特定融合疫苗的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种特定融合疫苗的制备方法，依次包括①用ＰＣＲ方法合成靶基因或靶抗原；②将抗原在基因内和／或基因间易位重组；③克隆到表达载体，表达融合抗原；④筛选高效融合抗原克隆；⑤制取特定融合疫苗。本发明专利技术方法新颖、独特，制取的疫苗免疫效果好，能对外来的病原体入侵和自身突变细胞的繁殖和扩散进行免疫预防，还能结合抗原携带细胞为媒介，刺激机体的细胞毒Ｔ淋巴细胞对外来的病原体和自身突变细胞产生有效的免疫治疗作用。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种疫苗的制备方法。
技术介绍
疫苗是一个古老的名词，传统疫苗的概念局限于对体外病原体(如细菌，病毒等)的预防，免于受其感染。由于近年来对肿瘤免疫的突破性进展，治疗性癌症疫苗给癌症患者带来了新的希望。从此，疫苗从它的传统概念中解放出来，不仅用于被动的预防，而且用于主动的治疗了。随着疫苗概念的进展，疫苗的物质基础也随之发生了改变预防性疫苗由原来用灭活病原体作疫苗，发展到合成多肽作疫苗和合成核酸(DNA和RNA)作疫苗。其原理是合成的多肽抗原和核酸抗原直接或间接地刺激机体免疫细胞产生免疫预防作用。无论上述合成性多肽疫苗还是核酸疫苗，大都是针对病原体某一两个蛋白质的已知抗原为目标设计的，虽然较传统的用整个病原体作疫苗来得安全，无毒性和致感染性，所面临的问题是抗原表达率低；效价低。治疗性疫苗目前最大的突破是将上述的多肽或和核酸抗原在体外和机体树状细胞(dendritic cell)先作用，使树状细胞变成所谓抗原携带细胞(antigen presenting cell)，进而刺激机体免疫细胞产生免疫治疗作用。目前已用于癌症和病毒的治疗。但有待进一步突破。即是否能用特定融合疫苗的形式，结合抗原携带细胞为媒介，刺激机体细胞毒T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte)产生更有效的免疫治疗作用呢？
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种免疫效果好的。本专利技术的技术解决方案是一种，依次包括下列步骤①用PCR方法合成靶基因或靶抗原；②将抗原在基因内和/或基因间易位重组； ③克隆到表达载体，表达融合抗原；④筛选高效融合抗原克隆；⑤制取特定融合疫苗。步骤②的具体方法是采用限制性内切酶，将消化的片段再连接，完成重组。上述将抗原在基因内和/或基因间易位重组主要包括1)抗原随意易位重组方法由于靶基因是已知的，可根据重组的要求，按常规方法选用限制性内切酶，将消化的片断再连接，完成重组；2)形式(a)抗原在基因内随意易位重组(如下图所示，+表示抗原决定基，A、B、C、D代表4个不同的抗原决定基)A B基因甲5′＝＝+＝＝＝＝＝＝＝+＝＝＝＝＝3′B A抗原易位 5′＝＝+＝＝＝＝＝＝＝+＝＝＝＝＝3′C D基因乙5′000+00000000+000 3′DC抗原易位 5′000+00000000+000 3′如基因具有两个以上抗原可以类推。(b)抗原在基因内和基因间随意易位重组各易位重组模式如下图所示(如下示意图是是以上两个基因四个抗原为例排列的，如为两个基因和四个抗原以上者，可以类推)A B CD1 5′＝＝+＝＝＝＝＝＝＝+＝＝＝＝＝000+00000000+000 3′A B DC2 5′＝＝+＝＝＝＝＝＝＝+＝＝＝＝＝000+00000000+000 3′ B A CD3 5′＝＝+＝＝＝＝＝＝＝+＝＝＝＝＝000+00000000+000 3′B A DC4 5′＝＝+＝＝＝＝＝＝＝+＝＝＝＝＝000+00000000+000 3′CD A B5 5′000+00000000+000＝＝+＝＝＝＝＝＝＝+＝＝＝＝＝3′CD B A6 5′000+00000000+000＝＝+＝＝＝＝＝＝＝+＝＝＝＝＝3′DC A B7 5′000+00000000+000＝＝+＝＝＝＝＝＝＝+＝＝＝＝＝3′DC B A8 5′000+00000000+000＝＝+＝＝＝＝＝＝＝+＝＝＝＝＝3′A B C9 5′＝＝+＝＝＝＝＝＝＝+＝＝＝＝＝000+0000 3′A B D10 5′＝＝+＝＝＝＝＝＝＝+＝＝＝＝＝000+0000 3′B A C11 5′＝＝+＝＝＝＝＝＝＝+＝＝＝＝＝000+0000 3′B A D12 5′＝＝+＝＝＝＝＝＝＝+＝＝＝＝＝000+0000 3′C D A13 5′000+00000000+000＝＝+＝＝＝＝＝3′C D B14 5′000+00000000+000＝＝+＝＝＝＝＝3′DC A15 5′000+00000000+000＝＝+＝＝＝＝＝3′ DC B16 5′000+00000000+000＝＝+＝＝＝＝＝3′CA B17 5′000+0000＝＝+＝＝＝＝＝＝＝+＝＝＝＝＝3′CB A18 5′000+0000＝＝+＝＝＝＝＝＝＝+＝＝＝＝＝3′DA B19 5′000+0000＝＝+＝＝＝＝＝＝＝+＝＝＝＝＝3′DB A20 5′000+0000＝＝+＝＝＝＝＝＝＝+＝＝＝＝＝3′A CD21 5′＝＝+＝＝＝＝＝000+00000000+000 3′A DC22 5′＝＝+＝＝＝＝＝000+00000000+000 3′B CD23 5′＝＝+＝＝＝＝＝000+00000000+000 3′B DC24 5′＝＝+＝＝＝＝＝000+00000000+000 3′A C B D25 5′＝＝+＝＝＝＝000+0000＝＝＝+＝＝＝＝＝000+0000 3′A D B C26 5′＝＝+＝＝＝＝000+0000＝＝＝+＝＝＝＝＝000+0000 3′B C A D27 5′＝＝+＝＝＝＝000+0000＝＝＝+＝＝＝＝＝000+0000 3′B D A C28 5′＝＝+＝＝＝＝000+0000＝＝＝+＝＝＝＝＝000+0000 3′C A DB29 5′000+0000＝＝＝+＝＝＝＝＝000+0000＝＝+＝＝＝＝3′ C B DA30 5′000+0000＝＝＝+＝＝＝＝＝000+0000＝＝+＝＝＝＝3′D A CB31 5′000+0000＝＝＝+＝＝＝＝＝000+0000＝＝+＝＝＝＝3′D B CA32 5′000+0000＝＝＝+＝＝＝＝＝000+0000＝＝+＝＝＝＝3′A C B33 5′＝＝+＝＝＝＝000+0000＝＝＝+＝＝＝＝＝3′A D B34 5′＝＝+＝＝＝＝000+0000＝＝＝+＝＝＝＝＝3′B C A35 5′＝＝+＝＝＝＝000+0000＝＝＝+＝＝＝＝＝3′B D A36 5′＝＝+＝＝＝＝000+0000＝＝＝+＝＝＝＝＝3′C A D37 5′000+0000＝＝＝+＝＝＝＝＝000+0000 3′C B D38 5′000+0000＝＝＝+＝＝＝＝＝000+0000 3′D A C39 5′000+0000＝＝＝+＝＝＝＝＝000+0000 3′D B C40 5′000+0000＝＝＝+＝＝＝＝＝000+0000 3′A D41 5′＝＝+＝＝＝＝000+0000 3′B C42 5′＝＝+＝＝＝＝000+0000 3′C A43 5′ 000+0000＝＝＝+＝＝＝＝＝3′ D B44 5′000+0000＝＝＝+＝＝＝＝＝3′以上A；B；C和D各抗原位点可以重复，如BBAAACCDD等。各易位重组体也可重复，如DAC-DAR-DB-DB-DB等。各易位重组体也可再重组，如ABCD-DCBA等等。任何重组都要确保能表达正确的蛋白质，即蛋白质阅读框需正确无误。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种特定融合疫苗的制备方法，其特征是：依次包括下列步骤：①用ＰＣＲ方法合成靶基因或靶抗原；②将抗原在基因内和／或基因间易位重组；③克隆到表达载体，表达融合抗原；④筛选高效融合抗原克隆；⑤制取特定融合疫苗。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：朱远源，
申请(专利权)人：朱远源，
类型：发明
国别省市：32[中国|江苏]