本发明专利技术涉及花生壳高效液相色谱指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱。首先，取花生壳粉末，加入甲醇超声提取，并将上清液用微孔滤膜过滤，滤液作为供试品溶液；然后进行高效液相色谱分析，采用以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱；采用梯度洗脱，流动相为0.2%的乙酸水溶液-甲醇；检测波长294±2nm；柱温35℃，精密吸取供试品溶液注入液相色谱仪，按照高效液相色谱法测定，得到指纹图谱。通过对26个品种花生壳的HPLC指纹图谱比对，确定其共有指纹特征，得到标准指纹图谱，本发明专利技术花生壳提取物的指纹图谱测定方法简便，易于掌握，可用于花生壳提取物的质量控制，确保花生壳提取物相关产品的有效性、安全性、稳定性和均一性。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及花生壳指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱，具体涉及花生壳高效液相色谱指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱。
技术介绍
花生壳是豆科落花生属植物落花生(Arachis hypogaea L.)果实的干燥荚壳，性淡、涩、平，具有敛肺止咳的功效，在民间常用于久咳气喘，咳痰带血。现代研究表明，花生壳中以木犀草素为代表的黄酮类化合物具有降血压、降血脂、扩张冠状动脉、抗氧化、镇咳、祛痰平喘、抗菌抗炎、增强免疫和抗肿瘤等多种药理活性。在医药、工业、农业、保健食品领域有广阔的应用前景。公开文献报道，花生壳制剂多以其主要活性成分木犀草素或者木犀草素和圣草酚的含量作为质量控制指标。然而，单一的某种成分含量测定不能完全反映中草药的药效作用。现有的技术中，尚未见有关于花生壳的高效液相色谱指纹图谱建立方法及其标准指纹图谱的文献报道，因此，需要建立一种制作花生壳提取物高效液相指纹图谱的方法，并建立一种标准指纹图谱以供参考对照。
技术实现思路
为了解决上述的技术问题，本专利技术提供了一种花生壳高效液相色谱指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱，该方法用于花生壳中活性成分提取过程中的质量控制，能确保花生壳提取物相关产品的有效性、安全性、稳定性和均一性。本专利技术是通过以下技术方案解决上述的技术问题的 花生壳提取物的高效液相指纹图谱建立方法，包括下述的步骤a 待测样品溶液的制备将花生壳去杂、清洗、干燥后粉碎并过40 80目筛，称取过筛后的花生壳粉末8 12g，置于具塞容器中，加入250 350mL甲醇，超声提取30 50min,以3000 4000r/min的转速离心5 15min，上清液用0. 22 μ m或0. 45 μ m的微孔滤膜过滤，得到的滤液即样品溶液；b 液相色谱分析高效液相色谱采用的色谱柱为ZORBAX SB-C18，4. 6 X 250mm, 5 μ m ； 流动相为0. 乙酸水溶液-甲醇；采用梯度洗脱方式Omin — 3min — 5min —3 Omin — 60min — 75min,甲醇 5% — 5% — 30% — 50% 80% — 80% ；流速 1. OmL/min ； 检测波长294士2nm ；柱温35°C，在此条件下分析样品溶液，得到花生壳的液相指纹图谱；c 标准指纹图谱的确定测定了沈个品种花生壳样品高效液相色谱指纹图谱并进行比较，得到由其共有峰构成的花生壳高效液相色谱标准指纹图谱，该指纹图谱具有的共有特征峰有12个，保留时间分别为:10. 513min、12. 260min、12. 943min、14. 363min、 19.664min>26.622min>34.712min>37.487min>48. 363min>49. 475min>50. 440min> 59. 196min，这些共有特征峰构成了花生壳的液相指纹特征，是花生壳的标准指纹图谱。以上的步骤a中，将花生壳去杂、清洗、干燥后粉碎并过60目筛，称取过筛后的花生壳粉末10g，置于具塞容器中，加入300mL甲醇，超声提取40min，以3000r/min的转速离心lOmin，上清液用0. 45 μ m的微孔滤膜过滤，得到的滤液即样品溶液。本专利技术保护的还包括采用以上的方法建立的花生壳高效液相色谱指纹图谱。按照本专利技术提供的花生壳高效液相色谱指纹图谱建立方法，对沈个品种花生壳建立了液相指纹图谱，通过分析比较，确定了 12个共有特征峰，保留时间分别 % :10. 513minU2. 260minU2. 943minU4. 363minU9. 664min>26. 622min>34. 712min> 37. 487min、48. 363min、49. 475min、50. 440min、59. 196min，这些共有特征峰构成了花生壳的液相指纹特征，作为花生壳的标准指纹图谱。本专利技术具有如下显著的优点(1)将花生壳提取物作为一个整体对待，通过比较其共有特征峰可以找出不同品种间花生壳的细微差异；(2)供试品制作简便，色谱条件容易实现；(3)方法简便、精密度高，而且其稳定性和重现性较好，本专利技术采用的检测波长出峰较多，反应的信息完全；(4)适用于花生壳提取物的质量控制，确保花生壳提取物相关产品的有效性、安全性、 稳定性和均一性。附图说明图1是本专利技术提供的花生壳提取物标准指纹图谱，图中从左到右分别标出了其共有特征峰1至12号；图2是沈个品种花生壳提取物的液相指纹图谱，图中Sl至S^分别为沈个品种花生壳的液相指纹图谱编号，R为标准指纹图谱。具体实施例方式下面结合附图和具体实施例对本专利技术的一种花生壳高效液相色谱指纹图谱测试方法作进一步说明，以便本领域的技术人员更了解本专利技术，但并不以此限制本专利技术。待测样品溶液的制备将花生壳去杂、清洗、干燥后粉碎并过60目筛，称取过筛后的花生壳粉末10g，置于具塞容器中，加入300mL甲醇，超声提取40min，以3000r/min的转速离心lOmin，上清液用0. 45 μ m的微孔滤膜过滤，得到的滤液即样品溶液。液相色谱分析高效液相色谱采用的色谱柱为ZORBAX SB-C18,4. 6 X 250mm, 5 μ m ； 流动相为0. 乙酸水溶液-甲醇；采用梯度洗脱方式Omin — 3min — 5min - 30min — 60min — 75min,甲醇 5% — 5% — 30% — 50% — 80% — 80% ；流速 1. OmL/min ；检测波长 294士2nm ；柱温35°C，在此条件下分析样品溶液，得到花生壳的液相指纹图谱；标准指纹图谱的确定测定了 26个品种花生壳样品高效液相色谱指纹图谱并进行比较，得到由其共有峰构成的花生壳高效液相色谱标准指纹图谱，该指纹图谱具有的共有特征峰有 12 个，保留时间分别为10. 513min、12. 260min、12. 943min、14. 363min、19. 664min、 26. 622min、34. 712min、37. 487min、48. 363min、49. 475min、50. 440min、59. 196min,这些共有特征峰构成了花生壳的液相指纹特征，是花生壳的标准指纹图谱。本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种花生壳高效液相色谱指纹图谱建立方法，包括下述的步骤：ａ 待测样品溶液的制备：将花生壳去杂、清洗、干燥后粉碎并过４０～８０目筛，称取过筛后的花生壳粉末８～１２ｇ，置于具塞容器中，加入２５０～３５０ｍＬ甲醇，超声提取３０～５０ｍｉｎ，以３０００～４０００ｒ／ｍｉｎ的转速离心５～１５ｍｉｎ，上清液用０．２２μｍ或 ０．４５μｍ的微孔滤膜过滤，得到的滤液即样品溶液；ｂ 液相色谱分析：高效液相色谱采用的色谱柱为ＺＯＲＢＡＸ ＳＢ－Ｃ１８，４．６×２５０ｍｍ，５μｍ；流动相为０．２％乙酸水溶液－甲醇；采用梯度洗脱方式０ｍｉｎ → ３ｍｉｎ → ５ｍｉｎ →３０ｍｉｎ → ６０ｍｉｎ →７５ｍｉｎ，甲醇５％ →５％ → ３０％→ ５０％ ８０％ →８０％；流速１．０ｍＬ／ｍｉｎ；检测波长２９４±２ｎｍ；柱温３５℃，在此条件下分析样品溶液，得到花生壳的液相指纹图谱；ｃ 标准指纹图谱的确定：测定了２６个品种花生壳样品高效液相色谱指纹图谱并进行比较，得到由其共有峰构成的花生壳高效液相色谱标准指纹图谱，该指纹图谱具有的共有特征峰有１２个，保留时间分别为：１０．５１３ｍｉｎ、１２．２６０ｍｉｎ、１２．９４３ｍｉｎ、１４．３６３ｍｉｎ、１９．６６４ｍｉｎ、２６．６２２ｍｉｎ、３４．７１２ｍｉｎ、３７．４８７ｍｉｎ、４８．３６３ｍｉｎ、４９．４７５ｍｉｎ、５０．４４０ｍｉｎ、５９．１９６ｍｉｎ，这些共有特征峰构成了花生壳的液相指纹特征，是花生壳的标准指纹图谱。...
【技术特征摘要】
1.一种花生壳高效液相色谱指纹图谱建立方法，包括下述的步骤a 待测样品溶液的制备将花生壳去杂、清洗、干燥后粉碎并过40 80目筛，称取过筛后的花生壳粉末8 12g，置于具塞容器中，加入250 350mL甲醇，超声提取30 50min,以3000 4000r/min的转速离心5 15min，上清液用0. 22 μ m或0. 45 μ m的微孔滤膜过滤，得到的滤液即样品溶液；b 液相色谱分析高效液相色谱采用的色谱柱为ZORBAX SB-C18，4. 6 X 250mm, 5 μ m ； 流动相为0. 2%乙酸水溶液-甲醇；采用梯度洗脱方式Omin — 3min — 5min — 30min —60min — 75min，甲醇 5% —5% — 30%— 50% 80% — 80% ；流速 1. OmL/min ；检测波长294士2nm ；柱温35°C，在此条件下分析样品溶液，得到花生壳的液相指纹图谱；c 标准指纹图谱的确定测定了沈个品种花生壳样品高效液相色谱指纹图谱并进行...
【专利技术属性】
技术研发人员：裘纪莹，杜方岭，陈蕾蕾，祝清俊，王文亮，孙欣，刘孝永，
申请(专利权)人：山东省农业科学院农产品研究所，
类型：发明
国别省市：88
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