本发明专利技术公开了一种监测患肝癌或肝纤维化风险的组合物，由选自下述的N-寡糖链组成：NA3F、NA2F、NA2FB、NA2G、NA2GF、NGA2F、NGA2FB以及NA3。上述组合物可用作制备试剂，用于肝癌早期诊断、肝癌分期检测或预后评估，还可以应用于肝纤维化早期诊断或预后评估。本发明专利技术还提供了一种监测患肝癌或肝纤维化风险的方法，可大大提高肝癌或肝纤维化诊断的灵敏性和稳定性，大大优于现有的AFP检测技术。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药领域，具体涉及ー种监测患肝癌或肝纤维化风险的试剂或组合物
技术介绍
原发性肝癌(primarylivecarcinoma，PLC)，简称肝癌，包括原发性肝细胞癌、 胆管細胞癌、混合型癌、肝母細胞癌等，以原发性肝細胞癌为最常见。原发性肝細胞癌 (hepatocellularcarcinoma, HCC)是全球最常见的癌症之一，也是近年来发病率上升最快、 病死率最高的肿瘤之一。毎年在全球肝癌发病人群中，中国患者占将近一半，在中国的癌症死亡率中排名第二。当人们感染上乙型肝炎病毒(O^patitis virus B,HBV)或丙型肝炎病毒(HCV)后常会导致慢性肝纤维化，并逐渐发展成肝硬化。统计数据显示，60-80%的肝硬化患者会发展成肝癌。中国是HBV感染的高发国家，也是肝癌的高发地区，近年发病率呈缓慢上升趋势，病死率也随之上升，毎年死于晚期肝癌的病人约20万人。其发病率之高也与我国肝炎病人居多有关，85%的肝癌患者是由病毒性肝炎引起的。HCC的早期患者一般多无临床症状，或仅有肝炎的症状，很难早期发现。大约80%的肝癌患者一经发现就已到晚期， 人出现了食欲不振、消瘦、腹水、肝区疼痛、右上腹肿块等典型症状，这些病人生存期大多在半年之内，而失去了进行根治性手术治疗的机会。因此，早期诊断对肝癌的治疗效果非常关键，对于患有慢性肝病和肝硬化的高危人群进行早期肝癌的筛查，从而进行根治性手术治疗，可以有效的降低死亡率。目前有各种成像技术用于诊断肝癌，例如超声波，CT扫描和核磁共振成像等。然而，这些技术不能区分肝癌和良性肝病变，如不典型增生结节和肝硬化微结节。超声检查通常难以发现、确认小于3cm的肿块。目前临床上最常用的肝癌标志物是甲胎蛋白(alpha-fetoproteir^AFP)，但是有相当一部分肝癌患者的AFP不升高，也有很多慢性肝炎和肝硬化患者出现AFP的升高。因此，AFP的敏感性和特异性都无法让人满意。上述现状导致HCC难以实现早期发现和早期治疗，患者预后差、5年生存率低、病死率高。因此，寻找有效的早期HCC筛查及诊断指标来提高的HCC患者的诊断治疗水平迫在眉睫。目前，诊断肝硬化患者是否患有HCC可通过无创检测，如影像对比、AFP检测等方法来进行。治疗后，医生通过常规AFP检测和影像检查来确定肿瘤是否复发。当影像学手段无法达到诊断目的吋，还可以通过活检来诊断。由于肝活检对病人有一定的风险，因此肝活检是不适合納入常规检查，一般每半年一次来监测评估肝脏疾病的进展以及治疗后肿瘤是否复发。由于AFP检测的特异性不高，可产生一定的假阴性和假阳性，可能漏诊一部分肝癌患者。因此，需要其他的血液标记方式来替代或辅助AFP检测。糖蛋白分子由多肽链和糖两部分組成。血清中大多数的糖蛋白是由肝脏和B淋巴細胞合成的。血清糖蛋白中N-糖苷键连接的寡糖链(简称N-寡糖链)的任何变化，可以反映肝細胞或B淋巴細胞的生理改变。近年来，糖组学研究显示了 N-寡糖链的改变与各种肿瘤的发生和发展有密切的相关性(參考文献1，Liu, X-E, Desmyter, L，Gao, C-F, Laroy, W, Dewaele, b, Vannooren, V, Wang, L, Zhuang, H, Callewaert, N, Libert, C, Contreras,R, Chen, C. N-Glycomic changes in hepatocellular carcinoma patients with liver cirrhosisinduced by hepatitis B virus. Hepatology，46，1426—1435，2007.)。鉴于肝癌早期预防和预后监测的不确定性，目前迫切需要一种有效地监测肝癌的试剂和监测评估方法。
技术实现思路
本专利技术涉及一种监测早期肝癌以及预后风险评估的組合物及其监测方法。在本专利技术中，我们确定了，血液糖蛋白的N-糖苷键连接的碳水化合物(N-寡糖)含量的改变，与早期肝癌患者的组织学的肝癌早期阶段(Tl或1 之间存在显著地相关性。在上述工作基础上，我们发现了评估肝癌早期阶段的临床监测方法，对没有任何临床表现的患有肝疾病患者，包括肝纤维化患者，肝硬化患者和肝癌早期阶段患者均可有效筛查，定期评估肝脏疾病的进展以及治疗后肿瘤的复发。在本专利技术中，我们使用血清的N-寡糖链指纹技术(简称G-Test方法)作为诊断指标，对肝癌(HCC)患者进行了评估。研究表示，N-寡糖链指纹技术可作为诊断肝癌的肿瘤分期，同时这项检测方法可以检测出50%的AFP漏诊的HCC病例。因此，将N-寡糖链指纹和AFP监测联合使用，可以大大提高肝癌早期诊断的准确率。该方法可以让众多肝纤维化和肝硬化患者接受常规、无创检测，帮助医药工作者早期检测肝癌，并能够及时监测疾病进展。本专利技术G-Test方法是基于检测血液糖蛋白中N-寡糖链的指纹图谱，创建的ー种 HCC的早期筛查及诊断的检测方法和检测系统。该方法主要步骤是，释放并荧光标记血清或血浆样品中的糖蛋白的N-寡糖链；分离测量样本中荧光标记的N-寡糖链的含量或指纹图谱(简称G-Test图谱)；分析比较N-寡糖指纹图谱，得到检测指标參数。该方法可以让众多肝纤维化肝硬化患者接受常规、无创检测，帮助医生早期检测肝癌，并能够及时监测疾病的发生和发病的进展。一种监测患肝癌或肝纤维化风险的組合物，由选自下述的N-寡糖链组成NA3F、 NA2F、NA2FB、NGA2F、NGA2FB 以及 NA3。上述的组合物，可以由 NA3F、NA2F 和 NA2FB 组成；上述的組合物可用于制备肝癌早期诊断和肝癌分期检测试剂。我们可以利用NA3F/ (NA2F+NA2FB)的比值来诊断早期肝癌诊断和肝癌分期检测。一种诊断试剂，包括組合物，所述组合物由NGA2F、NGA2FB和NA3組成；所述的組合物在制备肝纤维化早期诊断或预后评估试剂中的应用；所述的組合物，通过(NGA2F+NGA2FB)/NA3的比值来监测肝纤维化。本专利技术还可以是ー种诊断试剂，其包括上述的組合物。材料和方法一、测试样本本实验共收集了 471例患者的血清，血清收集来自北京(佑安医院，武警医院，地坛医院，北大医院)，南京(南京第二医院)和上海(瑞金医院)，其中包括173例肝纤维化患者，218例HCC患者和80例肝硬化患者。健康对照组130例的血清来自北京红十字会中心。以上患者均接受临床实验室分析诊断和组织学检查(肝穿刺活检)并符合以下选择标准(a)均为HBV感染的患者(b)排除人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiencyvirus，HIV)、丙型(h印atitis C virus，HCV)、丁型(h印atitis D virus，HDV)、戊型 (hepatitisE virus HEV)肝炎病毒和梅毒(syphilis)等除乙型肝炎病毒感染之外的其他病毒感染；(c)排除自身免疫性肝病、酒精性肝病，药物性肝病和Wilson病；血清采集均在患者未接受任何治疗之前，临床血常规、生化、肿瘤标志物、乙肝肝炎病毒标志物、DNA载量等数据与血清同期收集。丙氨酸转氨酶(ALT)，谷草转氨酶(AST)，总胆红素，白蛋白，血清总蛋白和Y-本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：陈翠英，
申请(专利权)人：陈翠英，
类型：发明
国别省市：
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