本发明专利技术公开了一种蛭弧菌游泳体在制备防治大菱鲆红嘴病菌剂中的应用，所述蛭弧菌为蛭弧菌（Ｂｄｅｌｌｏｖｉｂｒｉｏ ｓｐ．）ＢＤＭ０１，该菌剂的应用方法为向水体中泼洒防治大菱鲆红嘴病菌剂，使水体中蛭弧菌游泳体终浓度为１０－１０７ｐｆｕ／ｍＬ，或者将饲料用防治大菱鲆红嘴病菌剂浸泡１５～４５ｍｉｎ，菌剂中蛭弧菌游泳体浓度为１０－１０７ｐｆｕ／ｍＬ，本发明专利技术所述蛭弧菌游泳体在制备防治大菱鲆红嘴病菌剂中的应用能有效预防和治疗大菱鲆红嘴病，在水产动物养殖的应用中安全性好，环保、不产生病原菌抗性，应用前景良好。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物
，涉及一种菌类的应用，特别涉及蛭弧菌蛭质体在制 备防治大菱鲆红嘴病菌剂中的应用。
技术介绍
大菱鲆(Scophthalmus maximus)是原产于欧洲的一种名贵鲆鲽类，隶属于鲽形目，鲆科，菱鲆属。主要分布于大西洋沿岸、北海、黑海及地中海一带。由于它具 有适应低水温生活，生长速度快，肉质鲜美，容易接受人工饲料，易于集约化养殖等优 点，相继成为欧洲及南美智利等许多国家的主要养殖开发对象。自1992年大菱鲆被引 入我国以来，其养殖已从山东快速辐射到北方沿海各省，成为我国海水养殖的一个支柱 产业，取得了良好的社会和经济效益。然而，随着养殖规模的不断扩大，大菱鲆的疾病 问题日渐突出，大规模死亡现象频繁发生，药物残留问题也日渐严重，给大菱鲆养殖业 的健康发展带来极为不利的影响。红嘴病就是其中一种，给养殖业者造成了惨重的经济 损失。红嘴病的主要症状表现为病鱼吻端及腹面上颂出血，部分鱼鳃盖有出血的溃 烂小凹洞，口腔内出血，部分病鱼眼睛肿大突出、挑破外膜内有大量脓液，肠道充血无 食物，肠道末端有少量粘稠液体，肝脏充血、色暗淡呈糜散状，脾脏肿大发红。在治疗 过程中，养殖户为追求经济效益，胡乱用药等现象时有发生，致使农药残留问题日趋严 重。目前，防止病害主要的方法是采用的杀菌消毒药物，但其本身存在着诸多缺点，如 抗生素的使用导致的耐药性及药物残留，2006年发生的大菱鲆呋喃类药物药残事件就非 常具有代表性。因此，如何进行健康养殖，便成为的水产界亟待解决的问题。蛭弧菌是寄生于其他细菌，并能导致宿主细菌裂解的一类细菌。比一般细菌 小，能通过细菌滤器，有类似噬菌体的作用。单细胞，呈弧形或逗点状，有时呈螺旋 状，大小0.2-0.6X0.8-1.2微米，端生鞭毛，多为一根。革兰氏染色呈阴性，可裂解致病 或潜在致病性细菌。蛭弧菌的生活史分两个阶段自由生活，能运动，不进行增殖的游 泳体阶段和在特定宿主细菌的周质空间内进行生长繁殖的蛭质体阶段。蛭弧菌在游泳体 阶段，识别并与宿主发生不可逆结合，然后侵入宿主。蛭弧菌蛭质体则是蛭弧菌在特定 宿主细菌的周质空间内进行生长繁殖的形式。蛭弧菌进入宿主菌细胞周质空间后，主要 通过降解宿主细胞的大分子成为单体，然后摄入用于其生物大分子的合成。随着细胞增 殖和水解酶产生，使宿主细胞壁被破坏，从而裂解释放出蛭弧菌。蛭弧菌游泳体是指蛭弧菌侵入宿主细菌前的生长形式。蛭弧菌游泳体侵入宿主 细菌的过程非常快，一般几秒钟内即可完成。相对于蛭弧菌蛭质体而言，虽然存在着 制备繁琐、不易保存的弱点，但用蛭弧菌游泳体控制和消除养殖池中的致病菌具有起效 快、活力强的优点。这些优点使得蛭弧菌游泳体同样适合作为抑止或清除生物体及其环 境中致病菌的生物净化因子，从而克服了抗生素滥用带来的副作用。
技术实现思路
为了克服鱼类养殖中滥用抗生素导致各种食品安全问题的不足之处，本专利技术提 供一种蛭弧菌游泳体在制备防治大菱鲆红嘴病菌剂中的应用。本专利技术通过以下技术方案实现蛭弧菌游泳体在制备防治大菱鲆红嘴病菌剂中的应用。所述蛭弧菌游泳体的制备方法为接种宿主于营养肉汤液体培养基中，在35°C和 200rpm摇床培养12h，培养液经4°C，5000 8000rpm离心10 20min后，沉淀加入至 DNB液体培养基中，接入蛭弧菌BDM01，在温度25 35°C下，以150 300rpm摇床培养 36 48h，得到含蛭弧菌蛭质体和蛭弧菌游泳体的培养液，培养液在4°C温度下以6000 8000rpm离心15 20min后，上清经16000 18000rpm离心15 20min后，沉淀用DNB 液体培养基、水、生理盐水或0.2mol/LpH值为7.2 7.6的磷酸盐缓冲液悬浮，得到浓度 为IO6 109pfo/mL的蛭弧菌游泳体菌液，该菌液即为防治大菱鲆红嘴病菌剂。所述蛭弧菌为蛭弧菌(Bdellovibrio sp.) BDMOl，于2008年4月28日保藏于中国 典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO : M208066。所述蛭弧菌游泳体在制备防治大菱鲆红嘴病菌剂中的应用是向水体中泼洒防治 大菱鲆红嘴病菌剂，每次换水之后向水体中均勻泼洒菌剂，使水体中蛭弧菌游泳体终浓 度为 10-107pfu/mL。所述蛭弧菌游泳体在制备防治大菱鲆红嘴病菌剂中的应用是将饲料用防治大菱 鲆红嘴病菌剂浸泡15 45min，菌剂中蛭弧菌游泳体浓度为10-107pfu/mL，每天投饲料 三次，早、中、晚各一次(7:00，12:00, 17:00),每次投喂过程持续30min。日投饵量与 鱼平均体重的质量分数的4%，洒遍全池。蛭弧菌BDMO1由蛭弧菌BDJO1 (CCTCC M 208011)进行紫外诱变得到，对其进行负染后于电子显微镜下形态观察蛭弧菌BDMOl呈单细胞，弧形，大小为 1.7X1.0ym,端生鞭毛，鞭毛长度为3.5μιη;将其以双层平板法于28°C培养三天可形成 直径3-4mm的透明圆形噬菌斑。本专利技术相对于现有技术，具有如下的优点及效果1、本专利技术所述的蛭弧菌游泳体在制备防治大菱鲆红嘴病菌剂中的应用能有效预 防和治疗大菱鲆红嘴病。如表1-2所示，本专利技术中所述的蛭弧菌游泳体在制备防治大菱鲆红嘴病菌剂中 的应用能有效降低大菱鲆患红嘴病的概率，在治疗红嘴病上效果显著，与常规的使用抗 生素的方法相比，它是一种绿色环保的方法。大菱鲆红嘴病系一种细菌性疾病，细菌性疾病以气单胞菌(Aeromonas)、假单胞 菌属(Pseudcmmonas)、弧菌属(Vibrio)中的某些菌种为主要病原菌。蛭弧菌具有类噬菌 体的作用，它对鱼类常见致病菌有裂解作用，能起到消除水体致病菌的作用。另外，蛭 弧菌对水中的氨氮也有一定的降解作用，可以净化水体，提高透明度，对防治鱼类疾病 有一定作用。因此，蛭弧菌可用于大菱鲆红嘴病的预防及治疗。2、本专利技术所述的蛭弧菌游泳体在制备防治大菱鲆红嘴病菌剂中的应用在水产动 物养殖的应用中安全性好。3、本专利技术所述的蛭弧菌游泳体在制备防治大菱鲆红嘴病菌剂中的应用有效、环保、不产生病原菌抗性，应用前景良好。具体实施措施下面结合实施例对本专利技术作进一步详细的描述，但本专利技术的实施方式不限于 此。实施例1菌剂的制备使用的蛭弧菌菌株为蛭弧菌BDM01。所述蛭弧菌(Bdellovibriosp.)BDMOl于 2008年4月28日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO M 208066 ； 对其进行负染后于电子显微镜下形态观察蛭弧菌BDMOl呈单细胞，弧形，大小为 1.7X1.0ym,端生鞭毛，鞭毛长度为3.5μιη;将其以双层平板法于28°C培养三天可形成 直径3-4_的透明圆形噬菌斑。在装有IOOmL普通营养肉汤(NB)培养基(蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化钠 5g，蒸馏水lOOOmL，pH7.4)的锥形瓶中接种ImL浓度为109cfu/mL的嗜水气单胞菌 (Aeromonas hydrophila,购于广东省微生物所菌种保藏中心，编号GIM1.172)，200rpm、 28°C摇床培养18小时，培养液分别于4°C、5000rpm离心15min，弃上清。将沉淀加入 到装有IOOmL DNB (dilute nutrie本文档来自技高网...
【技术保护点】
蛭弧菌游泳体在制备防治大菱鲆红嘴病菌剂中的应用。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：蔡俊鹏，鲍星，
申请(专利权)人：华南理工大学，
类型：发明
国别省市：81
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。