巣式ＰＣＲ法扩增ＥＧＦＲ基因外显子２１片段的方法技术

本发明专利技术涉及分子生物学领域，公开了一种用巣式ＰＣＲ法扩增中ＥＧＦＲ基因外显子２１片段的方法。步骤包括：（１）第一轮ＰＣＲ扩增，以血浆ＤＮＡ或石蜡切片ＤＮＡ为模板，扩增２５～３５个循环，所用的引物为：Ｃ２１Ｆ和Ｃ２１Ｒ；（２）第二轮ＰＣＲ扩增，以步骤（１）的第一轮ＰＣＲ扩增产物为模板，扩增２５～３５个循环，所用的引物为：２１Ｆ和２１Ｒ。经过上述方法扩增所得到的ＤＮＡ片段可满足测序的要求；扩增的产物经过序列分析，判断突变情况。本发明专利技术通过第一轮扩增，提高了含有目的片段的模板ＤＮＡ浓度，可提高ＥＧＦＲ基因外显子２１的扩增效率。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
巣式ＰＣＲ法扩增　ＥＧＦＲ基因外显子２１片段的方法，其特征在于，包括如下步骤：　　（１）第一轮ＰＣＲ扩增，以血浆ＤＮＡ或石蜡切片ＤＮＡ为模板，扩增２５～３５个循环，所用的引物为：　　Ｃ２１Ｆ：５＇－ＡＧＣＡＧＣＧＧＧＴＴＡＣＡＴＣＴＴＣ－３＇，　　Ｃ２１Ｒ：５＇－ＣＴＣＣＴＴＡＣＴＴＴＧＣＣＴＣＣＴＴＣ　－３＇；　　第一轮ＰＣＲ扩增的条件和步骤为：Ａ．　９４～９６℃预变性４～６ｍｉｎ；　Ｂ．　９３～９５℃变性２０～４０ｓ，５９～６１℃退火２０～４０ｓ，７１～７３℃延伸２０～４０ｓ，２５～３５个循环；Ｃ．　然后７１～７３℃延伸５～１０ｍｉｎ；　　（２）　第二轮ＰＣＲ扩增，以步骤（１）产物为模板，...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：吴奇涵，蔡燕燕，顾海英，
申请(专利权)人：华东师范大学，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]