本发明专利技术涉及表征，特别是定量，由从组织再循环到血液循环系统中的血液巨噬细胞从组织中摄取到细胞内的分子标志物的方法，其中进行下列步骤：向全血施加试剂，所述试剂抑制全血的凝集和／或凝结；从全血中选择和／或富集和／或分离出血液巨噬细胞或包含血液巨噬细胞的白细胞群体；进行所选择出的血液巨噬细胞或包含血液巨噬细胞的白细胞群体的穿孔和／或裂解，任选地，在事先进行渗透化之后；在事先对血液巨噬细胞或包含血液巨噬细胞的白细胞群体进行穿孔和／或裂解之后，定性和定量地测定非－血液巨噬细胞自身的标志物，即源自组织的分子标志物。本发明专利技术还涉及用于实施所述方法的设备。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】表征，特别是定量，由从组织再循环到血液循环系统中的血 液巨噬细胞从组织中摄取到细胞内的分子标志物的方法， 以及用于实施所述方法的分析设备本专利技术涉及根据权利要求1的前述部分的用于表征，特别是定量血液的单核白细 胞(特别是血液巨噬细胞)的被吞噬的细胞内分子标志物的方法；以及根据权利要求13的 前述部分的用于实施所述方法的分析设备。在全血中，在其表面上表达蛋白⑶14及⑶16(FcyRIII)的细胞是可检测的。 CD14是通常由单核细胞和巨噬细胞表达的细胞表面蛋白。细胞表面蛋白CD16使得细胞 能够结合IgG抗体的恒定(Fe)区，所述CD16以两种同种型存在在NK细胞、巨噬细胞 和所谓的激活的单核细胞的表面上，作为CDiea(FcYRIIIA)；和在嗜中性粒细胞上，作为 CD16b (Fe yRIIIB)。根据传统的学术观点，只有在组织中的巨噬细胞和血液的所谓的“激活的单核 细胞”各自既表达⑶14又表达⑶16。迄今为止的学术观点将血液的⑶14/⑶16-阳性 (CD14+CD16+)细胞绝对地视为“激活的单核细胞”，其(仍)未迁移到组织中，例如到发炎、 感染或肿瘤位置处(Ziegler-Heitbrock，L. ,2007. The CD14+CD16+ bloodmonocytes =Their role in infection and inflammation. J. Leukocyte Biol.81,584-592)。然而更新的发现表明，激活的单核细胞为从组织再循环到血液循环系统中的 巨噬细胞，其在其细胞内吞噬体中包含组织部分，例如上皮蛋白质，所述组织部分例如 源自发炎或肿瘤位置(Herwig，R.，Horninger, W.，Rehder，P.等人，2005. Ability of PSA-positivecirculating macrophages to detect prostatecaneer. Prostate 62, 290-298 ；Leers, M. P. G. ， Nap, M. ， Herwig, R.等 A, 2008. Circulating PSA-containing macrophages as a possible target forthe detection of prostate cancer :A three-colour/five-parameter flow cytometric study on peripheral blood samples. Am. J. Clin. Pathol. 129,649-656)。与天然的 CD 14-阳性、CD 16-阴性(CD14+CD16)单核 细胞群体不同，这些细胞具有完全分化的组织巨噬细胞的形态学特征，并且由其所包含 的(吞噬的)分子未在单核细胞中发现(Leers, Μ. P. G.，Nap, Μ.，Herwig, R.等人，2008. Circulating PSA-containing macrophages as a possible target forthe detection of prostate cancer :A three-colour/five-parameter flow cytometric study on peripheral blood samples. Am. J. Clin. Pathol. 129，649—656)。因此，在方法上，不仅为了分析性地检测，而且还为了分离和富集血液的 CD14+CD16+细胞，可设想研究作为所有CD14+细胞的亚群的CD16+细胞以及研究作为所有 ⑶16+细胞的子集的⑶14+细胞。此外，还已知，激活的单核细胞或血液巨噬细胞具有部分地弱的⑶14表 达(Ziegler-Heitbrock, L. ,2007. The CD14+CD16+ bloodmonocytes :Their role in infection and inflammation. J. Leukocyte Biol. 81，584-592)或者遭受CD14 的完全丧失 (Bazil 禾口 Strominger，1991 Shedding as a mechanism of down-modulationof CD14 on stimulated human monocytes. J. Immunol. 147,1567—1574)。在其吞噬体中细胞内地包含例如标志物蛋白PSA (前列腺特异性抗原)(其因而称 为imPSA(细胞内巨噬细胞PSA))的血液巨噬细胞的流式细胞术检测可以极其特异地和灵 敏地追踪前列腺疾病的状态，并且在这方面优于传统的对于血清中的PSA的测定(Herwig， R.，Mitteregger，D·，Djavan，B·等人，2008· Detecting prostatecancer by intracellular macrophage prostate-specific antigen (PSA) :A more specific and sensitive marker than conventionalserum total PSA.Eur. J. Clin. Invest· 38，430-437)。细胞的流式细胞术表征的基础是用经荧光染料标记的抗体来标记待检测的目标 分子(“抗原”)。为了进行分析，通过流体动力学聚焦(hydrodynamische Fokussierung) 将处于悬浮中的细胞引导经过具有适当波长的集束激光束。由此，荧光染料被激发从而以 光子的形式发射出能量，所述光子由检测仪来记录。然而，此方法的缺点在于缺乏对于所结合的抗体的量的定量能力，并因此在于缺 乏关于所检测的抗原的量的信息。另一个缺点为流式细胞仪的运行所引起的可观的仪器上 和经济上的花费。本专利技术的任务在于提出经改进的、简化的和成本低的方法以及分析设备，在其帮 助下可能定量地表征血液的单核白细胞，特别是血液巨噬细胞，包括其的被吞噬的来自组 织的分子标志物，这特别地通过表示为“质量单位/细胞数目”。根据本专利技术，通过根据权利要求1的方法以及通过根据权利要求13的设备解决了这一任务。特别地，该任务通过下述方法而得到解决，即表征，特别是定量，由从组织再循环 到血液循环系统中的血液巨噬细胞从组织中摄取到细胞内的分子标志物的方法，其中进行 下列步骤-向全血施加试剂，所述试剂抑制全血的凝集和/或凝结；-从全血中选择和/或富集和/或分离出血液巨噬细胞或包含血液巨噬细胞的白 细胞群体；-进行所选择出的血液巨噬细胞或包含血液巨噬细胞的白细胞群体的渗透化和/ 或穿孔和/或裂解；-在事先对血液巨噬细胞或包含血液巨噬细胞的白细胞群体进行穿孔和/或裂解 之后，定性和定量地测定非-血液巨噬细胞自身的标志物，即源自组织的分子标志物。一个根据本专利技术而言原则上的考虑在于，检测在血液循环系统的吞噬性单核细胞 中(即在血液巨噬细胞中)的分子标志物(例如上皮蛋白质)，其中按照根据本专利技术的方法 有利地可能进行直接的和特异性的以及定量的检测。因此，为了使得能够检测血液巨噬细胞中的分子标志物，根据本专利技术设本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．表征，特别是定量，由从组织再循环到血液循环系统中的血液巨噬细胞从组织中摄取到细胞内的分子标志物的方法，其特征在于下列步骤：－向全血施加试剂，所述试剂抑制全血的凝集和／或凝结；－从全血中选择和／或富集和／或分离出血液巨噬细胞或包含血液巨噬细胞的白细胞群体；－进行所选择出的血液巨噬细胞或包含血液巨噬细胞的白细胞群体的穿孔和／或裂解，任选地，在事先对所选择出的血液巨噬细胞或包含血液巨噬细胞的白细胞群体进行可选的渗透化之后；－在事先对血液巨噬细胞或包含血液巨噬细胞的白细胞群体进行穿孔和／或裂解之后，定性和定量地测定被吞噬的、非－血液巨噬细胞自身的标志物，即源自组织的分子标志物。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：W·布罗泽克，
申请(专利权)人：辛米德研究有限公司，
类型：发明
国别省市：AT
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