本发明专利技术涉及一种用于检测津优36号黄瓜杂交种子纯度的引物序列及检测方法，该引物序列由上游引物和下游引物组成，上游引物是序列表中SEQ?ID?NO.1所述的核苷酸序列，下游引物是序列表中SEQ?ID?NO.2所述的核苷酸序列。本发明专利技术具有快速、简便、稳定、可靠、低成本、不受环境条件影响等优点，对津优36号黄瓜杂交种子纯度进行鉴定只需要5-6小时就可以完成一个批次的鉴定。节省了大量人力、地力，鉴定结果快速准确。在黄瓜种子纯度鉴定上具有很大的应用价值。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物
，具体地涉及一种。
技术介绍
种子纯度鉴定是保证种子质量的关键环节。随着育种进程的加快，黄瓜新品种数量不断增加，需要进行品种纯度鉴定的材料量将会越来越大。以往常规的纯度鉴定都是在田间进行，结瓜期由专家到田间观察品种的特征特性及一致性，存在周期长、工作量大、易受环境因素的影响、表型特征会有一定程度偏差等问题，可能影响品种纯度鉴定的准确性， 并直接影响到到良种的推广；此外由于鉴定周期长，当年生产的种子往往要到次年才能销售，造成商机丧失。分子标记技术的诞生，为种子纯度的分子鉴定奠定了技术基础。分子标记可以直接以DNA的形式表现，在生物体的各个组织、各个发育阶段均可检测到，不受季节、环境限制，不存在表达与否等问题。尤其是微卫星(SSR)技术，微卫星DNA数量多且均勻分布在基因组中，具有丰富的多态性，并且微卫星位点检测可以显示纯合子和杂合子，易检测、重复性好、省时，适合于大通量分析。目前黄瓜种子纯度的SSR鉴定方法尚未见报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种用于检测津优36号黄瓜杂交种子纯度的引物序列。本专利技术的另一个目的是克服现有技术的不足，提供一种能快速地检测津优36号黄瓜杂交种子纯度的方法。本专利技术的技术方案概述如下用于检测津优36号黄瓜杂交种子纯度的引物序列，它由上游引物和下游引物组成，所述上游引物是序列表中SEQ ID NO. 1所述的核苷酸序列，所述下游引物是序列表中 SEQ ID NO. 2所述的核苷酸序列。检测津优36号黄瓜杂交种子纯度的方法，包括如下步骤(1)提取津优36号黄瓜杂交种子基因组DNA ；(2)进行PCR扩增在PCR扩增专用薄壁管中加入津优36号黄瓜杂交种子基因组 DNAlO 20ng，再加入序列表中SEQ ID NO. 1所述的核苷酸序列15 30ng、序列表中SEQ ID NO. 2所述的核苷酸序列15 30ng、l倍的含Mg2+的PCR缓冲液、dNTP 2mmol、Taq DNA 聚合酶0.5 1单位，加无菌重蒸馏水至10 μ 1 ；将PCR扩增专用薄壁管放入PCR仪中扩增， 扩增条件为94°C预变性180秒；94°C变性30秒，50_55°C退火30秒，72°C延伸60秒，30个循环；再72°C延伸7min，扩增完成；(3)PCR扩增产物的凝胶电泳分析将扩增产物采用6%变性聚丙烯酰胺凝胶进行电泳分离；在扩增产物中加入变性凝胶上样缓冲液，上样于经30分钟预电泳的变性聚丙烯胺凝胶上，70W恒功率电泳至溴酚兰刚刚到达凝胶的另一端，凝胶经硝酸银染色后在可见光下观察、照相；(4)依据被鉴定样品在凝胶上条带的相对位置，检测津优36号黄瓜杂交种子纯度。本专利技术具有快速、简便、稳定、可靠、低成本、不受环境条件影响等优点，对津优36 号黄瓜杂交种子纯度进行鉴定只需要5-6小时就可以完成一个批次的鉴定。节省了大量人力、地力，鉴定结果快速准确。在黄瓜种子纯度鉴定上具有很大的应用价值。附图说明图1为津优36号黄瓜PCR扩增产物的凝胶电泳图. 具体实施例方式下面结合附图及具体实施例对本专利技术作进一步的说明，下面的实施例可以使本专业技术人员更全面地理解本专利技术，但不以任何方式限制本专利技术。实施例1检测津优36号黄瓜杂交种子纯度的方法，包括如下步骤(1)提取津优36号黄瓜杂交种子发芽36小时后根尖的基因组DNA ；(2)进行PCR扩增在PCR扩增专用薄壁管中加入津优36号黄瓜杂交种子基因组 DNAlOng，再加入序列表中SEQ ID NO. 1所述的核苷酸序列15ng、序列表中SEQ ID NO. 2所述的核苷酸序列15ng、1倍的含Mg2+的PCR缓冲液、dNTP 2mmol、Taq DNA聚合酶0. 5单位， 加无菌重蒸馏水至10μ 1 ；将PCR扩增专用薄壁管放入PCR仪中扩增，扩增条件为94°C预变性180秒；94°C变性30秒，50°C退火30秒，72°C延伸60秒，30个循环；再72°C延伸7min, 扩增完成；(3)PCR扩增产物的凝胶电泳分析将扩增产物采用6%变性聚丙烯酰胺凝胶进行电泳分离；在扩增产物中加入变性凝胶上样缓冲液，上样于经30分钟预电泳的变性聚丙烯胺凝胶上，70W恒功率电泳至溴酚兰刚刚到达凝胶的另一端，凝胶经硝酸银染色后在可见光下观察、照相；(4)依据被鉴定样品在凝胶上条带的相对位置，检测津优36号黄瓜杂交种子纯度。如图1所示，津优36号杂交种子在大约150bp处同时具有箭头1和箭头2所示的条带， 在此位置只有1或者2，或者二者都没有的，不是该品种。实施例2检测津优36号黄瓜杂交种子纯度的方法，包括如下步骤(1)提取津优36号黄瓜杂交种子基因组DNA ；(2)进行PCR扩增在PCR扩增专用薄壁管中加入津优36号黄瓜杂交种子基因组 DNA20ng，再加入序列表中SEQ ID NO. 1所述的核苷酸序列30ng、序列表中SEQ ID N0. 2所述的核苷酸序列30ng、1倍的含Mg2+的PCR缓冲液、dNTP 2mmol,Taq DNA聚合酶1单位，加无菌重蒸馏水至10 μ 1 ；将PCR扩增专用薄壁管放入PCR仪中扩增，扩增条件为94°C预变性180秒；94°C变性30秒，55°C退火30秒，72°C延伸60秒，30个循环；再72°C延伸7min， 扩增完成；(3)PCR扩增产物的凝胶电泳分析将扩增产物采用6%变性聚丙烯酰胺凝胶进行电泳分离；在扩增产物中加入变性凝胶上样缓冲液，上样于经30分钟预电泳的变性聚丙烯胺凝胶上，70W恒功率电泳至溴酚兰刚刚到达凝胶的另一端，凝胶经硝酸银染色后在可见光下观察、照相；(4)依据被鉴定样品在凝胶上条带的相对位置，检测津优36号黄瓜杂交种子纯度。实施例3检测津优36号黄瓜杂交种子纯度的方法，包括如下步骤(1)提取津优36号黄瓜杂交种子基因组DNA ；(2)进行PCR扩增在PCR扩增专用薄壁管中加入津优36号黄瓜杂交种子基因组 DNA15ng，再加入序列表中SEQ ID NO. 1所述的核苷酸序列20ng、序列表中SEQ ID NO. 2所述的核苷酸序列20ng、1倍的含Mg2+的PCR缓冲液、dNTP 2mmol、Taq DNA聚合酶0. 8单位， 加无菌重蒸馏水至10μ 1 ；将PCR扩增专用薄壁管放入PCR仪中扩增，扩增条件为94°C预变性180秒；94°C变性30秒，55°C退火30秒，72°C延伸60秒，30个循环；再72°C延伸7min, 扩增完成；(3)PCR扩增产物的凝胶电泳分析将扩增产物采用6%变性聚丙烯酰胺凝胶进行电泳分离；在扩增产物中加入变性凝胶上样缓冲液，上样于经30分钟预电泳的变性聚丙烯胺凝胶上，70W恒功率电泳至溴酚兰刚刚到达凝胶的另一端，凝胶经硝酸银染色后在可见光下观察、照相；(4)依据被鉴定样品在凝胶上条带的相对位置，检测津优36号黄瓜杂交种子纯度。津优36号黄瓜杂交种子由天津科润农业科技股份有限公司出售。本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．用于检测津优３６号黄瓜杂交种子纯度的引物序列，其特征是它由上游引物和下游引物组成，所述上游引物是序列表中ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１所述的核苷酸序列，所述下游引物是序列表中ＳＥＱＩＤ ＮＯ．２所述的核苷酸序列。
【技术特征摘要】
1.用于检测津优36号黄瓜杂交种子纯度的引物序列，其特征是它由上游引物和下游引物组成，所述上游引物是序列表中SEQ ID NO. 1所述的核苷酸序列，所述下游引物是序列表中SEQID NO. 2所述的核苷酸序列。2.检测津优36号黄瓜杂交种子纯度的方法，其特征是包括如下步骤(1)提取津优36号黄瓜杂交种子基因组DNA；(2)进行PCR扩增在PCR扩增专用薄壁管中加入津优36号黄瓜杂交种子基因组 DNAlO 20ng，再加入序列表中SEQ ID NO. 1所述的核苷酸序列15 30ng、序列表中SEQ ID NO. 2所述的核苷酸序列15 30ng、l倍的含Mg2+的PCR缓冲液、dNTP ...
【专利技术属性】
技术研发人员：张桂华，杜胜利，王全，崔兴华，李鹏宇，李加旺，韩毅科，魏爱民，刘楠，
申请(专利权)人：天津科润农业科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：12
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