一种增强的磁珠法核酸提取方法技术

当前的磁珠法核酸提取方法有两方面不足：首先是RNA的提取效率较低；其次是核酸提取步骤繁多，裂解与结合分为两步，磁珠在裂解完成之后才能加入溶液中结合核酸，不利于全自动化应用。本发明专利技术提供一种增强的磁珠法核酸提取方法，其特征在于核酸提取仅需4个步骤，分别是裂解与结合、清洗1、清洗2、洗脱，而前3个步骤都通过加入异丙醇增强了溶液中磁珠吸附核酸的作用，从而增强了磁珠法核酸提取的效率，在应用于RNA提取时提供了一种高效提取RNA的方法。本发明专利技术的特征还在于，裂解与结合一步完成，在应用于自动化核酸提取时每一步骤的反应试剂可以预先灌装入该步骤对应的反应舱内，使本发明专利技术更适用于全自动化应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，涉及，具体涉及一种通过异丙醇增强溶液中磁珠吸附核酸的作用从而增强核酸提取效率、以及通过核酸提取的裂解与结合步骤一步完成从而增强全自动化应用程度的磁珠法核酸提取方法。
技术介绍
核酸包括脱氧核糖核酸(RNA)和核糖核酸(DNA)两类，已知核酸是一切生物体的遗传物质，在细胞主要存在于细胞核内，在病毒存在于病毒衣壳内。细胞是生物体的结构和功能的基本单位，已知除病毒之外的所有生物均由细胞所组成，但病毒生命活动也必须在细胞中才能体现。以核酸为研究对象的生物技术，包括对核酸的提取、克隆、扩增、检测、测序等一系列技术，近年来飞速发展，这些技术目前不仅在研究单位使用，而且在社会生活中多个职能部门已经广泛应用。而核酸研究的第一步，就是从各种生物样品中提取核酸，核酸提取的效率成为下游核酸研究能否成功的制约因素。由于核酸提取的重要地位，科学家开发了一系列核酸提取方法，包括用酚/氯仿等有机溶剂抽提的传统方法、操作简便但DNA纯度低的螯合树脂法、目前已经基本淘汰的玻璃粉吸附法、当前主流的硅胶膜吸附柱法、抗DNA单克隆抗体的免疫亲和法、自动化平台广泛应用的磁珠法核酸提取方法等等。磁本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种增强的磁珠法核酸提取方法，其特征在于，它包括步骤：（１）裂解与结合：将“Ｎ”μｌ生物样品（１０≤“Ｎ”≤２０００）加入到包含“２Ｎ”μｌ裂解液、“０．２５Ｎ”μｌ蛋白酶Ｋ溶液、“Ｎ”μｌ磁珠－异丙醇溶液（０．３～０．７ｍｇ磁珠溶于１００μｌ异丙醇）的１．５ｍｌ离心管中，充分混匀，室温放置８～１０ｍｉｎ，使细胞、病毒裂解并释放其中的核酸、蛋白质，蛋白质在蛋白酶Ｋ的作用下降解，游离的核酸在裂解液中高浓度盐和异丙醇作用下吸附到磁珠表面，最后通过磁力作用使离心管内磁珠紧贴于离心管壁，吸弃离心管内溶液；（２）清洗１：在离心管内加入“４Ｎ”μｌ含异丙醇的洗涤液Ａ（“２Ｎ”μｌ洗涤液Ａ＋“２Ｎ”μｌ...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：薛昱，
申请(专利权)人：薛昱，
类型：发明
国别省市：86