免疫分析方法及用于该方法的试剂技术

提供能够使免疫分析法中的测定区域扩大的新型方法。本发明专利技术的免疫分析方法包含使聚氧乙烯烷基醚硫酸盐及聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯于反应体系内共存。通过本发明专利技术的方法，特别是空白测定值的偏差(标准偏差)得以抑制，测定值稳定。由此，即便是在以前的免疫分析方法中难以测定的低浓度区域，测定值也能获得显著差异，从而提高低浓度区域的测定精度。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及用于低浓度样品测定的新型免疫分析方法及用于该方法的试剂。
技术介绍
免疫学分析方法通过在血清、血浆、尿等的临床检查中使用自动分析装置而简便、 迅速地进行测定，因此得到广泛普及。为了扩大免疫学分析法的用途，要求比现有的试剂低的低值区域的检出灵敏度及可靠性。在免疫学分析试剂中添加表面活性剂的方法虽然为已知，但多数是作为避免基质的影响等控制反应性的方法或放大吸光度变化量的方法而使用(参照专利文献1、2)。扩大免疫学分析试剂的可测定区域的方法有提高测定区域的检出上限的方法、 及降低测定区域的检出下限的方法。为了降低免疫学分析试剂的可测定区域的检出下限而实现高灵敏度化，有增加试剂中所含的致敏粒子或抗体或者抗原的量来提高低值区域的灵敏度的方法。但当提高低值区域的灵敏度而再现性仍差时，则得不到低值的精度。当使用反应性高的成分以便提高低值区域的灵敏度时，存在以下情况试剂的稳定性降低，由于自身凝集而在试剂保存中进行凝集反应，和引起非特异性凝集而即便是在空白样品中也进行凝集反应。当提高低值区域的灵敏度时，例如在测定吸光度变化的自动分析装置中，由于对吸光度变化量设定了上限，因此高值区域的灵敏度受到限制，存在得不到宽的测定区域的情况。在欲降低测定区域的检出下限时，由于会产生如上所述的问题，因此难以扩大可测定区域。现有技术文献专利文献1 日本专利特开2005-241415号公报专利文献2 日本专利特开2006-U6166号公报。
技术实现思路
因此，本专利技术的目的是提供能够使免疫分析法中的测定区域扩大的新型方法。本申请专利技术者进行努力研究，结果发现，通过在免疫分析时使聚氧乙烯烷基醚硫酸盐及聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯于反应体系内共存，可以抑制空白测定值的偏差从而空白测定值也降低，并且能够提高受检物质在低浓度区域中的测定精度，从而完成了本申请专利技术。即，本专利技术提供免疫分析方法，其包含使聚氧乙烯烷基醚硫酸盐及聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯于反应体系内共存。另外，本专利技术提供样本中标记蛋白质的测定方法，其通过上述本专利技术的免疫分析方法进行。并且，本专利技术提供使通过免疫分析得到的测定值稳定的方法，其包含在免疫分析方法中使聚氧乙烯烷基醚硫酸盐及聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸3酯于反应体系内共存。并且，本专利技术提供免疫分析试剂，其包含聚氧乙烯烷基醚硫酸盐及聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯。并且，本专利技术提供免疫分析试剂盒，其包含上述本专利技术的免疫分析试剂。并且，本专利技术提供免疫分析用测定值稳定剂，其包含聚氧乙烯烷基醚硫酸盐及聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯。根据本专利技术，提供了在免疫分析中能够提高受检物质在低浓度区域中的测定精度的新型方法。根据本专利技术的方法，通过仅将规定的物质添加至反应体系中，特别是空白测定值的偏差(标准偏差)得到抑制，使测定值稳定。由此，即便在以前的免疫分析方法中难以测定的低浓度区域，测定值也获得显著差异，低浓度区域的测定精度得到提高。本专利技术对于样本中微量存在的物质的微量定量有利。附图说明图1是表示本专利技术的实施例及比较例的免疫凝集法中测定试剂添加后的时间 (秒)和吸光度变化的关系的图。具体实施例方式本专利技术的特征是，在聚氧乙烯烷基醚硫酸盐及聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯的存在下进行免疫分析。另外，本说明书中的％只要无特别说明，则为质量基准(W/V/。)。另外， “测定”的情况包括检出、定量及半定量。聚氧乙烯烷基醚硫酸盐如果是通常作为表面活性剂使用的聚氧乙烯烷基醚硫酸盐，则并无特别限定。烷基部分可以为直链也可以为支链，还可以包含1个以上的不饱和键。烷基部分也可以如烷氧基那样，为1个以上的碳被氧取代而成的惰性烷基(非活性烷基)。烷基中的一部分可以被芳基(苯基等)或卤素原子等取代。烷基部分的碳数并无特别限定，通常为广30，优选为5 20，更优选为1(Γ15。特别优选的烷基部分为饱和或者包含多个以下不饱和键的直链状碳链，其具体例子可以列举月桂基等。硫酸盐部分只要是1价以上的盐即可，其具体例子可以列举钠盐、钾盐等碱金属盐，钙盐、镁盐等碱土金属盐，铵盐、胺盐等，适合使用三乙醇胺盐和钠盐。聚氧乙烯烷基醚硫酸盐的分子中的氧乙烯单元的数量并无特别限定，通常为广10左右ο聚氧乙烯烷基醚硫酸盐可以为单一组成，也可以为2种以上的混合物。聚氧乙烯烷基醚硫酸盐可以优选使用作为表面活性剂销售的市售品。聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯如果是通常作为表面活性剂使用的聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯，则并无特别限定。脂肪酸的烷基部分可以为直链也可以为支链，还可以包含1个以上的不饱和键。脂肪酸的烷基部分也可以如烷氧基那样，为1个以上的碳被氧取代而成的惰性烷基。烷基中的一部分可以被卤素原子等取代。烷基部分的碳数并无特别限定，通常为广30，优选为5 25，更优选为10 20。特别优选的烷基部分为饱和或者包含多个以下的不饱和键的直链或支链碳链，如果列举优选作为脂肪酸部分的具体例子，则可以列举油酸、硬脂酸、月桂酸、棕榈酸等。聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯的分子中的氧乙烯单元的数量并无特别限定，通常为广100左右，优选为5飞0左右。聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯的组成可以为单一组成，也可以为2种以上的混合物。组成的具体例可以列举聚氧乙烯山梨糖醇酐单油酸酯和聚氧乙烯山梨糖醇酐单硬脂酸酯等，但并不限定于这些。聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯可以优选使用作为表面活性剂销售的市售品。对于聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯，HLB值为1(Γ20、数均分子量为100(Γ50000的聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯的添加效果显著，且适合使用。本专利技术的分析方法中，只要在从抗原抗体反应开始至抗原抗体反应量的检出、定量结束为止的任一阶段，使聚氧乙烯烷基醚硫酸盐及聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯于反应体系内共存即可，优选在从抗原抗体反应开始至检出、定量为止的期间共存。因此，聚氧乙烯烷基醚硫酸盐及聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯可以优选在抗原抗体反应开始前或开始的同时添加到反应体系内。例如可以在稀释样本时添加，也可以在将抗体或者抗原和样本混合时添加。另外，可以使免疫分析所用的各种试剂事先含有聚氧乙烯烷基醚硫酸盐及聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯。例如可以使稀释样本的缓冲液、包含抗体或者抗原的试剂等中事先含有这些物质。在免疫凝集时，例如可以使包含固定(致敏)了抗体或者抗原的不溶性载体粒子(致敏粒子)的试剂含有聚氧乙烯烷基醚硫酸盐及聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯。另外，在进行B/F分离操作时，会失去在抗原抗体反应时共存的聚氧乙烯烷基醚硫酸盐及聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯，因此优选使用包含聚氧乙烯烷基醚硫酸盐及聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯的缓冲液作为洗涤液等适当地将聚氧乙烯烷基醚硫酸盐及聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯追加至反应体系内。反应体系内的聚氧乙烯烷基醚硫酸盐的浓度优选为0 . 00 0 59Γ0. 25%，更优选为0.01259Γ0.25%。另外，反应体系内的聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯的浓度优选为 0 . 00 0 59Π). 25%，更优选为0 . 00 0 59Π). 005%。在免疫分析试剂中事先含有聚氧乙烯烷基醚硫酸盐及聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯时，它们能够以在反应体系内的浓度达到上述浓度的方式在免疫分析试剂中含有。例如在包含致敏粒子的试剂中含有聚氧乙烯烷基醚硫酸盐及聚氧乙烯山本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．免疫分析方法，其包含使聚氧乙烯烷基醚硫酸盐及聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯于反应体系内共存。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：M加纳，
申请(专利权)人：M加纳，
类型：发明
国别省市：JP