本发明专利技术通常涉及由合成的基因构建体产生的融合蛋白，所述合成的基因构建体包含来源于利什曼原虫属抗原Ｋ２６、Ｋ３９和Ｋ９的元件。所述融合蛋白在利什曼病的诊断中，特别是在诸如人和犬的动物中的内脏利什曼病的诊断中是特别有用的。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术通常涉及由合成的嵌合基因构建体产生的融合蛋白及其在利什曼病的诊 断和治疗中的用途，所述合成的嵌合基因构建体包含来自D6、K39和K9的序列。相关领域的描述利什曼原虫属(Leishmania)生物是巨噬细胞的细胞内原生动物寄生虫，其导致 人和家畜中广泛范围的临床疾病，所述家畜主要是犬。在某些感染中，该寄生虫可处于潜伏 很多年。在其他的情况中，宿主可以发展为多种形式的利什曼病中的一种。例如，该疾病 可以是无症状的或可以表现为亚临床内脏利什曼病，所述亚临床内脏利什曼病的特征为不 适、腹泻和间歇性肝肿大的轻微症状。患有亚临床或无症状疾病的患者通常具有低的抗体 滴度，这使得该疾病难以用标准技术进行检测。可选择地，利什曼病可表现为皮肤疾病，该 皮肤疾病是严重的但通常是自限的医学问题，或者利什曼病可表现为高度破坏性的不是自 限的粘膜疾病。最终并且最严重的情况下，该疾病可表现为累及脾、肝和淋巴结的急性内脏 感染，如果听任不治疗的话，该疾病通常是致死疾病。急性内脏利什曼病的症状包括肝脾肿 大、发热、白细胞减少、贫血和丙种球蛋白过多。该疾病的3种主要临床变种已知为皮肤变种、粘膜皮肤变种和内脏变种。皮肤利 什曼病可自身表现为白蛉叮咬部位的单一皮肤溃疡，感染后不久或数月后显现为弥散性损 伤。粘膜皮肤综合征以皮肤形式发展，但数月或数年后进展为口、鼻或咽的损伤。皮肤和粘 膜皮肤疾病的主要长期影响是瘢痕形成。内脏利什曼病具有3-6个月的潜伏期并且累及网 状内皮系统。内脏利什曼病的临床表现包括肝和脾的增大、发热、贫血和体重丢失。在缺乏治疗 的情况下，有症状的内脏疾病通常以死亡结束。近些年来，Hiv和引起内脏疾病的利什曼原 虫属种的共存已经导致数百双重感染的个体的病例(Berman，J. D.，(1997)Clin. Infect. Dis. 24 684)。在2000年，世界卫生组织最近估计利什曼病侵袭88个国家的人，3亿5千万 人处于染上该疾病的风险并且每年约2百万新病例。该疾病的毁灭性的影响的实例为苏丹 内脏利什曼病的最近流行，其夺去估计100，000人的生命(Seaman, J.，et al. (1996) Int. J. Epidemiol. 25:862)。如海湾战争期间亲内脏利什曼病的爆发所证实的，该疾病频繁成为军事行动中的威胁(Magill，J.，et al. (1993)N Engl J Med 328 :1383)。在世界很多地区，利什曼病是严重的问题，包括巴西、中国、东非、印度和中东地 区。该疾病在地中海地区还是地方性的，包括法国南部、意大利、希腊、西班牙、葡萄牙和北 非。在过去的20年中，利什曼病的病例数显著增加并且现在世界各地存在数百万的该疾病 的病例。每年诊断约2百万的新病例，25%的新病例是内脏利什曼病。然而，目前没有疫苗 或可行的有效治疗。利什曼病由利什曼原虫属的数个种引起。动质体目的这些单细胞生物与锥体虫有 关，锥体虫是非洲的昏睡病和南美的查加斯病的成因生物。利什曼原虫属寄生虫通常以两 种截然不同的方式存在，昆虫载体的能动的前鞭毛体和存在于哺乳动物宿主中的固定的无 鞭毛体。前鞭毛体通过受感染的遍及世界热带和温带各处的白蛉的叮咬而被传播到人。当 传递至哺乳动物宿主时，前鞭毛体感染网状内皮系统的巨噬细胞并转变为无鞭毛体。利什曼病的准确诊断常常难以实现。有利什曼原虫属的20个种感染人，包 括杜氏利什曼原虫(L. donovani)、恰氏利什曼原虫(L. chagasi)、婴儿利什曼原虫 (L. infantum)、硕大利什曼原虫(L. major)、亚马逊利什曼原虫(L. amazonensis)、巴西 利什曼原虫(L. braziliensis)、巴拿马利什曼原虫(L. panamensis)、墨西哥利什曼原虫 (L. mexicana)、热带利什曼原虫(L. tropica)和圭亚那利什曼原虫(L. guyanensis)，并且 没有明确指示利什曼原虫属感染存在的特有迹象或症状。已经使用了寄生虫检测方法，但 这些方法既不是敏感的也不是临床实用的。现有的皮肤测试通常使用整体的或分解的寄生 虫。这些测试通常是不敏感的、不可再现的并且易于与多种其他疾病交叉反应。此外，这些 测试中使用的制剂通常是不稳定的。因此，需要改进的方法用于利什曼原虫属感染的检测。例如，本领域需要更敏感的 和特异性更强的方法用于检测利什曼原虫属感染和鉴别那些可能进展为急性内脏感染的 无症状利什曼原虫属感染。本专利技术实现这些需要并且进一步提供其他相关利益。概述本专利技术通常涉及包含至少两种异源利什曼原虫属抗原的组合物、包含所述抗原的 融合多肽和编码所述抗原和融合物的多核苷酸，其中所述利什曼原虫属抗原选自K39、K26 和/或K9。本专利技术还涉及在利什曼病的诊断、治疗和预防中使用本专利技术的多肽和多核苷酸 的方法。本专利技术的抗原，当被联合使用和/或作为如本文所述的融合多肽或多核苷酸使用 时，提供改进的和预想不到的优势，并且在利什曼病诊断和疫苗开发方面是特别有用的。因此，根据一个实施方案，本专利技术提供分离的融合多肽，其包含两个或更多个选自 K26.K39和K9的利什曼原虫属抗原或其免疫原部分或变体。在相关实施方案中，分离的融 合多肽包含至少全部三种以上的利什曼原虫属抗原，其中至少一种抗原分离自杜氏利什曼 原虫。在具体实施方案中，本专利技术的融合多肽包含以下包含至少以6的142-267位残基 (SEQ ID NO 5)的第一免疫原部分；包含至少K39的2110-2343位残基(SEQ ID NO 6)的 第二免疫原部分；和包含至少K9的1-399位残基(SEQ ID NO 7)的第三免疫原部分。在更 具体的实施方案中，本专利技术的融合多肽包含如SEQ ID NO :8的10-262位氨基酸残基所示的 氨基酸序列。在某些实施方案中，所述融合多肽包含MHHHHHHTS(SEQ ID NO :21)的N末端 氨基酸序列。在某些其他实施方案中，所述融合多肽包含如SEQ ID NO :8所示的氨基酸序列。在多个实施方案中，本专利技术提供编码本专利技术的融合多肽的分离的多核苷酸。本专利技术还提供与本文各处所述的融合多肽特异性地结合的分离的抗体或抗原结 合片段。在另一实施方案中，本专利技术考虑到药物组合物，其包含以下与生理学可接受的载 体的组合本专利技术的融合多肽，或识别本专利技术的融合多肽的分离的抗体或抗原结合片段，或 编码本专利技术的融合多肽的多核苷酸。在相关实施方案中，本专利技术考虑到疫苗组合物，其包含以下与非特异性免疫应答 增强剂的组合本专利技术的融合多肽，或识别本专利技术的融合多肽的分离的抗体或抗原结合片 段，或编码本专利技术的融合多肽的多核苷酸。在具体实施方案中，本专利技术提供在选自血清、血液和唾液的生物样品中检测无症 状或亚临床利什曼原虫属感染的方法，所述方法包括使生物样品与融合多肽接触，所述融 合多肽包含两个或更多个选自K26、K39和K9的利什曼原虫属抗原或其免疫原部分；并在 所述生物样品中检测与所述融合多肽结合的抗体的存在，从而检测所述生物样品中无症状 亚临床或活动性利什曼原虫属感染。在更具体的实施方案中，检测生物样品中无症状或亚 临床利什曼原虫属感染的方法利用包含以下的融合多肽包本文档来自技高网...
【技术保护点】
分离的融合多肽，其包含两个或更多个选自Ｋ２６、Ｋ３９和Ｋ９的利什曼原虫属（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ）抗原或其免疫原部分或变体，其中所述抗原中至少一个分离自杜氏利什曼原虫（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ ｄｏｎｏｖａｎｉ）。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】US61/078,2552008年7月3日1.分离的融合多肽，其包含两个或更多个选自K26、K39和K9的利什曼原虫属 (Leishmania)抗原或其免疫原部分或变体，其中所述抗原中至少一个分离自杜氏利什曼原 虫(Leishmania donovani)02.如权利要求1所述的融合多肽，其中所述融合多肽包含包含SEQIDN0:5的K26序 列、包含SEQ ID NO 6的K39序列和包含SEQ ID NO 7的K9序列。3.如权利要求2所述的融合多肽，其中所述融合多肽包含如SEQIDNO 8的10-262位 所示的氨基酸序列。4.如权利要求1-3中任一项所述的融合多肽，其中所述融合多肽还包含 MHHHHHHTS (SEQ ID NO 21)的N末端氨基酸序列。5.分离的多核苷酸，其编码权利要求1-4中任一项所述的融合多肽。6.分离的抗体或抗原结合片段，其特异性地结合权利要求1-4中任一项所述的融合多肽。7.药物组合物，其包含(a)权利要求1所述的融合多肽，或(b)权利要求6所述的分离的抗体或抗原结合片段，或(c)权利要求5所述的多核苷酸；和 生理学可接受的载体。8.疫苗，其包含(a)权利要求1所述的融合多肽，或(b)权利要求6所述的分离的抗体或抗原结合片段，或(c)权利要求5所述的多核苷酸；和 非特异性免疫应答增强剂。9.检测生物样品中无症状或亚临床利什曼原虫属(Leishmania)感染的方法，所述生 物样品选自血清、血液和唾液，所述方法包括(a)使生物样品与融合多肽接触，所述融合多肽包含两个或更多个选自K26、K39和K9 的利什曼原虫属抗原或其免疫原部分或变体；以及(b)检测所述生物样品中与所述融合多肽结合的抗体的存在，从而检测所述生物样品 中无症状或亚临床利什曼原虫属感染。10.如权利要求9所述的方法，其中所述融合多肽包含SEQIDNOs :5-7中所示的氨基 酸序列。11.如权利要求10所述的方法，其中所述融合多肽包含如SEQIDNO 8的10-262位所示的氨基酸序列。12.如权利要求11所述的方法，其中所述融合多肽还包含MHHHHHHTS(SEQ ID NO 21) 的N末端氨基酸序列。13.如权利要求9所述的方法，其中所述融合多肽与固体支持物结合。14.如权利要求10所述的方法，其中所述固体支持物包括硝化纤维、胶乳或塑料材料。15.如权利要求9所述的方法，其中检测步骤包括(a)从固体支持物中去除未结合的样品；(b)将检测试剂添加到固体支持物；以及(C)相对于预定截断值的水平检测与固体支持物结合的检测试剂水平。16.鉴定受可能发展为急性内脏利什曼病的无症状或亚临床内脏利什曼病侵袭的患者 的方法，所述方法包括(a)使获自受无症状或亚临床内脏利什曼病侵袭的患...
【专利技术属性】
技术研发人员：阿贾伊·巴蒂亚，
申请(专利权)人：传染性疾病研究院，
类型：发明
国别省市：US
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