一种采用正相色谱法纯化丹参酚酸A的方法技术

本发明专利技术基于丹参化学成分的理化性质、色谱行为及其与单元分离技术适应性，提供了一种采用正相色谱纯化丹酚酸A的方法，所述的正相色谱填料为色谱硅胶，粒度100～200目，其中所述的正相色谱操作为：用乙酸乙酯萃取丹参酚酸A水溶液，再浓缩乙酸乙酯萃取液至固含量约20％～30％，再加入丹酚酸A含量2～2.5倍的色谱硅胶，放入旋转蒸发器中减压干燥制成流动性固体样品，将固体样品置于硅胶湿柱顶端。该方法制备的产品质量稳定可控、成本可接受。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种采用正相色谱法纯化丹参酚酸A的方法。
技术介绍
丹参是我国心脑血管病的基本治疗药物，因疗效确切，丹参已成为我国用量最大 (1. 5万吨/年)、销售额最高、制剂生产厂最多的中药(制剂生产厂960家，剂型主要有丹参滴丸、丹参注射液、丹参片、丹参颗粒、丹参冲剂和丹参胶囊)，此外丹参还与其它药材复方，用于肺心病、高脂血症、高血粘度综合征、哮喘、支气管肺炎、肝炎、肝硬化、肾病综合征、 关节炎、糖尿病循环障碍、各种细菌性和病毒性感染、抗内毒素、肿瘤、硬皮病、皮肤炎、银屑病、过敏性紫癜、红斑狼疮、血栓闭塞性脉管炎、痤疮、难治性癫痫、视网膜病变等多种疾病的治疗。丹参的主要有效成分是丹酚酸。现代药理研究表明，丹酚酸是以抗氧化、抗炎(通过NF-κ β途径抑制多种炎性细胞因子表达)为特点、同时具有保护脉管内皮细胞、降脂、 升高高密度脂蛋白、保护心肌缺血缺氧、扩张冠脉血管、改善微循环、抑制血小板聚集、抑制纤维蛋白原合成、激活纤溶、抑制血栓形成、螯合钙铁离子等多种药理作用。在所有已知酚类化合物中(包括黄酮类化合物)丹酚酸类化合物的抗氧化活性最强，其中又以丹酚酸 A(salvianolic acid A，SA)的活性最佳〔《中草药现代研究》II，1996，498-533. Yi Yang Hu et al. ， World JGastroentero,2000 ；6 (3) :402-404. Cheng Hai Liu et al. ， World J Gastroentero,2000 ；6 (3) :361-364. Yun-Lian Lin et al. J. Nat. Prod. 2002,65,745-747. Lin YL et al. . J. Ethnopharmaco1. 2005.Chen YF et al. . J. Chromatogr A.2005 ； 1088(1-2) :140-5. Hsu YC et al. . J Biomed Sci. 2005 ；12(1) :185-95. Lay IS et al.. J Surg Res. 2003 ；115 (2) :279-85. Lay IS et al. . Planta Med. 2003 ；69(1) :26-32. Chen YL et al. . J CellBiochem. 2001 ；83 (3) :484-93. Chen YH et al. . J Cell Biochem. 2001 ； 82(3) :512-21. Hung HH et al. . Histol Histopathol. 2001 ；16(1) :175-83. Wu YJ et al.. ArteriosclerThromb Vasc Biol. 1998 ；18(3) :481-6.〕，但是，丹参中丹酚酸 A 的天然含量及其纯化技术一直制约着丹酚酸A的研发。丹参药材中，主要含丹酚酸B，丹酚酸A的含量约为0.03% 0.06%。在高温处理丹参提取物制备丹酚酸A的技术建立，基本解决了其资源供给后，丹酚酸A的开发利用主要面临批量分离纯化的挑战。但由于丹酚酸A水溶性高、不结晶、共存大量性质相近化合物和拟“胶体”类杂质， 目前文献报道和专利公开的纯化技术或不能批量制备(如葡聚糖疑胶s印hadex LH-20价格高昂、流速低、处理量小；C8或Q8处理量小、寿命短)，或产品达不到安全可控的药用要求，致使丹酚酸A至今没有得到实际应用。根据色谱行为(图1、图2)，丹A待分离体系的化学物质分为四大类1、前沿杂质(主要是以丹参酮为代表的低极性物质)；2、酚酸类杂质(主要是丹参素、原儿茶醛和丹 B) ；3、丹A邻近杂质；4、拟“胶体”类杂质(主要是以在TLC分析中原点处物质为代表的一类杂质)。前沿杂质较容易分离，大孔吸附树脂便可有效实现；酚酸类杂质无论在反相色谱或正相色谱上均具有满足批量制备的分离度(分离度> 2)，分离难度不大，分离丹A邻近杂质本专利技术人也取得了显著的成果，因此，丹A原料药制备所面临的主要问题是拟“胶体”类杂质(主要是以在TLC分析中原点处物质为代表的一类杂质)的分离。拟“胶体”类杂质是从色谱行为上对植物中目前尚未给出明确化学表征的一类物质。该类物质在正相和反相TLC上均主要集中于原点，却又少量全程分布于正相和反相TLC 上；在TLC上没有明确的斑点，在HPLC又无明确的UV吸收峰；在任何极性的洗脱液洗脱时， 都有少量被洗脱。这一独特的行为使拟“胶体”类杂质去除成为天然产物分离纯化关键问题之一，特别是对那些不能结晶的化合物。它的去除与否在很大程度上决定了目标化合物的纯度是否满足药用要求。作为口服制剂，只有在肠道游离的目标化合物才能被吸收，胶体与目标化合物相互作用强，影响生物利用度；作为注射剂，刺激、过敏、凝聚试验和异常毒性均可能与这类物质密切相关。目前，分离拟“胶体”类化合物的相关技术有1、膜分离技术；2、CW反相色谱；3、溶剂萃取；膜分离技术尽管能有效去除拟“胶体”类杂质，但因其属于非切向力分离技术，目标化合物往往与这类杂质有极高亲和力，而导致目标化合物损失严重。此外，膜技术用于这类杂质的分离时，还面临膜孔阻塞和膜寿命的问题。溶剂萃取技术中溶剂的选择性至关重要，效果也不理想。传统的C18反相色谱因使用上样量小、PH范围有限、不能进行有效再生、寿命短、受限于成本等因素，不能广泛使用。因此，丹A工业化生产的制备一直受此制约，因此，迫切需要提供一种新的纯化丹酚酸A的方法，以便更有效的分离丹A拟“胶体”类杂质。
技术实现思路
本专利技术从现有技术中存在的缺陷出发，提供了一种新的采用正相色谱纯化丹酚酸 A的方法。本专利技术提供的采用正相色谱纯化丹酚酸A的方法，所述的正相色谱填料为色谱硅胶，粒度100 200目，其中所述的正相色谱操作为用乙酸乙酯萃取丹参酚酸A水溶液， 再浓缩乙酸乙酯萃取液至固含量约20% 30%，再加入丹酚酸A含量2 2. 5倍的色谱硅胶，放入旋转蒸发器中减压干燥制成流动性固体样品，将固体样品置于硅胶湿柱顶端。优选的，其中所述的正相色谱操作为用乙酸乙酯萃取丹参酚酸A水溶液，再浓缩乙酸乙酯萃取液至固含量约25%，再加入丹酚酸A含量2. 3倍的色谱硅胶，放入旋转蒸发器中减压干燥制成流动性固体样品，将固体样品置于硅胶湿柱顶端。另外，将固体样品置于硅胶湿柱顶端后，依次用8/2或7/3的正己烷/乙酸乙酯， 或者8/2或7/3的正己烷/丙酮，或者95/5或98/2的氯仿/甲醇，或者95/5或98/2的二氯甲烷/甲醇洗脱完杂质，用7/3或6/4的正己烷/乙酸乙酯，或者7/3或6/4的正己烷/ 丙酮，或9/1的氯仿/甲醇，或9/1的二氯甲烷/甲醇洗脱收集丹参酚酸A，最后用6/4或 5/5的正己烷/乙酸乙酯，或者6/4或5/5正己烷/丙酮，或85/15氯仿/甲醇或85/15 二氯甲烷/甲醇洗脱合并的含杂质的丹参酚酸A。。为了取得更优的效果，其中用乙酸乙酯萃取丹参酚酸A水溶液还包括先将丹参酚酸A水溶液减压浓缩后回收乙醇，无醇丹参酚酸A浓缩液再用乙酸乙酯萃取多次，乙酸乙酯与无醇丹参酚酸A浓缩液的体积比为1 (3 幻，再将乙酸乙酯萃取液减压浓缩回收本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种采用正相色谱纯化丹参酚酸Ａ的方法，所述的正相色谱填料为色谱硅胶，粒度１００～２００目，其中所述的正相色谱操作为：用乙酸乙酯萃取丹参酚酸Ａ水溶液，再浓缩乙酸乙酯萃取液至固含量约２０％～３０％，再加入丹参酚酸Ａ含量２～２．５倍的色谱硅胶，放入旋转蒸发器中减压干燥制成流动性固体样品，将固体样品置于硅胶湿柱顶端洗脱。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：何克江，刘珂，韩飞，陈栋，刘军锋，张祁，
申请(专利权)人：山东靶点药物研究有限公司，海南鑫鸿凯实业有限公司，
类型：发明
国别省市：37