共价双抗体及其用途制造技术

本发明专利技术涉及双抗体分子，及其在治疗包括免疫病症、传染病、中毒和癌症的多种疾病和病症中的用途。本发明专利技术的双抗体分子包含两条多肽链，其缔合形成可识别相同或不同抗原上的相同或不同表位的至少两个表位结合位点。另外，抗原可来自相同或不同分子。双抗体分子的单独多肽链可经由非肽键的共价键共价结合，诸如但不限于位于各多肽链中的半胱氨酸残基的二硫键。在具体实施方案中，本发明专利技术的双抗体分子还包含Ｆｃ区，这允许抗体样的功能性被加工到分子中。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】共价双抗体及其用途本申请要求美国专利申请系列第60/671，657号(2005年4月15日提交；期满)； 11/409, 339 号(2006 年 4 月 17 日提交；待审)；PCT/US06/014481 号(2006 年 4 月 17 日提交；期满)；⑶/树5，523号(2OO7年6月2I日提交；期满)，61/019，051号(2OO8年1月4 日提交；期满)；12/138，867 号(2008 年 6 月 13 日提交，待审)，PCT/US08/066957 号(2008 年6月13日提交，待审)，61/139，352号(2008年12月19日提交，待审)，61/156，035号 (2009年2月27日提交，待审)和61/256，779号(2009年10月30日提交；待审)的权益， 所有这些申请均通过弓I用整体并入本文。1.专利
本专利技术涉及另外称为“双亲和力重定向试剂”(“DART”)的双抗体分子及其在多种疾病和病症的治疗中的用途，所述疾病和病症包括免疫病症和癌症。本专利技术的双抗体分子包含至少两条多肽链，其缔合形成可识别相同或不同表位的至少两个表位结合位点。另外，表位可来自相同或不同的分子，或位于相同或不同的细胞上。双抗体分子的单独多肽链可经由非肽键的共价键共价结合，诸如但不限于位于每个多肽链中的半胱氨酸残基形成二硫键(disulfide bonding)。在具体实施方案中，本专利技术的双抗体分子还包含Fc区，这允许抗体样的功能性被加工到分子中。2.
技术介绍
共价双抗体的设计是基于单链Fv构建体(scFv) (HoiIiger等人 (1993) “ iDiabodies' Small Bivalent And Bispecific Antibody Fragments,( ‘双抗体，小的二价和双特异性抗体片段)“Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90 :6444-6448 ；通过引用整体并入本文)。在完整的未修饰IgG中，VL结构域和VH结构域分别位于各自的多肽链即轻链和重链上。抗体轻链与抗体重链的相互作用，尤其是VL结构域与VH结构域的相互作用形成抗体的表位结合位点之一。相反，scFv构建体包括单条多肽链中包含的抗体的VL结构域和VH结构域，其中各结构域被长度足以允许这两个结构域自组装为功能性表位结合位点的柔性接头所间隔。当由于接头长度不足(少于约12氨基酸残基)而不能自组装时，两个scFv构建体彼此相互作用来形成二价的分子，一条链的VL与另一条链的VH缔合(综述于 Marvin 等人(2005)"Recombinant Approaches To IgG-Like Bispecific Antibodies, (IgG样双特异性抗体的重组方法广，Acta Pharmacol. Sin. 26 :649-658)。而且，已显示向构建体C端加入半胱氨酸残基允许形成多肽链的二硫键，稳定所得的二聚体而不干扰二价分子的结合特征(参见例如，Olafsen 等人(2004) "Covalent disulfide-Linked Anti-CEA Diabody Allows Site-Specific Conjugation And Radiolabeling For Tumor Targeting Applications (共价二硫键连接的抗CEA双抗体允许用于肿瘤靶向应用的位点特异性轭合和放射性标记)”Prot. Engr. Des. Sel. 17 :21-27)。进一步地，当选择具有不同特异性的VL 结构域和VH结构域时，可构建不仅二价而且双特异性的分子。二价双抗体具有广泛的应用，包括治疗和免疫诊断。双效价允许在各种应用中设计和构造双抗体的极大灵活性、对多聚抗原提供增强的亲合力、交联不同抗原、并取决于两种靶抗原的存在而定向靶向至特定细胞类型。由于效价增加、低解离速率和从循环快速清除(对于在 50kDa或低于 50kDa的小尺寸的双抗体)，本领域已知的双抗体分子还已显示在肿瘤成像领域中的特别用途(Fitzgerald等人(1997) “ImprovedTumour Targeting By Disulphide Stabilized Diabodies Expressed In Pichia pastoris ( 过在巴斯德毕赤酵母中表达的二硫化物稳定的双抗体改进肿瘤靶向)”ftOtein Eng. 10 :1221)。特别重要的是交联不同细胞，例如交联细胞毒性T细胞与肿瘤细胞(Maerz等人(198 "Hybrid Antibodies Can Target Sites For Attack By T Cells (杂合抗体可靶向被T细胞攻击的位点)"Nature 314 :6沘_631，和 Holliger 等人(1996) "Specific Killing Of Lymphoma Cells By Cytotoxic T-Cells Mediated By A Bispecific Diabody(双特异性双抗体介导细胞毒性T细胞特异性杀伤淋巴瘤细胞)"Protein Eng. 9 :299-305)。双抗体表位结合结构域还可能针对任何免疫效应细胞的表面决定簇，诸如T淋巴细胞、自然杀伤(NK)细胞或其他单核细胞上表达的⑶3、⑶16、⑶32或⑶64。许多研究中，还发现结合于效应细胞决定簇如Fc γ受体(Fe YR)的双抗体活化效应细胞(Holliger等人(1996)"Specific Killing Of Lymphoma Cells By Cytotoxic T-Cells Mediated By A Bispecific Diabody(双特异性双抗体介导细胞毒性T细胞特异性杀伤淋巴瘤细胞)'Irotein Eng. 9 :299-305 ；Holliger 等人(1999)"Carcinoembryonic Antigen (CEA)-Specific T-cell Activation In Colon Carcinoma Induced By Anti_CD3x Anti-CEA Bispecific Diabodies And B7x Anti-CEA Bispecific Fusion Proteins (结肠癌中抗CD3x抗CEA双特异性双抗体和B7x抗CEA双特异性融合蛋白诱导癌胚抗原(CEA)-特异性T细胞活化)” Cancer Res. 59 :2909-2916)。 通常，效应细胞活化被结合抗原的抗体与效应细胞经由Fc-Fc γ R相互作用而结合所触发； 因此，在这方面，本专利技术的双抗体分子可以展现Ig样功能性，而不论它们是否包含Fc结构域(如，在本领域已知的或本文示例的任何效应物功能测定(如，ADCC测定)中所检测的)。通过交联肿瘤细胞与效应细胞，双抗体不仅将效应细胞带到肿瘤细胞附近，而且导致有效的肿瘤杀伤(参见例如，Cao等人Q003) "Bispecific Antibody Conjugates In Theapeutics (治疗学中的双特异性抗体轭合物)”Adv. Drug. Deliv. Rev. 55 :171-197本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种双抗体分子，所述双抗体分子包含第一多肽链和第二多肽链，所述第一多肽链包括（ｉ）包含对第一表位特异性的第一免疫球蛋白的轻链可变结构域（ＶＬ１）的结合区的第一结构域，（ｉｉ）包含对第二表位特异性的第二免疫球蛋白的重链可变结构域（ＶＨ２）的结合区的第二结构域，和（ｉｉｉ）包含Ｆｃ结构域或其部分的第三结构域，所述第一结构域与所述第二结构域共价连接以使所述第一结构域与所述第二结构域不缔合形成表位结合位点；所述第二多肽链包括（ｉ）包含所述第二免疫球蛋白的轻链可变结构域（ＶＬ２）的结合区的第四结构域，（ｉｉ）包含所述第一免疫球蛋白的重链可变结构域（ＶＨ１）的结合区的第五结构域，和（ｉｉｉ）包含Ｆｃ结构域的第六结构域，所述第四结构域与所述第五结构域共价连接以使所述第四结构域与所述第五结构域不缔合形成表位结合位点；其中所述第一结构域与所述第五结构域缔合形成结合所述第一表位的第一结合位点（ＶＬ１）（ＶＨ１）；其中所述第二结构域与所述第四结构域缔合形成结合所述第二表位的第二结合位点（ＶＬ２）（ＶＨ２）；并且其中：（１）所述第二结构域和所述第三结构域；或（２）所述第五结构域和所述第六结构域；通过间插的多肽接头互相连接，所述多肽接头具有选自由ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２７８－２９８组成的组的序列。...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：莱斯利·S·约翰逊，
申请(专利权)人：宏观基因有限公司，
类型：发明
国别省市：US