一种顶孢霉菌株及顶孢霉菌可湿性粉剂制造技术

本发明专利技术公开了一种顶孢霉菌株Acremonium?hansfordii?Ahy1及顶孢霉菌可湿性粉剂。其中顶孢霉菌可湿性粉剂包括如下重量百分比的组分：顶孢霉菌分生孢子粉10％、润湿剂2％、分散剂5％、紫外保护剂0.8％、稳定剂1％，余量为载体。本发明专利技术在干旱环境下筛选分离获得顶孢霉菌株Ahy1，该菌株所处的地理环境决定了此菌株不同于其它地区来源的菌株，具备抗逆性强的良好特性；同时，经室内和田间药效证明，本发明专利技术的顶孢霉可湿性粉剂对蚜虫具有极强的感染力。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及微生物领域，具体地，涉及一种真菌顶孢霉菌株及顶孢霉菌可湿性粉剂。
技术介绍
由于化学农药的大量使用对环境生态造成了严重的影响，生物防治日益被人们所重视，利用昆虫病原微生物防治害虫是重要的生防手段之一。在昆虫病原微生物中，昆虫的真菌病占据着一个重要地位，在害虫的生物防治中起着非常重要的作用。如我国用布氏白僵菌处理土壤，使花生地的暗黑鳃金龟幼虫虫口下降50 %以上，最高达86. 6%。昆虫病原真菌作为一类宝贵的生物资源，引起了生物学家的高度重视。现在各国研究应用最多的是白僵菌，其次是绿僵菌，赤霉菌、虫生藻菌等。许多昆虫病原真菌已被广泛开发应用于防治农林害虫、卫生害虫、农田杂草等有害生物。虫霉目虫霉科真菌大约有150多种，可寄生32个科的120多种昆虫，寄主幼虫、 蛹、成虫等虫态均可感染，是蝗虫、蝇类、蛾类、蚜虫、蚧类及螨类的主要寄生菌。虫霉科中有10多种虫霉如逸孢霉属、虫霉属、疫霉属、新接合霉属和虫疫霉属真菌等都可引起蚜虫 30% 100%的死亡率。这些真菌对害虫的侵染和流行潜力极强，常引发许多害虫的流行病，在蚜虫等刺吸式口器害虫的自然控制中起着极其重要的作用。因此，开发和利用虫霉目真菌资源用于生物防治具有十分广阔前景。而甘肃省由于大陆性季节气候的影响，造就了干旱少雨、光热丰富、昼夜温差大， 兼具温带季风和大陆气候特征，对引用外来微生物资源带来了一定的限制因素，因此，筛选适合于此种干旱气候的虫霉目真菌资源更显格外重要。另外，虫霉目真菌制剂的研制也是近年来虫霉研究的热点，近年来报道的新方法虽然在工艺设计上考虑了虫霉的生物学特性，但工艺难度大，成本高，而且后续干燥和保存的难度较大，如海藻盐作为包埋基质虽有许多优点，但存在保水性差、助剂易渗漏、易失水干燥、不利于菌株孢子再复水萌发、机械强度差以及胶球粘连等缺陷。因此，进一步研究寻找优良的虫霉目真菌添加成分或其它材料用于虫霉目真菌菌株加工，提高菌株产孢或感染能力是研发应用的关键。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有真菌微生物在防治技术中的上述缺陷，提出一种适应干旱环境的顶孢霉菌株，该菌株对蚜虫有较强感染力。本专利技术的另一个目的是提出一种利用上述菌株经发酵生产产生的孢子粉辅以相应助剂制成的顶孢霉菌可湿性粉剂，该制剂该制剂主要施用在蔬菜和果树上防治甘蓝蚜和桃蚜。实现上述目的的技术方案如下一种顶孢霉菌株，该菌株分类命名为Acremonium hansfordii Ahyl，目前该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)保藏，登记入册的编号为 (CGMCCNo. 2278)，保藏日期是2007 年 12 月 03 日。经鉴定，该菌株具有下述性质1、形态特征菌落绒毛状，白色后变成桃红色，潮湿，有刺激性气味；菌落生长较快，25°C下IOd 直径5. 5 6. 8cm ；背面黄色、土黄色至棕色。分生孢子梗稀缺，产孢细胞直立，单生，直接着生于菌丝细胞上，产孢细胞透明，无色，光滑，多数长9. 0 30. 2 μ m,基部膨大渐尖呈长瓶形，宽2. 1 5. 4 μ m，基部有隔膜。分生孢子纺锤形，光滑透明，6. 5 9. 8 X 2. 0 3. 2 μ m， L/B 2. 7 4. 3。多形成粘孢团，少数形成干燥的短链，大量孢子聚集产生微弱的红棕色。2、培养特征顶孢霉菌Ahyl生长和产孢的最佳碳源为木糖，菌丝生物量和产孢量分别为 1. 806mg/mL和7. 061 X 10"6个孢子/mL ；最佳氮源为尿素，其菌丝体含量和产孢量分别为 0. Mang/mL和54. 07\10~6个孢子/11^;最适于顶孢霉菌菌丝生长和产孢的(/^为10 1。 液体培养至6 7d时，菌丝生物量和产孢量均达到高峰，因此液体发酵终止时间应选择在接种后6 7d。顶孢霉菌株Ahyl加工工艺一级固体培养最适培养基为麦麸培养基，最佳培养时间为6d ；二级液体振荡培养的最适接种液为马铃薯 糖培养液，以120r/min振荡培养 (25士 1) °C，3d ；三级产孢培养介质为低值陈米，初步获得孢子粉，孢子含量为5. 8X1010孢子/g，含水量6 %，活孢率93.5%。3、生理生化特性上述的顶孢霉菌Ahyl来源为对甘肃省虫生真菌资源调查，从自然感病的桃蚜幼虫上筛选出的对蚜虫感染力较强一种菌株。该菌株产生纺锤形分生孢子，形成粘孢团或干燥的短链，分生孢子梗稀缺，长瓶状的产孢细胞生于菌丝上，无分枝。孢子脱落后顶部形成明显增厚的瘢疤等特征。菌株分生孢子萌发的最适温湿度组合为温度20°C、湿度90%以上，最适生长和产孢的温度为20°C，最适pH值范围是7. 0 10. 0，紫外线对孢子有很强的杀伤作用，明暗交替有利于其生长和产孢。葡萄糖、蔗糖、蛋白胨有利于Ahyl菌落的生长和产孢；适宜培养基为萨氏培养基(SDAY)和萨氏蛋黄培养基(SEA)培养基是Ahyl菌株生长最有利的培养基。顶孢霉Ahyl菌株加工中一级固体最适培养基为玉米粉麦麸培养基，培养时间为6 天；马铃薯-糖培养液振荡培养三天为二级液体培养，最适培养条件为25 士 1°C，120r/min ； 三级产孢培养介质为低殖陈米，获得的孢子粉，孢子含量为5. 8 X 1010个/g，含水量6%，活孢率93. 5%0另外，本专利技术通过筛选与顶孢霉菌株孢子生物学相容的助剂，初步选定适合该菌制剂生产的载体为碳酸钙和膨润土 ；润湿剂为十二烷基苯磺酸钠和十二烷基硫酸钠；分散剂为木质素磺酸钙和木质素磺酸钠；紫外保护剂为荧光素钠和抗坏血酸，稳定剂为黄原胶寸。即本专利技术的顶孢霉可湿性粉剂，包括如下重量百分比的组分包括如下重量份数的组分顶孢霉菌分生孢子粉10%、十二烷基苯磺酸钠或十二烷基硫酸钠2%、木质素磺酸钙或木质素磺酸钠5 %、荧光素钠或抗坏血酸0.8%、黄原胶1 %，余量为碳酸钙或膨润土。加工的10%顶孢霉孢子可湿性粉剂的含孢量达5. 8X 108个孢子/g、含水量1. 7 %、悬浮率达82. 、细度93. 62%过220目筛、湿润时间136. Ols0该制剂主要施用在蔬菜和果树上防治甘蓝蚜和桃蚜。进一步地，优选如下重量百分比的组分顶孢霉菌分生孢子粉10%、十二烷基苯磺酸钠2 %、木质素磺酸钙或木质素磺酸钠5 %、抗坏血酸0.8%、黄原胶1 %，余量为碳酸钙。与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果1、关于顶孢霉菌株的杀虫活性在国内少有报道，且仅见于线虫上，对其它害虫的防治效果的研究在国内尚属空白。本专利技术在干旱环境下筛选分离获得顶孢霉菌株Ahyl， 该菌株所处的地理环境决定了此菌株可能不同于其它地区来源的菌株，具备抗逆性强的良好特性；同时其对蚜虫感染力强，对人畜安全，对天敌昆虫无害，选择性高，对生态系统影响小，不易产生抗药性，对于丰富我国真菌杀虫微生物资源，开发适宜于干旱条件下生产和应用的虫生真菌微生物杀虫剂，保护生态环境具有十分重要的意义。2、本专利技术通过对顶孢霉菌助剂的筛选，获得了性能稳定的真菌微生物杀虫制剂。 10%顶孢霉可湿性粉剂使用剂量为100-200倍时对桃蚜具有较好的防效和持久性。试验期间，对其它非靶标生物无不良影响，各处理区果树和蔬菜生长正常，制剂中所选助剂均是生物或低毒助剂。10%顶孢霉孢子粉可湿粉剂对蚜虫具有良好的控制能力，本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种顶孢霉菌株，其特征在于，该菌株分类命名为Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍｈａｎｓｆｏｒｄｉｉ　Ａｈｙ１，由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏号为ＣＧＭＣＣＮｏ．２２７８。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：沈慧敏，张新虎，张海英，宋丽雯，李莉，张莉，田大伟，杨顺义，
申请(专利权)人：甘肃农业大学，
类型：发明
国别省市：62