本发明专利技术提供一种黄芩药材UPLC-MS指纹图谱的测定方法，是采用超高效液相色谱-质谱联用仪进行测定，它具有23个共有峰，每个峰都标定了离子质量和分子式，测定步骤包括：制备供试品溶液；设定指纹图谱检测的色谱条件和质谱条件；记录18分钟的色谱图，根据各峰分子离子的质核比获得23个共有峰的提取离子色谱图，进行指纹图谱评价。本发明专利技术的优点是采用了超高效液相色谱仪进行分离，质谱仪进行检测，大大缩短了分离时间，提高了分离效率和检测灵敏度，并能实现对共有峰的准确定位。该方法灵敏度高，专属性强，可用于黄芩药材的鉴别和质量评价。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及中药指纹图谱的测定方法，具体地说是黄芩药材超高效液相色谱-质谱联用指纹图谱的构建及其标准指纹图谱。属于药物分析
技术介绍
中药指纹图谱是采用现代分析技术建立的能够反映中药材或中成药的某类或几类成分的色谱或光谱信息的图谱，能较全面地反映中药的整体化学特征，体现其内在的整体质量，可弥补仅用少数成分来控制中药质量的弊端，已成为国际公认的控制中药或天然药物质量的有效手段。然而，中药化学成分的多样性和复杂性以及药效物质基础的不确定性，增加了中药指纹图谱建立的难度以及指纹图谱的有效性和重现性。目前，中药指纹图谱研究比较多的是中药化学指纹图谱，是指采用色谱、波谱和其他分析方法建立的用以表征中药化学成分特征的指纹图谱。高效液相色谱(HPLC)具有分离效能高、分析速度快、重现性好的特点，以及可配备不同的检测器来分析各种类型样品的优势，已成为公认的建立中药指纹图谱的主导方法。近年来兴起的超高效液相色谱技术 (UPLC)借助于HPLC的理论及原理，采用1. 7 μ m粒径的色谱柱填料，使一次指纹图谱的分析时间由原来的至少1小时缩短为10分钟左右，并且色谱峰容量和稳定也显著提高，尤其适合于中药及天然产物的研究，为中药指纹图谱研究提供了新的分离平台。紫外(UV)检测器是目前与液相色谱联用进行指纹图谱研究应用最广泛的检测方法。然而化学成分的紫外吸光度具有加和性，当中药的复杂化学成分没有获得良好分离时， 所检测的响应值是多成分吸光度的加和，从而使测定结果产生偏差，不能真实反映中药化学成分的含量。而且紫外检测法只适合具有紫外吸收的中药化学成分，对于无紫外吸收或吸收较弱的成分，难以进行有效的检测。质谱(MQ检测器可用于中药中各种化合物的检测，均可产生较好的响应，是一种高灵敏度的通用型检测器，更重要的是能提供化合物的分子量和分子结构信息(串联质谱)。采用质谱检测器，通过确定离子的质量扫描范围，可以使其包含所有目标化合物的信息。应用总离子流检测模式，可以综合化合物的全部信息；进而，通过考查共有色谱峰的质谱信息，可以确定色谱峰的组成情况，保证色谱峰为单一化合物组成，具有较好的科学性。由于中药化学成分的复杂性，保证中药指纹图谱中的色谱峰为单一化合物峰是很难的，这也几乎是不可能的，而采用质谱检测器，可以从总离子流色谱图 (TIC)中提取特定m/z的离子，建立提取离子色谱图(EIC)，从而保证了色谱峰为单一化合物组成。另外，通过对共有峰进行质谱定性，建立共有峰的提取离子色谱图，进而通过色谱峰与化合物m/z的一一对应关系，实现对各共有峰的准确定位和测量，从而可弥补其它方法实验室之间的重现性差的缺点。UPLC-MS结合了最优良的色谱分离能力和最灵敏、最智能的检测能力，在中药化学指纹图谱研究中极具发展前景和空间，优势突出，特点明显，必将成为中药指纹图谱的发展趋势和方向。黄芩是一味常用中药，为唇形科植物黄芩kutellaria baicalensis Georgi的3干燥根，具有清热燥湿、泻火解毒、止血、安胎的功效。黄芩主要含有黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素等黄酮类成分，《中国药典》“黄芩”和“黄芩提取物”项下仅对其所含的黄芩苷进行了含量测定和控制，难以有效控制黄芩药材及其提取物的整体质量。在《中国药典》的基础上，有专利进一步测定了黄芩素、汉黄芩素和汉黄芩苷的含量(专利申请号 200510029014. 7)，另有采用HPLC-UV指纹图谱和多成分含量测定的方法控制黄芩质量(专利申请号200510031453. 1)。但是仍没有利用UPLC-MS进行黄芩质量控制的报道。本专利技术在黄芩血清药物化学研究的基础上，选择能够被吸收入血的成分作为指纹图谱测定指标， 并经10个产地黄芩指纹图谱的测定，确定共有指纹峰及其变化范围，作为黄芩质量控制的方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术的缺点和不足，提供一种利用UPLC-MS进行黄芩药材质量控制的方法，以及由此方法所得到的黄芩药材标准指纹图谱。为实现此目的，本专利技术通过黄芩血清药物化学研究阐明黄芩的入血成分，以黄芩入血成分作为检测指标，并利用UPLC-MS技术进行构建黄芩药材化学指纹图谱，用于黄芩的质量控制。本专利技术的黄芩药材UPLC-MS指纹图谱的测定方法包括如下步骤(1)供试品溶液的制备称取黄芩药材粉末适量，精密称定，置于锥形瓶中，用 70%甲醇20mL超声提取10 45分钟，放至室温，过滤，滤液置于50mL容量瓶中；残渣再用甲醇20mL超声提取10 45分钟，放至室温，过滤，残渣用少量甲醇洗涤，滤液并入50mL容量瓶中，定容，摇勻，13000rpm离心15分钟，吸取上清液，作为供试品溶液；(2)测定条件色谱分离柱为ACQUITY UPLC 系列柱；流动相为0. 1 %甲酸乙腈-0. 甲酸水，采用梯度洗脱方式；流速0. 3 0. 5mL/min ；柱温40-45°C ；进样量为 1 5μ L。质谱扫描方式正离子全扫描检测模式；扫描质量范围100-1000mDa ；(3)测定方法吸取供试品溶液，注入UPLC-MS联用仪，测定，记录18分钟的色谱图。设定各共有峰的质核比(m/z)，建立各峰的提取离子色谱图，以黄芩苷峰面积为1，计算各峰面积的相对比值，进行相似度评价。其中，所述的供试品取样量为0. 10-0. 50g，超声提取时间30-45分钟。其中，所述的色谱柱为ACQUITY UPLC HSST3柱，流速0. 4mL/min,柱温40°C，进样量2 μ L ；或所述的色谱柱为ACQUITY UPLC C18柱，流速0. 3mL/min,柱温45°C，进样量 5 μ L0其中，所述提取离子色谱图的建立根据各峰分子离子的质核比从总离子流色谱图中提取获得，23个共有峰的质核比(m/z)分别为峰1，m/z 305 ；峰2，m/z 549 ；峰3，m/ ζ 463;峰 4，m/z 549;峰 5，m/z 549;峰 6，m/z 477;峰 7，m/z 347;峰 8，m/z 447;峰 9，m/ ζ 447 ；峰 10，m/z 477 ；峰 11，m/z 431 ；峰 12，m/z 461 ；峰 13，m/z 477 ；峰 14，m/z 447 ； 峰 15，m/z 461 ；峰 16，m/z491 ；峰 17，m/z 271 ；峰 18，m/z 271 ；峰 19，m/z 285 ；峰 20，m/z 315;峰 21，m/z 375;峰 22，m/z 285;峰 23，m/z 315 ；其中峰 8 为黄芩苷。其中，所述共有峰的分子式表征应用飞行时间质谱测定了标准指纹图谱中各峰的精确质量，计算各峰的分子式分别如下峰1，C15H12O7 ；峰2，C26H28O13 ；峰3，C21H18O12 ；峰 4，C26H28O13 ；峰 5，C26H28O13 ；峰 6，C22H20O12 ；峰 7，C17H14O8 ；峰 8，C21H18O11 ；峰 9，C21H18O11 ；峰 10，C22H20O12 ；峰 11，C21H18O10 ；峰 12，C22H20O11 ；峰 13，C22H20O12 ；峰 14，C21H18O11 ；峰 15，C22H20O11 ；峰 16，C23H22O1本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：刘树民，闫广利，柳长凤，
申请(专利权)人：刘树民，
类型：发明
国别省市：
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