可制成静息细胞的重复发酵生产聚苹果酸的方法技术

本发明专利技术涉及一种可制成静息细胞的连续发酵生产聚苹果酸的方法，实施步骤如下：（1）斜面菌种制备；（2）种子液制备；（3）上述种子液用于接种至5L无菌发酵罐中发酵；（4）发酵前期不控制pH，直至有菌丝球出现后连续流加NaOH控制发酵液pH为5.0-5.5；（5）发酵55-60h后，发酵液中的葡萄糖浓度为8-10g/L时，停止发酵，重新添加新鲜培养基，进行重复发酵；（6）静息细胞制备；（7）采用相同的发酵方法进行静息细胞法发酵；（8）发酵液用截留分子量为6000Da的中空纤维膜过滤，加入等体积的无水乙醇沉淀，烘干称重；聚苹果酸的产量为50-57g/L。该方法可有效减少发酵过程中的非最优经济阶段，达到了缩短发酵时间，提高设备利用率，降低产品生产成本的目的。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种发酵生产聚苹果酸的方法，特别涉及一种。
技术介绍
聚苹果酸(polymalic acid, PMLA)是一种具有优良生物相容性、生物可降解性和生物可吸收性的聚合物，最初由Siimada等于1969年研究一种圆弧青霉菌时发现。它作为一种水溶性脂肪族聚酯，具有高度水溶性、化学衍生性，聚苹果酸可在水溶液中自发或酶促降解生成小分子L-苹果酸，该L-苹果酸单体可被人体吸收并无任何毒副作用。聚苹果酸分解和燃烧后，最终产物是二氧化碳和水，可被植物吸收，对环境无毒无害。聚苹果酸的诸多特性使其在医学和药学等领域的研究中得到日益广泛的关注。理论研究表明，聚苹果酸及其衍生物可望作为手术缝合线、组织工程支架材料、药物控制释放体系等在生物医药领域获得重要应用。目前已经可以用化学合成或从特定的微生物中得到这种高分子。国内利用微生物发酵生产聚苹果酸一般采用的是一步发酵法或补料发酵法，生产周期为9天，最高产量为 37g/L ；日本采用静息细胞法发酵，历时5天，最高产量是80g/L。由于生产成本非常高，合成的聚苹果酸和天然的聚苹果酸还是比较难得到，因此提供一种高效的、低成本的，是该
科研人员本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种可制成静息细胞的重复发酵生产聚苹果酸的方法，其特征在于具体实施步骤如下：（１）斜面菌种制备：将出芽短梗霉ＴＪＺＫＢＩＯ１５３接种到无菌斜面上，在２８－３０℃恒温培养４８－６０ｈ，直至出现黑色孢子；（２）种子液制备：挑取一环出芽短梗霉ＴＪＺＫＢＩＯ１５３斜面菌种接入种子培养基，在２８－３０℃培养４８－６０ｈ后，用无菌纱布过滤菌丝体获得滤液即种子液；（３）发酵培养基灭菌：５Ｌ发酵罐中加入２．５Ｌ发酵培养基，１１５℃、１５ｍｉｎ灭菌后冷却至２８－３０℃；（４）发酵：发酵前期不控制发酵液ｐＨ，直至有菌丝球出现后连续流加ＮａＯＨ控制发酵液的ｐＨ值至５．０－５．５，控制整个发酵过程中的温度为２８－...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘云，徐勇虎，李睿颖，国华，胡娅君，王永乐，王晓琼，范婷，
申请(专利权)人：天津实发中科百奥工业生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：12