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一种快速微量测定糖化酶活力的方法技术

技术编号:6972600 阅读:927 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
本发明专利技术提供一种快速微量测定糖化酶活力的方法,取A、B两支EP管,分别加入可溶性淀粉溶液和醋酸缓冲液混均;在B管中加入待测酶液混均反应后,向A、B两管中加NaOH混均后冷却,A管中补加热变性的酶液作为空白对照;另取两只EP管,分别加入去离子水,吸取上述A、B两管溶液分别加入到两只EP管内,加入DNS溶液,沸水浴反应取出,冷却后加入到96孔板内,加去离子水混合均匀后用酶标仪在540nm处测定其OD值,根据葡萄糖与OD值标准曲线即可计算其还原糖含量。本发明专利技术解决了现有糖化酶检测方法存在的检测程序烦琐、耗时较长或需要稀释很高倍数,造成误差较大等缺欠。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术是涉及生物化学分析方法及微生物菌株筛选方法,具体的说是,属于化学检测

技术介绍
糖化酶全称是葡萄糖淀粉酶(GlucoamylaseEC. 3. 2. 1. 3)又称为淀粉α -1,4葡萄糖苷酶,Y淀粉酶。在发酵行业中主要用作将淀粉转化为葡萄糖,所以习惯上被称为糖化酶。糖化酶不仅用于酒类和酒精生产及制取葡萄糖浆,还广泛地用于抗生素、氨基酸、有机酸的生产。在糖化酶生产及糖化酶菌株筛选过程中需要测定糖化酶活力,而国标法测定糖化活力,是采用硫代硫酸钠滴定法测定酶解产物中还原糖含量,需要体系较大,所用试剂需要标定,程序烦琐,耗时较长,测定一个样品需要一个小时,而采用DNS法直接测定,需要稀释很高倍数,造成误差较大,这对于高通量测定糖化酶活力以及糖化酶的性质研究是不利的。
技术实现思路
本专利技术提供,其目的是解决了现有糖化酶检测方法存在的检测程序烦琐、耗时较长或需要稀释很高倍数,造成误差较大等缺欠。本专利技术的快速微量测定糖化酶活力的方法,包括以下步骤1)96孔板内葡萄糖标准曲线的制备取烘干至恒重的葡萄糖lg,用去离子水溶解,容量瓶定容至IOOmL,制备lOmg/mL葡萄糖储本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种快速微量测定糖化酶活力的方法,包括以下步骤:1)96孔板内葡萄糖标准曲线的制备取烘干至恒重的葡萄糖1g,用去离子水溶解,容量瓶定容至100mL,制备10mg/mL葡萄糖储备液;分别将其稀释成1mg/mL、2mg/mL、3mg/mL、4mg/mL、5mg/mL、6mg/mL、7mg/mL、8mg/mL葡萄糖溶液;取8只EP管,分别加入100μl去离子水,再分别加入上述不同浓度的葡萄糖稀释液50μl,最后加入200μlDNS溶液,沸水浴准确反应5min,迅速取出,放入冰水浴中2min, 从每只反应管内取出20μl,加入到96孔板内,再加入250μl去离子水,用枪头吹打几次,混合均匀后用酶标...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:相宏宇谢秋宏刘洋孟兆丽唐芳荣徐云
申请(专利权)人:吉林大学
类型:发明
国别省市:82

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