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飞秒激光诱变吸水链霉菌子囊亚种选育子囊霉素高产菌株方法及培养基制备技术

技术编号:6883303 阅读:425 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
本发明专利技术公开了一种飞秒激光诱变吸水链霉菌子囊亚种选育子囊霉素高产菌株方法及培养基制备;在室温下,取吸水链霉菌子囊亚种(ATCC14891)的成熟斜面孢子用无菌水制成106-107个/ml的单孢子悬浮液;采用中心波长800nm、脉宽150fs、频率76MHz的钛宝石飞秒激光在照射功率10-30mW下,对该孢子液辐照1-10min;孢子液经适当稀释,涂布于固体平板培养,后经摇瓶筛选,从中获得高产子囊霉素突变株。本发明专利技术的优点在于采用的飞秒激光诱变方法易行、操作安全,其诱变效果远较传统的物理化学诱变方法好,在微生物制药菌种选育中有较大的推广价值,本发明专利技术通过利用飞秒激光辐照进行诱变,可选育出高产子囊霉素的突变株。突变株正突变率5-30%,发酵单位比原始菌株提高10-60%。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于微生物
,特别涉及飞秒激光诱变吸水链霉菌子囊亚种选育子囊霉素高产菌株方法及培养基制备
技术介绍
大环内酯类免疫抑制剂是一组新的具有大环内酯结构的免疫抑制剂,经体内外研究证明具有明显的免疫抑制作用,其中包括子囊霉素(ascomycin,FK-520)及其衍生物。子囊霉素是由日本藤泽制药公司从含有吸水链霉菌(Sti^ptomyces hygroscopicus NO.KK317)的土壤中分离得到。它是免疫抑制剂他克莫司(tacrolimus,Π(-506)的乙基类似物,可用于治疗自身免疫性疾病、皮肤疾病及预防器官移植排斥。此外,一系列研究表明子囊霉素还具有抗疟疾、神经保护与再生、抗痉挛等活性。子囊霉素发现之初主要是用于抗菌目的,自从发现它的结构类似物他克莫司具有免疫抑制活性后,迅速推动了子囊霉素及其衍生物的免疫抑制活性的研究。吡美莫司 (pimecrolimus, SDZ-ASM981)系子囊霉素的氯衍生物,商品名Elidel,由瑞士诺华公司开发,2001年被美国食品和药物管理局(FDA)批准吡美莫司乳膏用于2岁以上儿童或成人轻中度特应性皮炎,于2002年在英国首本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种飞秒激光诱变吸水链霉菌子囊亚种选育子囊霉素高产菌株方法,其特征在于包括以下过程:将吸水链霉菌子囊亚种在室温下,取成熟孢子斜面加入适量无菌水,制成106-107个/ml的单孢子悬浮液,将0.2ml的悬浮液分装于无菌的1.5ml的离心管内,采用中心波长800nm、脉宽150fs、频率76MHz的钛宝石飞秒激光在照射功率10-30mW下,对该孢子辐照1-10min,然后把经辐照处理的孢子悬液梯度稀释103-104倍,取稀释后的孢子液0.1ml涂布于固体平板培养基中28℃培养10d,选取生长良好的单菌株接种于斜面培养基28℃培养10d,接适量孢子悬浮液于装有40ml种子培养基的250ml摇瓶中...

【技术特征摘要】
1.一种飞秒激光诱变吸水链霉菌子囊亚种选育子囊霉素高产菌株方法,其特征在于包括以下过程将吸水链霉菌子囊亚种在室温下,取成熟孢子斜面加入适量无菌水,制成 IO6-IO7个/ml的单孢子悬浮液,将0. 2ml的悬浮液分装于无菌的1. 5ml的离心管内,采用中心波长800nm、脉宽150fs、频率76MHz的钛宝石飞秒激光在照射功率10_30mW下,对该孢子辐照Ι-lOmin,然后把经辐照处理的孢子悬液梯度稀释IO3-IO4倍,取稀释后的孢子液0. Iml 涂布于固体平板培养基中培养10d,选取生长良好的单菌株接种于斜面培养基培养10d,接适量孢子悬浮液于装有40ml种子培养基的250ml摇瓶中,28°C、200rpm摇床中培养48h,后接种于装有40ml发酵培养基的250ml摇瓶中,26°C -30°C、180_220rpm摇床中培养144-19 ,从中获得诱变的遗传稳定、发酵...

【专利技术属性】
技术研发人员:闻建平齐海山
申请(专利权)人:天津大学
类型:发明
国别省市:12

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