接进入血液药物，細菌内毒素是药典规定必检项。同时为进ー步控制无菌产品质量，除了严格按照GMP要求采用无菌生产エ艺，还需在源头上把关，对原料的細菌内毒素进行控制是非常必要和有效的质量保证手段。常规细菌内毒素检查法检测或量化样品細菌内毒素吋，首先需对样品进行复溶、 稀释或在水性溶液中浸提制成供试样品溶液，再根据样品的性质确定内毒素限值和最大有效稀释倍数(MVD)，最后采用凝胶法或光度測定法检查样品的細菌内毒素。但异氟烷、恩氟烷、七氟烷等挥发性原料难溶于水，采用已知方法无法直接检查出样品細菌内毒素。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供ー种简便、可靠方法，可快速检测易挥发性、不溶于水药物原料的細菌内毒素含量的方法。本专利技术的目的是这样实现的一种药物原料中細菌内毒素的检测方法，该检测方法包括如下步骤1)药物原料的选择选择易挥发、难溶于水药物原料；2)供试液的制备称取计量所选择的药物原料，加热使其挥发，用等量細菌内毒素检查用水(BET)补充到原药物质量，得到供试液；3)利用步骤2)中得到的供试液，采用常规方法检测药物原料中細菌内毒素。步骤2)中对药物原料的加热温度为药物原料的沸点。所述的药物原料为氟烷、地氟醚、异氟烷、恩氟烷或七氟烷。本专利技术具有以下有益效果(1)检测过程中无需添加其它试剂，能够简便、可靠的检测样品中細菌内毒素的存在。(2)本专利技术提供的检测方法能够测定出采用已知方法无法直接測定的如异氟烷、 恩氟烷、七氟烷等难溶于水、易挥发的药物原料中的細菌内毒素，能从源头上对无菌产品质量进行控制，对保证制剂产品安全性有重要意义。具体实施例方式本专利技术的整体检测方案如下1)药物原料的选择选择易挥发、难溶于水药物原料，如氟烷、地氟醚、异氟烷、恩氟烷或七氟烷；2)供试液的制备称取计量所选择的药物原料，加热到沸点使其挥发，用等量細菌内毒素检查用水(BET)补充到原药物质量，得到供试液；3)利用步骤2)中得到的供试液，采用常规方法检测药物原料中細菌内毒素。一、实验准备 1、实验用具1)数显恒温水浴锅，型号HH-2，金坛市荣华仪器制造有限公司。2) V0RTEX-2 旋涡混合器。3)其它玻璃试验器械均超声后纯化水清洗三次，然后在250°C下干烤2小时以上。、试验材料鲎试剂规格为0. Iml/支，鲎试剂灵敏度标示值λ =0. 5EU/ml ； 有国家主管部门批准文号，并经过灵敏度复核符合规定的細菌内毒素工作标准品 (WSE) (160EU/ 支)；細菌内毒素检查用水(BET) :5ml/支(按药典要求，内毒素含量采用凝胶法检查应小于 0. 015Eu/m 1的灭菌注射用水，采用光度測定法为小于0. 005Eu/m 1)。以上材料市售可得。ニ、溶液的配备1、供试样品的制备精密称取药物原料样品，将其置于加热锅中加热蒸干，然后取等重細菌内毒素检查用水补入，封ロ混合后作为供试样品。经验证实验证明蒸干过程没有带入外源内毒素也没有损失样品内含有的内毒素， 且本稀释级溶液对内毒素检查没有影响。否则需取更高稀释级溶液进行干扰试验。(干扰试验在实施例中详述。)2、細菌内毒素标准溶液的配备取細菌内毒素工作标准品1支，用砂轮轻轻划痕，75%酒精棉球擦拭启开，加入Iml細菌内毒素检查用水溶解，在漩涡混合器上混合15分钟，然后制备2. 0 λ、1. 0 λ、0. 5 λ、0. 25 λ 所需内毒素标准溶液，毎次稀释均在漩涡混合器上混合30秒钟，封ロ备用。三、細菌内毒素检测限值的确定參照注射液用法用量，按药典要求以L=K/M (L为供试品的細菌内毒素限值；K为人每千克体重每小时最大可接受的細菌内毒素剂量；M为人每千克体重每小时的最大供试品剂量)计算限值L，単位Eu/ml、Eu/mg或Eu/U (活性単位)。 将制备好的供试样品，稀释到经过干扰试验验证的最大稀释倍数MVD (MVD=c*L/ λ，c为供试品溶液浓度，)，与細菌内毒素标准溶液混合成下表溶液权利要求1.一种，其特征在于该检测方法包括如下步骤1)药物原料的选择选择易挥发、难溶于水药物原料；2)供试液的制备称取计量所选择的药物原料，加热使其挥发，用等量细菌内毒素检查用水(BET)补充到原药物质量，得到供试液；3)利用步骤2)中得到的供试液，采用常规方法检测药物原料中细菌内毒素。2.根据权利1所述的，其特征在于步骤2)中对药物原料的加热温度为药物原料的沸点。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述的药物原料为氟烷、地氟醚、异氟烷、恩氟烷或七氟烷。全文摘要一种，包括以下步骤药物原料的选择选择易挥发、难溶于水药物原料；供试液的制备称取计量所选择的药物原料，加热使其挥发，用等量细菌内毒素检查用水补充到原药物质量，得到供试液；对供试液采用常规方法检测药物原料中细菌内毒素。本专利技术提供的检测方法能够测定出采用已知方法无法直接测定的但异氟烷、恩氟烷、七氟烷等难容于水、易挥发的药物原料中的细菌内毒素，能从源头上对无菌产品质量进行控制，对保证制剂产品安全性有重要意义。检测过程中无需添加其它试剂，能够简便、可靠的检测样品中细菌内毒素的存在。文档编号G01N33/15GK102565293SQ201110435140公开日2012年7月11日 申请日期2011年12月22日 优先权日2011年12月22日专利技术者刘峰, 徐华斌, 李莉娥, 赵蔓菁, 钟丽君 申请人:宜昌人福药业有限责任公司本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘峰，赵蔓菁，李莉娥，徐华斌，钟丽君，
申请(专利权)人：宜昌人福药业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：