本发明专利技术提供了一种氯丙嗪残留的时间分辨免疫分析检测试剂盒及其检测方法。本发明专利技术所述试剂盒包被有氯丙嗪抗原的酶标板，镧系元素标记羊抗兔或羊抗鼠抗体、氯丙嗪抗体等。本发明专利技术还公开了应用上述试剂盒检测氯丙嗪残留的方法。本发明专利技术提供的检测氯丙嗪的试剂盒采用间接竞争时间分辨免疫分析技术，灵敏度高、稳定性好，大大简化了操作步骤和反应时间，减少了因操作复杂引起的误差，降低了成本，非常适合大量样品的筛查，具有重要的现实意义。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于免疫检测
，具体涉及一种检测氯丙嗪残留的时间分辨免疫分析试剂盒及其制备方法。
技术介绍
近年来，随着社会经济的快速发展，养殖业的集约化发展，违禁添加物在畜牧业生产中的应用显著增加，由此导致的动物性食品中药物残留的问题也日益突出，诸如“瘦肉精事件”、“三聚氰胺事件”和“双汇事件”等事故频频出现。动物性食品中药物残留对消费者的健康是一大隐患，严重者可引起中毒甚至死亡。这些事件不仅对我国动物源性食品的出口造成极大损失，而且对人民身体健康造成严重影响。氯丙嗪(Chlorpromazine，简称CPZ)是世界上第一个抗精神病药，又名冬眠灵、阿米拉嗪，化学名称为N，N-二甲基-2-氯-10H-吩噻嗪-10-丙胺，药用一般为其盐酸盐形式，分子式为=C17H19ClN2S. HCl，分子量为355. 33。其化学结构式见图1。目前，由于氯丙嗪的镇静、催眠特殊生物学作用，常被用作饲料添加剂。但氯丙嗪对人体具有白细胞减少、体位性低血压、肝功能障碍、皮疹、接触性皮炎等过敏性反应。震颤、静坐不能、流涎等迟发性运动障碍，对人体有毒性副作用。欧盟早在1997年就颁布了氯丙嗪禁止在饲料中添加的禁令(EC)NO. 17/97。我国农业部、卫生部、国家药品监督管理局联合发布《禁止在饲料和动物饮用水中使用的药物品种目录》农业部第176、235号公告(2002年)也明确指出严禁氯丙嗪在动物饲料和饮水中添加，允许治疗剂量，但在动物性食品中不得检出。免疫学分析技术以其灵敏、特异、快速、简便的优点在药物残留检测领域已被广泛应用，比起理化检验方法有很多优势。目前，对畜禽产品中氯丙嗪残留的检测主要采用理化检验方法。然而理化检验方法存在复杂、繁琐、检测通量小、需要专业人员和专业技能、检测成本昂贵等缺陷，不能实现大批量样品的快速检测分析。因此，有必要研制更加简单快捷方便的检测方法。免疫学分析技术以其灵敏、特异、快速、简便的优点在药物残留检测领域已被广泛应用。时间分辨免疫分析(TRFIA)的基本原理是其采用了特殊的镧系金属即三价稀土离子(Eu3+、Tb3+、Dy3+、Sm3+)及螯合剂(代替荧光物质、同位素或酶)。标记蛋白质、多肽、激素、抗体、核酸探针或生物活性细胞，待反应体系(如抗原抗体反应、核酸探针反应、生物素亲和素反应、靶细胞与效应细胞的杀伤反应等)发生后，用时间分辨分析仪测定最后产物中的荧光强度，根据荧光值的强弱，判断体系中分析物的浓度，达到定量分析的目的。时间分辨免疫分析检测方法在国外已被广泛应用于临床检测，近年在许多新领域得到应用，如免疫组织化学、微阵列，并可用于双标记、三标记和四标记等多标记免疫分析。 荧光免疫检测方法作为一项具有广阔发展潜力的新兴生物学技术，已经给标记免疫学带来一场革命。本专利技术对免疫检测技术进一步应用于食品中兽药残留的快速检测提供一种新途径。但目前尚无采用时间分辨免疫分析法检测氯丙嗪的相关技术报道，更没有一种适合进行氯丙嗪时间分辨免疫分析检测的试剂盒，以便于实现高灵敏度、操作简单的大批量快速检测。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种高灵敏度、操作简单，能大批量快速检测的。本专利技术的检测试剂盒的技术方案是这样的一种检测氯丙嗪残留的时间分辨免疫分析检测试剂盒，其特征在于包括包被有氯丙嗪抗原的酶标板、氯丙嗪抗体、镧系元素标记羊抗兔抗体或镧系元素标记羊抗鼠抗体、 氯丙嗪标准溶液、增强液、浓缩洗涤液及样品稀释浓缩液，其中所述氯丙嗪抗原通过碳二亚胺法、或活泼酯法、或混合酸酐法由氯丙嗪与载体蛋白偶联得到；所述氯丙嗪抗体为单克隆抗体、或者兔多克隆抗体、或者基因工程抗体；所述镧系元素为Eu3+、或者Tb3+、或者Dy3+、或者Sm3+ ；所述氯丙嗪标准溶液为以浓度为1000 μ g/L的氯丙嗪标准品配成的浓度梯度为 8. 1 μ g/L,2. 7 μ g/L、0. 9 μ g/L、0. 3 μ g/L、0. 1 μ g/L、0 μ g/L 的氯丙嗪标准品工作液；所述增强液包括β-二酮体、三辛基氧化磷、聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100)、冰醋酸和pH值为2. 0 3. 2的邻苯二甲酸氢钾；所述浓缩洗涤液包括0. 5 1. 5%的吐温20的磷酸盐缓冲液，所述磷酸盐缓冲液 PH值为7. 4，浓度为0. lmol/L ；所述样品稀释浓缩液为pH值为7. 4 8. 0,0. 1 0. 25mol/L的Tris-HCl0所述酶标板为96孔酶标板，包被有氯丙嗪包被抗原，并封闭微孔表面未吸附位点；封闭微孔的封闭液为溶于PBS的脱脂奶粉溶液。本专利技术的氯丙嗪残留检测方法的技术方案是这样的一种利用上述试剂盒进行检测氯丙嗪残留的检测方法，其特点在于包括如下方法步骤(1)样品前处理采集检测样本为尿液样本、或者饲料样本、或者组织样本；各种样本前处理方式如下(a)尿液样本处理清澈尿液样品可以直接进行检测分析，不用前处理；若尿液样本呈浑浊状，则采用2000r/min的离心设备离心5min过滤，得到用清澈尿液样品；(b)饲料样本处理将饲料样本粉碎，称取2g置于50mL试管中，加入12mL的浓度为10%的氨化甲醇，然后充分混勻振荡1 ailin，再加入9mL的乙酸乙酯，并振荡20min， 用5000r/min的离心设备离心IOmin过滤，接着，取有机相500 μ L于另一试管中，用氮气吹干，加入样品稀释浓缩液500 μ L稀释后直接检测；(c)组织样本处理所述组织样本为动物肌肉、或者动物肝脏、或者动物肾脏；将组织样本破碎和均质化，然后称取2g置于可密封的试管中，加入IOmL的纯甲醇，并涡旋混勻5min，接着用10000r/min的离心设备离心5min、或者用3000r/min的离心设备离心 20min后，取上清，待沉淀再加入IOmL的纯甲醇，接着用lOOOOr/min的离心设备离心5min、 或者用3000r/min的离心设备离心20min后，取上清，经两次混勻离心上清后，取出10mL，用氮气吹干，取ImL的样品稀释浓缩液重新充分溶解后，得到检测用的组织样本。(2)检测与分析(a)将权利要求1所述的试剂盒从冷藏环境中取出，置于20 环境中平衡不少于30min，将酶标板条固定，做平行实验，按顺序编号；(b)在标准品孔加入50μ L标准溶液，样品孔加入50μ L待测样品，然后每孔加入 50 μ L氯丙嗪单克隆抗体工作液，混勻；振荡反应；(c)步骤(b)所述振荡反应后洗板，拍干，每孔加入100 μ L铕标二抗工作液，振荡反应；(d)步骤(c)所述振荡反应后洗板，拍干，每孔加入200μ L增强液，混勻，避光室温轻拍振荡；(e)用TRFIA检测仪测定各孔荧光值；(f)根据标准溶液荧光值与浓度半对数做标准曲线，根据标准曲线与样品溶液荧光值计算样品浓度。本专利技术的有益效果本专利技术采用镧系元素作标记物，DTTA为螯合剂，建立了对氯丙嗪的定量分析方法，此法操作流程短、简单、快速，精密度和准确度均较好，样品前处理简单，尤其是采用铕 (Eu3+)作标记物，DTTA为螯合剂，效果好，成本低。浓缩洗涤液为含0. 5 1. 5%吐温20的磷酸盐缓冲液(pH7. 4,0. lmol/L)，为正常使用浓度的15 25倍；所述样品稀释浓缩液为pH7. 4 8. 0,0. 本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：伍志权，朱晓明，邢贞妙，彭子强，李红苑，黄换开，
申请(专利权)人：佛山市中南农业科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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